黃連素激活核因子E2相關因子／血紅素氧合酶－1增強內皮細胞抗過氧化氫損傷

王 臻，丁 慧，楊 瑞

伴隨著全球人口的老齡化，衰老相關性疾病（特別是累及循環系統的）正日益威脅著人類健康［1］。內皮細胞在維持脈管系統穩態中具有關鍵作用［2］。一旦暴露于有害因素，內皮細胞將產生一系列改變，統稱為內皮功能障礙［3］，這也是許多心血管疾病（如動脈粥樣硬化，高血壓和心力衰竭）發展的主要病理基礎［4－5］。研究表明，氧化應激和內皮功能之間存在相互作用，活性氧（reactive oxygen species，ROS）增加則會導致內皮功能障礙［6］。 核因子E2相關因子（nuclear factor erythroid 2－related factor 2，Nrf2）是重要的抗氧化應激酶，主要通過調節血紅素氧合酶－1（heme oxygenase－1，HO－1）發揮作用［7］。 黃連素（berberine，BBR，圖 1?）是黃連的主要活性異喹啉生物堿成分，具有多效藥理活性，包括抗菌，抗生素，抗炎和抗氧化特性［8］，特別是對心血管系統也有保護作用［9］。現已證明，BBR通過激活 Nrf2／HO－1 發揮神經保護［10－11］及抗內毒素性休克［12］的功效，然而對內皮細胞的作用未見報道。本研究采用人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）為研究對象，利用過氧化氫（H2O2）構建氧化應激條件下的凋亡損傷模型，觀察BBR對其的保護作用及Nrf2／HO－1所扮演的角色，旨在為揭示BBR介導HUVECs抗氧化應激損傷提供新的理論基礎。

1 材料與方法

1.1 主要材料和儀器 HUVECs細胞株（美國）；CCK－8試劑盒（上海）；細胞ROS檢測試劑盒（上海）；末端標記法（TUNEL）（德國）；DAPI（美國）；RPMI－1640培養基和胎牛血清（美國）；BBR和青－鏈霉素雙抗混合液（100×）（北京）；細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒（江蘇）；Nrf2和HO－1抗體（美國）；Cy3標記的山羊抗兔LgG二抗（西安）；核纖層蛋白 B（Lamin B）和 β－肌動蛋白（β－actin）抗體以及Nrf2 siRNA（美國）；辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠和羊抗兔二抗（北京）；……