液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在蜂蜜獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

賈英杰

上海冠生園蜂制品有限公司（上海 201419）

近年來(lái)，中國(guó)蜂蜜年產(chǎn)量呈現(xiàn)穩(wěn)步上升趨勢(shì)，年消費(fèi)量不斷提升，行業(yè)規(guī)模不斷擴(kuò)大。國(guó)家統(tǒng)計(jì)局?jǐn)?shù)據(jù)顯示，2008年全國(guó)蜂蜜產(chǎn)量38.47萬(wàn) t，2013年為43.66萬(wàn) t，2017年為54.25萬(wàn) t，其中2017年天然蜂蜜出口數(shù)量12.93萬(wàn) t，蜂蜜產(chǎn)量不斷攀升，反映消費(fèi)端旺盛的蜂蜜需求，隨著消費(fèi)量不斷增加，蜂蜜作為天然的健康產(chǎn)品，影響日趨擴(kuò)大，引起監(jiān)管部門和消費(fèi)者對(duì)蜂產(chǎn)品行業(yè)的廣泛關(guān)注。

從全球來(lái)看，中國(guó)是養(yǎng)蜂大國(guó)，聯(lián)合國(guó)糧食與農(nóng)業(yè)組織統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，2017年中國(guó)養(yǎng)蜂規(guī)模達(dá)915.6萬(wàn)群，僅次于印度的1 276.4萬(wàn)群，占全球蜂群數(shù)量的10%；從蜂蜜產(chǎn)量來(lái)看，2017年全球蜂蜜產(chǎn)量186.9萬(wàn) t，其中中國(guó)蜂蜜產(chǎn)量占全球的比重近30%，蜂群?jiǎn)萎a(chǎn)蜂蜜量處于世界前列，反映中國(guó)整體的蜜蜂飼養(yǎng)技術(shù)處于較高水平。從養(yǎng)蜂產(chǎn)業(yè)模式來(lái)看，歐美發(fā)達(dá)國(guó)家通過(guò)養(yǎng)蜂授粉實(shí)現(xiàn)增產(chǎn)的現(xiàn)象較為普遍，中國(guó)養(yǎng)蜂多以生產(chǎn)蜂蜜等蜂產(chǎn)品為主。從全球情況來(lái)看，中國(guó)養(yǎng)蜂技術(shù)水平較高，這與養(yǎng)蜂過(guò)程中的精細(xì)化管理分不開，這種情形帶來(lái)單產(chǎn)較高的同時(shí)，也會(huì)帶來(lái)一些負(fù)面效應(yīng)，如養(yǎng)蜂過(guò)程中獸藥使用問(wèn)題，加之養(yǎng)蜂環(huán)節(jié)較為分散，養(yǎng)蜂過(guò)程中獸藥的不合理使用對(duì)行業(yè)下游環(huán)節(jié)形成為挑戰(zhàn)。

目前國(guó)內(nèi)外在檢測(cè)蜂蜜中獸藥殘留常見的方法主要有高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[4]、液相色譜法[5]、常規(guī)理化檢測(cè)法[6]、酶聯(lián)免疫法[7-8]、毛細(xì)管電泳法等[9]。

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)是國(guó)內(nèi)外在動(dòng)物源性食品中獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)使用最常見的技術(shù)方法之一[10]。該項(xiàng)技術(shù)能同時(shí)獲得定性、定量的指標(biāo)，而且在實(shí)現(xiàn)獸藥殘留色譜峰分離的情況下，利用各檢測(cè)獸藥化合物物質(zhì)之間質(zhì)荷比的差別進(jìn)行高靈敏度的檢測(cè)。中國(guó)在蜂蜜及蜂產(chǎn)品中獸藥殘留的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中也采用相關(guān)技術(shù)方法。采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜能應(yīng)用于同一類獸藥殘留的檢測(cè)，并能對(duì)不同種類獸藥實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測(cè)[11]。

1 蜂蜜中主要存在的獸藥殘留

蜂蜜中獸藥殘留問(wèn)題主要是因?yàn)槊鄯湓谏L(zhǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)不同的疾病，蜂農(nóng)在養(yǎng)殖過(guò)程中使用或?yàn)E用一些獸藥[1]，獸藥殘留的問(wèn)題嚴(yán)重阻礙中國(guó)蜂產(chǎn)業(yè)發(fā)展，也是國(guó)際貿(mào)易中經(jīng)常面臨的困境之一。

中國(guó)蜂農(nóng)在預(yù)防蜜蜂疾病的常用獸藥主要有硝基咪唑類藥物、氯霉素抗生素、四環(huán)素類抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類藥物、磺胺類、頭孢類、硝基呋喃及其代謝物[2]。這些獸藥因在人體中具有潛在的安全隱患，而且國(guó)內(nèi)外對(duì)獸藥殘留都有制定殘留限度[3]。因此對(duì)蜂蜜中獸藥殘留的檢測(cè)技術(shù)尤為重要。

2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中獸藥殘留的應(yīng)用

2.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中硝基呋喃類藥物殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

因?yàn)橄趸秽愃幬锬軌驅(qū)θ梭w造成不同程度的損害，2002年中國(guó)對(duì)硝基呋喃類藥物實(shí)行禁令。因此蜂蜜產(chǎn)品中硝基呋喃類藥物的檢測(cè)是行業(yè)面臨的問(wèn)題之一。張平安等[12]利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在多反應(yīng)模式下對(duì)蜂蜜中呋喃唑酮進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)使用乙酸乙酯在液-液萃取條件下，可達(dá)0.5 μg/kg；余建新等[13]通過(guò)微量化樣品前處理，對(duì)蜂蜜及水產(chǎn)品中的硝基呋喃類藥物進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)蜂蜜樣品中呋喃唑酮代謝物和呋喃西林代謝物存在污染的可能性。蔣原等[14]通過(guò)液相色譜-電噴霧質(zhì)譜技術(shù)對(duì)蜂蜜中硝基呋喃類藥物進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)Agilent Extend C18色譜柱有較好的分離效果，同時(shí)甲醇流動(dòng)相具有較高的分離度和分辨率。祝偉霞等[15]通過(guò)固相支撐萃取-平行前處理方法，同位素內(nèi)標(biāo)法定量，對(duì)蜂種4種硝基呋喃類藥物進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)通過(guò)使用硅藻土作為固相支撐物能夠?qū)Ψ涿壑械南趸秽愃幬镞M(jìn)行凈化和富集，同時(shí)利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)能夠快速對(duì)食品中的殘留藥物進(jìn)行檢測(cè)。

2.2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中硝基咪唑類藥物殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

張璐等[16]通過(guò)使用在線凈化裝置，利用超高效液質(zhì)聯(lián)用儀器對(duì)蜂蜜中硝基咪唑類藥物進(jìn)行測(cè)定，其建立以Cyclone-P為凈化柱、Hypersil GOLD aQ為色譜分析柱的分析方法，能夠快速有效檢測(cè)出蜂蜜中殘留的硝基咪唑類藥物。劉永明等[17]通過(guò)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)蜂蜜中3種硝基咪唑類藥物進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)使用HLB固相萃取柱能夠富集3種硝基咪唑類藥物，進(jìn)行LC-MS測(cè)定可以達(dá)到國(guó)外硝基咪唑類藥物的檢測(cè)要求。殷局易等[18]對(duì)蜂產(chǎn)品中9種硝基咪唑類藥物進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)乙腈提取后使用MCX固相萃取柱凈化，在蜂蜜和蜂王漿樣品中使用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定其定量限可達(dá)0.5 μg/kg，凍干粉樣品中其定量限可達(dá)1.0 μg/kg。郭少飛等[19]使用乙腈-氯仿-異丙醇體系對(duì)蜂蜜中的硝基咪唑類藥物進(jìn)行提取，使用高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，發(fā)現(xiàn)經(jīng)此方法前處理能夠快速有效地測(cè)定出蜂蜜中3種硝基咪唑類藥物殘留。

2.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

丁濤等[20]利用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜方法對(duì)蜂蜜中19種喹諾酮類藥物殘留進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)比較3種不同固相萃取柱的提取凈化方法，發(fā)現(xiàn)強(qiáng)陰離子固相萃取柱能較好地富集凈化蜂蜜中的藥物殘留，同時(shí)發(fā)現(xiàn)該方法的定量限達(dá)1.0 μg/kg。曹彥忠等[21]通過(guò)使用磷酸鹽緩沖液提取喹諾酮藥物，使用HLB固相萃取柱凈化，建立蜂蜜中14種喹諾酮藥物的檢測(cè)方法，其檢測(cè)限達(dá)1.0 μg/kg。陳曉紅等[22]對(duì)蜂蜜中4種喹諾酮藥物進(jìn)行質(zhì)譜測(cè)定，發(fā)現(xiàn)使用磷酸鹽緩沖液溶解提取喹諾酮藥物，使用MAX固相萃取柱凈化，建立質(zhì)譜方法其檢出限達(dá)到0.5 μg/kg。何強(qiáng)等[23]使用超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)蜂蜜中15種喹諾酮藥物殘留進(jìn)行測(cè)定，其使用C18色譜柱進(jìn)行分離，其建立方法檢出限1.0 μg/kg。

2.4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中磺胺類獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

徐慧等[24]通過(guò)使用CAPCELL PAK C18色譜柱，利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀建立檢出限0.1 μg/kg的17種磺胺類藥物測(cè)定方法。盛雪飛等[25]通過(guò)使用超快速液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)蜂蜜中磺胺類藥物殘留進(jìn)行方法建立，可在短時(shí)間內(nèi)同時(shí)測(cè)定20種磺胺類藥物殘留。李小運(yùn)等[26]使用乙腈快速提取蜂蜜中磺胺類藥物殘留，使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立11種磺胺類藥物殘留快速檢測(cè)技術(shù)，方法定量限2.0 μg/kg。容裕棠等[27]通過(guò)鹽析、胺丙基鍵合硅膠萃取凈化蜂蜜，利用QuEChERS技術(shù)，使用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)蜂蜜中21種磺胺類藥物殘留進(jìn)行快速測(cè)定，方法檢出限為0.12～2.46 μg/kg，達(dá)到快速檢測(cè)要求。

2.5 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中多類別獸藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

王偉等[28]通過(guò)使用QuEChERS方法對(duì)蜂蜜中60種獸藥殘留進(jìn)行質(zhì)譜測(cè)定，發(fā)現(xiàn)使用此前處理方法并用乙腈提取能夠得到較好的回收率。何強(qiáng)等[29]通過(guò)使用HLB和PSA固相萃取柱對(duì)蜂蜜中硝基咪唑類、喹諾酮類、磺胺類藥物進(jìn)行凈化富集，建立超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜方法，其檢測(cè)限達(dá)0.4～4.0 μg/kg。圖雅等[30]使用同位素內(nèi)標(biāo)法，對(duì)蜂蜜中氯霉素和甲硝唑藥物殘留進(jìn)行質(zhì)譜測(cè)定，通過(guò)MCS固相萃取柱凈化，其方法檢出限達(dá)0.05 μg/kg。王建妹等[31]使用HLB固相萃取柱凈化，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析蜂蜜中39種抗生素和25種農(nóng)藥，其建立方法檢出限為0.2～3.8μg/kg。徐瀟穎等[32]利用磁性多壁碳納米管作為固相萃取，使用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)蜂蜜中44種獸藥殘留進(jìn)行測(cè)定，其建立的方法檢出限為0.2～2.0 μg/kg。

3 展望

國(guó)內(nèi)越來(lái)越多標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)開始使用質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)作為內(nèi)在方法之一，同時(shí)國(guó)際上越來(lái)越多國(guó)家建立以高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)現(xiàn)蜂蜜中獸藥殘留能夠更快、更精確檢測(cè)，同時(shí)由于質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，該技術(shù)可更高效檢測(cè)多種獸藥種類，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在蜂蜜檢測(cè)領(lǐng)域中的作用更加凸顯。隨著社會(huì)各方對(duì)食品安全方面投入的不斷加大，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在蜂產(chǎn)品企業(yè)和地方性檢測(cè)機(jī)構(gòu)中將得到越來(lái)越多的應(yīng)用。

解決蜂蜜中獸藥抗生素殘留問(wèn)題，除了監(jiān)管部門的大力監(jiān)管外，還需企業(yè)通過(guò)快速有效的檢測(cè)技術(shù)手段做好蜂原料的篩選工作，并通過(guò)檢測(cè)信息不斷向蜂產(chǎn)品行業(yè)上游進(jìn)行壓力傳導(dǎo)，輔助市場(chǎng)化的原料采收機(jī)制，督促養(yǎng)蜂科學(xué)用藥，通過(guò)各方努力與實(shí)踐，取得較好效果。