卒中后抑郁與rs1187929關(guān)聯(lián)分析☆

楊倩 蘇立偉 夏恒磊 徐俊峰 汪文兵

卒中是神經(jīng)內(nèi)科致死致殘率非常高的常見病，其卒中幸存者常常伴有不同程度的殘疾，主要包括軀體功能和精神心理兩方面。精神心理方面以卒中后抑郁較多見，其臨床癥狀主要包括冷漠，易疲勞，無價(jià)值感，睡眠障礙等，不僅延長了卒中患者住院時(shí)間，增加經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，同時(shí)，對后期神經(jīng)功能康復(fù)具有嚴(yán)重負(fù)面影響[1-3]。到目前為止，因?yàn)樽渲泻笠钟簦╬ost-stroke depression,PSD）的發(fā)病機(jī)制仍在研究中，目前的相關(guān)研究提示PSD應(yīng)該是多種因素共同參與導(dǎo)致，而其具體因素包括幾種學(xué)說：卒中部位學(xué)說[4]、卒中面積學(xué)說[5]、神經(jīng)元再生學(xué)說[6-8]、炎性及細(xì)胞因子因子學(xué)說[9]、神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)說[10]、血管性抑郁學(xué)說[11]及社會(huì)心理學(xué)說等等[12]。在這些學(xué)說中，卒中后的神經(jīng)生物學(xué)變化可能是PSD所特異性的，也是目前研究的熱點(diǎn)。有研究提示酪氨酸激酶B及其特異性配體腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子 （brain-derived neurotrophic factor，BDNF）與PSD之間存在具有密切聯(lián)系[13]，既往相關(guān)研究表明TrkB及BDNF與抑郁癥具有相關(guān)性[13-14]。然而，關(guān)于TrkB基因多態(tài)性與PSD之間聯(lián)系的研究少見，我們以此為切入點(diǎn)，采用病例對照研究，通過分析中國皖南地區(qū)漢族人群中TrkB基因的rs118792位點(diǎn)各基因型及等位基因的表達(dá)情況，來探討其與PSD的發(fā)病機(jī)制之間是否存在某種內(nèi)在聯(lián)系。

1 資料與方法

1.1 研究對象入組標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；② 頭顱CT平掃或（和）頭顱MRI平掃確認(rèn)為急性缺血性卒中；③發(fā)病至住院時(shí)間≤7d；④完成6個(gè)月的隨訪及HAMD抑郁量表評分；⑤入組患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往情感障礙，精神障礙病史；②意識(shí)障礙、嚴(yán)重失語、構(gòu)音障礙等及其他無法參與調(diào)查者；③合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者。入組患者為2016年1月至2017年12月于皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的首發(fā)急性缺血性腦卒中患者。研究方案通過醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有入組患者簽署書面知情同意書。初期共223例患者入組，根據(jù)隨訪結(jié)果，最終共190例納入課題研究，33例患者排除在外。其中，因意識(shí)障礙、嚴(yán)重失語、構(gòu)音障礙等及其他原因無法完成6個(gè)月的隨訪及HAMD抑郁量表評分者23例；因合并其他嚴(yán)重軀體疾病者3例；既往有卒中病史者7例。

1.2 PSD診斷標(biāo)準(zhǔn)由接受專業(yè)培訓(xùn)的神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師對所有入組患者進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間為2周和1、3、6個(gè)月，隨訪形式主要為門診及住院隨訪兩種形式，主要通過使用17項(xiàng)漢密爾頓抑郁量表（HAMD）問卷調(diào)查受試者的抑郁狀況。 HAMD抑郁量表評分為7分及以上的受試者由上級醫(yī)師再次進(jìn)行評估確定。HAMD評分≥8分為抑郁組（PSD組），HAMD評分<8分為非抑郁組（NPSD組）[15]。PSD的診斷需符合美國精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)第五版（DSM-V）診斷要求[16]。

1.3 全血DNA提取入組患者知情同意后，由神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師于患者入院次日晨起使用EDTA抗凝管采取靜脈血3mL，采用全血基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）、蛋白酶K，按產(chǎn)品步驟提取全血DNA（試劑盒產(chǎn)自北京百泰克生物技術(shù)有限公司），提取完畢后分裝，于-80℃冰箱保存。

1.4 基因分型應(yīng)用引物設(shè)計(jì)軟件Primer Premier5.0進(jìn)行多態(tài)位點(diǎn)rs118792的引物設(shè)計(jì)，上游引物：5-ATTGTTCAAAAGATCAGGGTTTC-3， 下游引物：5-ACTTACAGTTCAGACAAGTCAAGGTG-3。使用PCR產(chǎn)物純化及Sanger雙脫氧終止測序法完成對rs118792位點(diǎn)測序工作 （部分由博尚生物完成），測序圖片使用Chromas軟件判讀。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并進(jìn)行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)，當(dāng)P>0.05時(shí)，表明符合Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，說明樣本具有群體代表性。兩組基因型及等位基因頻率的比較采用卡方檢驗(yàn)，兩組基因型及等位基因頻率與疾病的相關(guān)分析采用單因素Logistic回歸。檢測水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)χ2=0.131，P=0.718，符合Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，提示遺傳平衡，樣本為同一蒙德爾群體，具有較高的群體代表性。

2.2 PSD的發(fā)生率PSD組78例（男45例，女33例），NPSD 組112例（男60例，女52例），PSD 患病率為41.05%，男性患病率42.86%，女性患病率38.82%，兩性別PSD患病率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.316，P=0.574）。

2.3 rs1778929位點(diǎn)在PSD組與NPSD組中基因分型及頻率比較使用PCR產(chǎn)物純化及Sanger雙脫氧終止測序法進(jìn)行基因分型，見圖1。PSD組基因分型結(jié)果如下：野生純合型（CC）為21例，突變雜合型（CT）為38例，突變純合型(TT)為19例；NPSD組基因分析結(jié)果如下：野生純合型（CC）為48例，突變雜合型（CT）為13例，突變純合型(TT)為19例。兩組間各基因型的分布頻率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.753，P=0.021)。 見表1。

2.4 rs1778929位點(diǎn)在PSD組與NPSD組中等位基因分布頻率比較rs1778929位點(diǎn)在PSD組中C、T等位基因頻率分別為51.28%、48.72%；在NPSD組中C、T等位基因頻率分別為65.63%、34.38%。兩組等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.865，P=0.005）。 見表1。

表1 rs1187929位點(diǎn)各組基因型及等位基因的分布頻率比較

2.5 rs1778929位點(diǎn)各基因型及等位基因與PSD的關(guān)聯(lián)分析rs1778929多態(tài)位點(diǎn)在PSD組中CC型(野生純合型)、CT 型(突變雜合型)、TT 型(突變純合型)所占比例分別是21(26.92%)、38(48.72%)、19(24.36%)；NPSD組中CC型、CT型及TT型所占比例分別48(42.86%)、51(45.54%)、13(11.61%)。 以卒中后抑郁與否作為因變量，分別以基因型及等位基因?yàn)樽宰兞浚捎脧?qiáng)迫引入法進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果表明純合突變型TT（χ2=7.347，P=0.007）及等位基因 T（χ2=7.865，P=0.005）是卒中后抑郁的危險(xiǎn)因素。見表2。

圖1 rs1187929位點(diǎn)各基因型測序峰圖

表2 rs1778929位點(diǎn)兩組間基因型及等位基因與PSD的相關(guān)分析

3 討論

卒中后抑郁是中風(fēng)后常見并發(fā)癥，明顯提高卒中患者死亡率，干擾卒中患者神經(jīng)功能的后期康復(fù)，且具有較高復(fù)發(fā)率[17]。目前，由于在課題設(shè)計(jì)中，因隨訪調(diào)查方式及隨訪時(shí)間的不同，以及卒中后抑郁在識(shí)別、診斷上的復(fù)雜性，卒中后抑郁的真正流行病學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)仍難以界定。既往的研究及薈萃分析提示其發(fā)病率在30%～60%[18-19]，本課題研究數(shù)據(jù)顯示PSD患病率為41.05%，與既往的研究相一致，無明顯區(qū)別。

目前，在中國皖南地區(qū)漢族人群中，研究rs1187323位點(diǎn)基因多態(tài)性與卒中后抑郁風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)的報(bào)道不多。我們的研究提示rs1778929位點(diǎn)基因多態(tài)性與PSD之間具有一定相關(guān)性，PSD組攜帶等位基因T的比例（48.72%)大于對照組（34.37%）,PSD組攜帶突變純合型的比例（24.36%）大于NPSD組（11.61%）。根據(jù)Logistic回歸分析我們發(fā)現(xiàn)rs187929位點(diǎn)中以CC為參照，TT的相對危險(xiǎn)度為3.341，等位基因T相對于等位基因C，相對危險(xiǎn)度為1.814。以上結(jié)果提示rs118792位點(diǎn)與PSD的發(fā)病具有相關(guān)性，其中，TT基因型患病風(fēng)險(xiǎn)是CC基因型的3.341倍，攜帶T等位基因的患病風(fēng)險(xiǎn)是攜帶C等位基因的1.814倍。這些發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證明rs118792位點(diǎn)基因多態(tài)性與PSD患病率之間具有緊密聯(lián)系。

基因多態(tài)性是指基因組上因?yàn)槟硞€(gè)核苷酸的變異而導(dǎo)致DNA序列產(chǎn)生多態(tài)改變，其對于人類基因組計(jì)劃具有重要意義，目前研究提示人體中許多疾病易感性與其具有密切聯(lián)系。而本文提示rs118792位點(diǎn)基因多態(tài)性與PSD之間具有重要聯(lián)系，尤其是攜帶突變等位基因患者，其并發(fā)PSD的概率明顯偏高。雖然關(guān)于rs118792基因多態(tài)性與PSD之間的研究卻不多，但是既往的多項(xiàng)研究提示rs1187929與抑郁或者是其他疾病繼發(fā)抑郁之間存在某種聯(lián)系[20-21]。從我們的研究結(jié)果中，我們必然會(huì)產(chǎn)生一個(gè)疑問：rs118792位點(diǎn)基因多態(tài)性與PSD發(fā)病機(jī)制之間到底有何種聯(lián)系？雖然其對卒中后抑郁患病的影響機(jī)制尚不清楚，但我們都知道我們所研究的rs1187929位點(diǎn)來源于酪氨酸激酶B，眾所周知，酪氨酸激酶B是BDNF特異性受體，BDNF主要與其相結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，且BDNF已被證明在抑郁癥的病理生理學(xué)中起重要作用，神經(jīng)生物學(xué)說也重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)BDNF對PSD的發(fā)生發(fā)展具有重要影響。但是，到目前為止，PSD明確的發(fā)病機(jī)制仍尚不明確。因此，我們可以認(rèn)為rs1778929位點(diǎn)基因多態(tài)性可能是早期識(shí)別卒中后抑郁的候選基因，至于其中明確的發(fā)病機(jī)制，我們可以大膽的假設(shè)，rs1778929位點(diǎn)基因多態(tài)性對酪氨酸激酶B的表達(dá)或其活性有一定影響，從而間接影響到BDNF的生物學(xué)效應(yīng)而導(dǎo)致PSD的發(fā)生。當(dāng)然，是否存在其他機(jī)制目前仍需進(jìn)一步探討。