抗-Dia新生兒溶血病1例

吳瑾惠，倪修文*，屠佳燕 ，孫健琦

（1.嘉興市中心血站，浙江 嘉興 314001；2.嘉興市秀洲區(qū)婦幼保健院，浙江 嘉興314033）

Diego血型系統(tǒng)在1955年首次被發(fā)現(xiàn)，該血型系統(tǒng)具有多態(tài)性。迄今為止，Diego血型系統(tǒng)內(nèi)已發(fā)現(xiàn)21個抗原，Dia和Dib以及Wra和Wrb是其兩對對偶抗原，此外還有17個低頻抗原，其中Dia、Dib抗原最有臨床意義，可引起輕重程度不等的HDN和溶血性輸血反應(yīng)[1-2]。抗-Dia抗體較為少見，文獻報道較少，本研究旨在分析抗-Dia引起新生兒溶血病（HDN）的血清學(xué)特征，并跟蹤評價光療和輸注免疫球蛋白的臨床治療效果。

1 病例介紹

患兒 男，B型，Rh陽性ccDEE，足月順產(chǎn)，出生后次日出現(xiàn)黃疸，并進行性加重，于2016年10月送至嘉興市中心血站進行血樣檢測。血紅蛋白186g/L，總膽紅素348μmol/L，臨床用光療和免疫球蛋白治療5天后總膽紅素降至156μmol/L，康復(fù)出院。產(chǎn)婦，30 歲，A 型，Rh 陽性 ccDEE，妊娠史 G2P2，末次妊娠產(chǎn)子體健，無黃疸或輸血史。

2 方法

2.1 試劑與儀器 抗-A、抗-B、抗-D、抗-E、抗-e、抗-C、抗-c試劑 （批號：20150815、20151814、20151814、20163202、20163303、20163003、20163102）；ABO 試劑紅細胞（批號：20165335）；抗-IgG+C3d 試劑（批號：201605002）；凝聚胺試劑（批號：20167502）；抗體篩選、國產(chǎn)譜細胞（批號：20167026、20160927）；酸放散試劑（批號：20160912）均由上海血液生物提供；酶處理細胞自制；抗-Dia、抗-Dib試劑由上海市血液中心提供；所有試劑批次均在有效期內(nèi)使用。主要儀器：KA-2200 離心機（日本 KUOTA 2200），電熱恒溫水浴箱（上海躍進醫(yī)療器械有限公司）。

2.2 血型血清學(xué)檢測 （1）紅細胞血型鑒定方法。采用試管鹽水法對患兒及父母的紅細胞進行ABO、Rh、Diego血型鑒定。（2）抗體篩查的方法。產(chǎn)婦血清加三組抗體篩查細胞在鹽水法、凝聚胺法、間接抗人球蛋白（IAT）法中進行，采用不規(guī)則抗體篩查試驗，結(jié)果若陽性則用抗體鑒定譜細胞分別與患兒、母親血清和患兒放散液反應(yīng)，進行不規(guī)則抗體性質(zhì)鑒定。（3）新生兒溶血病檢查。紅細胞直接進行抗人球蛋白（DAT）試驗、游離試驗以及釋放試驗，以明確診斷。

2.3 其他檢測 （1）ABO新生兒溶血病（ABO-HDN）檢測。取Dia-的B細胞與患兒的血清及放散液做間接抗人球試驗，結(jié)果陽性即可證實合并ABOHDN，反之則可排除。（2）采用間接抗人球試驗測定母親血清IgG抗-Dia抗體效價。（3）網(wǎng)織紅細胞（Ret）檢測。對患兒血液熒光染色后進行血常規(guī)檢測。（4）治療后復(fù)查患兒血常規(guī)和肝功能水平。

3 結(jié)果

3.1 血型分析 （1）紅細胞血型及溶血病情況。患兒為 B 型，ccDEE，Dia+b+； 母親為 A 型，ccDEE，Dia-b+；父親為 B 型，CcDEe，Dia+b+。ABO-HDN 檢測陰性。（2）血清溶血三項試驗。患兒DAT試驗結(jié)果陽性（4+w），游離試驗陰性，釋放試驗陽性。

3.2 抗體篩查 母親血清抗體篩選示血清中存在IgG類不規(guī)則抗體。詳見表1。

表1 患兒母親血清抗體篩選結(jié)果

3.3 抗體鑒定 分別用患兒血清、紅細胞放散液與其母親的血清進行抗體鑒定，放散液及母親血清中檢出抗-Dia抗體。IgG 抗-Dia效價為1:32（IAT），患兒抗-Dia新生兒溶血病診斷明確。詳見表2。

3.4 網(wǎng)織紅細胞及療效 患兒Ret為7.0%。經(jīng)光療以及免疫球蛋白治療5天后膽紅素下降。詳見表3。

4 討論

Diego血型是人類血型系統(tǒng)中的一種常見的稀有血型，Diego血型基因定位在17號染色體上。在不同人群頻率差異很大，Diego血型有明顯的種族差異性，Dia幾乎僅限于蒙古人種，在黑種人和白種人中幾乎不存在。漢族人群Dia抗原的表型頻率為5.66%，浙江為4.8%，與西安相同，低于深圳地區(qū)[3-5]。Dia抗原是一個低頻抗原，其抗體產(chǎn)生概率較低，Dia抗體首次由Layrisse[6]于1955年在委內(nèi)瑞拉1例新生兒溶血病的母親血清中發(fā)現(xiàn)并被報道，患兒及其父親紅細胞中檢出Dia抗原，而相對應(yīng)的抗-Dib于1967年被發(fā)現(xiàn)。Diego血型系統(tǒng)的絕大多數(shù)抗原在新生兒期就有強表達，其抗體經(jīng)免疫產(chǎn)生，抗-Dia和抗-Dib屬于IgG里的IgG1和IgG3亞型，須用間接抗人球蛋白試驗才能檢出，抗-Dia和抗-Dib都具有較大的臨床意義[7]。

表2 患兒與母抗體鑒定

表3 患兒各項實驗室指標

新生兒溶血病一般指母嬰血型不合，胎兒從父親方面繼承來的紅細胞抗原恰為母親所缺乏，胎兒紅細胞對母親來說是一種異抗原，當它通過胎盤進入母體后，可以刺激母體產(chǎn)生相應(yīng)的免疫抗體。ABO新生兒溶血病是臨床最常見的HDN，通過溶血病三項試驗可確認。一般ABO-HDN可發(fā)生在第一或第二胎，發(fā)生率約占總分娩數(shù)的0.7%，而ABO以外的HDN絕大多數(shù)發(fā)生在第二胎，需要對患兒紅細胞做放散試驗加以確認。多數(shù)患兒貧血較嚴重，膽紅素水平會快速升高，部分甚至出現(xiàn)水腫。本例母親的血清與抗體篩選細胞在鹽水、凝聚胺介質(zhì)中不凝集，與自身細胞也無反應(yīng)，但在抗人球介質(zhì)中出現(xiàn)陽性，表明母親血清中含有同種不規(guī)則抗體；患兒直接抗人球試驗結(jié)果4+w，提示患兒的紅細胞上被不規(guī)則抗體致敏。對患兒血清、紅細胞放散液，其母親血清進行譜細胞的抗體鑒定，結(jié)果患兒血清結(jié)果為陰性，患兒紅細胞放散液和母親血清均為陽性，對照譜細胞表，抗體鑒定結(jié)果符合抗-Dia抗體格局。患兒血清抗體檢測結(jié)果陰性，推測可能原因是大量的抗體已結(jié)合于其紅細胞表面，血清中游離的抗體低于檢測范圍而導(dǎo)致。從患兒及其父母血型鑒定結(jié)果可見，患兒放散液及其母親血清中檢出抗-Dia抗體與預(yù)期判斷完全符合。此外，Dia陰性的B細胞與患兒的血清及紅細胞放散液反應(yīng)結(jié)果為陰性，可排除患兒合并ABO-HDN。綜上所述，從血清學(xué)結(jié)果上可證實該患兒是由抗-Dia抗體引起的HDN。囿于檢測技術(shù)限制，未對患兒及其家系進行基因分析。

據(jù)國內(nèi)外報道，抗-Dia或抗-Dib導(dǎo)致的HDN臨床表現(xiàn)的嚴重程度不一，其跟抗體的效價有關(guān)[8-10]。研究顯示[11]，患兒母親抗-Dia效價在1:64及以上的新生兒罹患高膽紅素血癥的幾率較高，需換血或用高劑量的丙種球蛋白治療。本例患兒母親的抗-Dia效價為1:32，臨床采用光療和免疫球蛋白治療后，膽紅素下降，效果顯著，無皮疹、發(fā)熱、血尿等輸血不良反應(yīng)。目前臨床產(chǎn)前常規(guī)檢驗主要包括ABO正反定型和RhD檢測，較少開展孕婦血型血清學(xué)檢測，只有在臨床上出現(xiàn)了較嚴重的新生兒高膽紅素血癥時才考慮檢測患兒是否罹患HDN的可能。因此，為預(yù)防和阻止因胎母血型不合而導(dǎo)致的HDN，除產(chǎn)前夫婦ABO血型鑒定外，可把ABO IgG抗體、效價測定及ABO以外的特異性抗體的篩查作為常規(guī)檢查項目，提高新生兒質(zhì)量。