四氫姜黃素對H9c2細胞缺血再灌注損傷的影響及機制研究

馮建梅，馮建宇，吳 巖，翟蒙恩，馮 笑，金振曉，曹 磊

以冠狀動脈支架和冠狀動脈旁路移植術為主的再灌注技術在臨床上已經廣泛應用，但冠狀動脈粥樣硬化性心臟病仍然是世界上多數國家致死的主要原因之一［1］。及時恢復缺血區域血流是減少心肌組織損傷最有效的方案之一，但缺血心肌組織恢復血流后，活性氧（reactive oxygen species， ROS）隨之大量產生，繼而加重心肌細胞凋亡和壞死，這種現象稱為心肌缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，IRI）［2］。 清除缺血再灌注過程中產生的過量自由基是減輕心肌IRI的有效策略之一。四氫姜黃素（tetrahydrocurcumin，THC）是姜黃素在體內的主要代謝物之一，具有多種藥理作用，如抗炎、抗氧化和心肌保護作用［3－5］。 但 THC是否能夠減輕心肌細胞IRI尚未見報道且機制不明。本研究擬于離體細胞水平觀察THC預處理對于H9c2細胞系IRI保護作用并初步探究其可能機制。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

1.1.1 主要試劑 THC、二甲基亞砜（dimethylsulfoxide，DMSO）、脫氧葡萄糖、連二硫酸鈉、乳酸、羥乙基哌嗪乙硫磺酸（2－hydroxyethyl，HEPES）、蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑（Sigma公司）；抗 β－actin、Bax、Bcl－2、Caspase－3 抗體（CST 公司）；羊抗兔、兔抗鼠二抗（北京中杉金橋公司）；二喹啉甲酸（BCA）法蛋白定量試劑盒（Pierce公司）；ROS含量檢測試劑盒（Invitrogen公司）；胎牛血清（Gibco公司）；DMEM（Dulbecco＇s modified Eagle medium）培養液（Hyclone公司）；CCK－8細胞毒性檢測試劑盒（七海生物公司）；丙二醛（malonaldehyde，MDA）試劑盒、超氧化物歧化酶（superoxide dimutase，SOD）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH－Px）試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.1.2 細胞培養 H9c2細胞系購自美國標準菌庫（American Type Culture Collection， ATCC），細胞培養方法如前所述［6］。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞模型的建立 如前所述［7］，缺血液配方為：10 mmol脫氧葡……