免疫因子的表達與原發免疫性血小板減少癥的關系

包萃華 烏蘭 楊海平 白圖克 戴玉 趙敬澤 韓澤 劉大海 王琦

免疫性血小板減少性紫癜（Immune Thrombocytopenic Purpura，ITP）是一種是常見的出血性疾病，其發病過程較為復雜，目前尚無統一說法。以往認為是自身免疫介導的血小板被破壞而造成的；但臨床實踐證實，僅60%患者為上述機制造成的，這一結果證實仍存在著其他機制。近年來，有學者認為[1]：調節性T細胞（Treg）可能也參與了ITP的發生發展。輔助性T細胞17（Th17）是一種新型CD4+T細胞亞群，可特異性產生白細胞介素（IL-17），通過誘導中性粒細胞增殖、成熟、趨化，產生促炎性因子，在細胞外感染防御、介導慢性炎癥及自身免疫性疾病發揮作用。正常情況下，Treg細胞與Th17細胞某種程度下可相互轉化，維持動態平衡。一旦平衡不能維持，就發生疾病。CD4+CD25+CD127-/low Treg細胞是Treg的代表細胞，可能與ITP的發病有關。因此，本文就CD4+CD25+CD127-Treg細胞及Th17細胞IL-23與其受體CCL-20形成的軸與ITP發病間的關系進一步研究。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取本院及內蒙古醫科大學第三附屬醫院就診的成人ITP患者45例作為ITP組，其中男性9例，女性36例，年齡28～76歲，平均年齡為（50.8±2.2）歲。選取同期健康成人45例作為對照組，其中男性17例，女性28例，年齡25～72歲，平均年齡為（50.2±2.3）歲。兩組患者的性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），可對比。

納入與排除標準：符合《血液病診斷及療效標準》（張之南編第三版）[2]。

1.2 實驗材料

流式細胞儀（貝克曼庫爾特），低速離心機（TD4），渦旋振蕩器（XK96-A），移液器（20 μL、100 μL、1 000 μL），抗凝采血管（EDTA抗凝或肝素抗凝），流式上樣管，CD3（貨號：555332），CD8（貨號：555388），CD4-FITC（貨號：340133），CD25-APC（貨號：662525），CD127-PE（貨號：351304），IL-17A（貨號：560436）（購自美國BD公司），溶血素BD FACS Lysing Solution（貨號：349202），去離子水。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣本采取全血 使用肝素鈉抗凝的真空采血管采血，8 h內分析完成。

1.3.2 檢測方法 以FC500流式細胞儀檢測外周血CD4+CD25+CD127-Treg細胞；貝克曼FC 500流式細胞儀檢測Th 17細胞；ELISA法檢測血漿中細胞因子IL-23，CCL-20因子。按照試劑盒中推薦的步驟進行操作。

1.4 統計學方法

所有數據均采用統計學軟件SPSS 21.0進行分析處理，計量資料以（）描述，正態分布采用t檢驗，偏態分布采用秩和檢驗；計數資料以（%）表示，采用χ2檢驗；以α＝0.05為檢驗標準，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

ITP組外周血CD4細胞中Th17細胞的比例為（0.84±0.04）%，高于對照組的（0.50±0.02）%，差異有統計學意義（t＝51.000，P＝0.000）。

外周血CD8L-1細胞中，CD8L-1+T細胞、Th17、CD4+CD25+CD127-Treg的比例比較，ITP組分別為：（28.05±4.2）%、（0.84±0.04）%、（1.23±0.38）%，對照組分別為：（47.80±3.10）%、（0.50±0.02）%、（2.90±0.62）%，ITP組CD8L-1+T細胞、CD4+CD25+CD127-比例低于對照組，差異有統計學意義（t=25.380、51.000、15.406，P=0.000、0.000、0.000）。

血漿中，IL-23、CCL-20細胞因子水平比較，ITP組分別為：（62.01±11.08）pg/mL、（7.92±3.80）pg/mL，對照組分別為：（32.01±3.54）pg/mL、（3.27±1.32）pg/mL，ITP組高于對照組（t＝17.301、9.309，P＝0.000、0.000）。

3 討論

ITP的發病機制較為復雜，且目前尚無統一標準，以往較為公認的是由血小板自身抗體導致，但隨著人們ITP的深入研究，很多人們更加傾向于細胞免疫異常。

Treg細胞是一類T細胞亞群，主要用于控制體內自身免疫反應，維持免疫平衡，一旦表達異常時，可導致自身免疫性疾病的發生[3-5]。Treg細胞可通過抑制其他免疫細胞，發揮免疫抑制或無能作用[6-7]。Treg細胞活化后，通過細胞接觸依賴或分泌抑制性因子，發生主動免疫抑制。近年來，研究發現：多種自身免疫性疾病中存在Treg數量和功能異常現象[8-10]。Treg細胞除了表達CD4和CD25外，還特異性表達CD127-，CD4+CD25+CD127-Treg細胞，能夠抑制CD4+和CD8+T細胞的活化和增殖，可控制自體活化的T細胞[11]。如CD4+CD25+CD127-Treg細胞減少，則細胞免疫抑制作用減弱，平衡遭到破壞，機體免疫功能紊亂。黃文燁[12]的研究中，證實：CD4+CD25+CD127-Treg及TGF-β在初發ITP患者中表達低于正常人群，這一觀點與本次研究結果“ITP患者外周血中Treg細胞數減少”相一致，表明Th17細胞在ITP中的高表達，證實Th17細胞在ITP的發生、發展過程中具有重要的作用，這也證實Th17細胞介導的自身免疫性損傷在ITP的發生發展中有著重要的作用。雖然能夠證實Treg細胞、Th17細胞參與了ITP的發生發展，但并不能完全確定，仍需要大量的研究進行驗證。

IL-23是L-12家族的新成員，可與細胞表面IL-23R結合，能夠調節自身免疫功能；還可促進CD4T細胞產生炎性細胞因子IL-17，調節性T細胞（Greg cell）減少，進而參與自免疫性疾病的發展。ccL20也被稱為肝活化調節趨化因子，巨噬細胞炎癥蛋白-3α（MIP-3α）和exodus-1，它在炎癥相關細胞如N（中粒）NK細胞、Th17細胞、B 細胞及其他多種免疫細胞中表達其受體CCR6能調節炎癥和調節性T細胞的遷移，CCR6缺乏的Th17細胞其本身及Treg細胞到炎癥組織受到抑制，而導致ITP的易感性。

總之，關于IL-23、Th17、CD4+CD25+CD127-Treg細胞與CCL-20協同作用參與了ITP的發病，目前尚未在基礎實驗中進行驗證，對于疾病的診斷、治療及預后方面的作用也未進行詳細的驗證，關于上述方面仍需進行深入探討。