Origin軟件在福林-酚試劑法測定蛋白含量實驗數據處理中的應用

陳淑華 李善妮 馬昌杯 朱飛舟 張文 殷淵

摘要：運用Origin軟件對福林-酚試劑法測定蛋白含量實驗進行數據處理分析和制作標準曲線圖，方便、快捷，并且能大大提高實驗結果的準確度，提升實驗教學效果。

關鍵詞：Origin軟件;蛋白質定量;數據處理

中圖分類號：G642.0? ? ?文獻標志碼：A? ? ?文章編號：1674-9324（2019）51-0267-02

蛋白質含量測定法是本科生物化學實驗教學中最常用、最基本的分析方法之一。福林（Folin）-酚試劑法是目前測定蛋白質濃度應用最廣泛的經典方法之一。其原理是采用蛋白質與福林酚試劑反應，生成深藍色復合物，藍色產物的深淺與蛋白質含量成正比。可利用分光光度計在660nm波長下測定相應吸光度，再繪制標準曲線，從而確定蛋白質含量。此法可用于測定樣品中蛋白質濃度的范圍是25—250μg/ml，是生物化學教學中的一個必不可少的基礎實驗[1]。傳統的生物化學實驗教學對數據處理采用手工計算和坐標紙描點作圖，制作的標準曲線可出現多種可能的形式，因而產生人為因素的誤差。

Origin是OriginLab公司研發的專業科研軟件，具有完善的數據分析處理和專業制圖能力。繪制的圖形使較為復雜的數據分析變得簡單快捷且精確，能消除人工處理數據帶來的實驗誤差[2-4]。本文以福林-酚試劑法測定蛋白含量為例，介紹Origin軟件在生物化學蛋白質定量實驗數據處理中的應用。

一、實驗方法

取7支干凈試管，在6支試管中分別吸取250μg/ml標準蛋白質溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，再分別取蒸餾水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml。在第7支試管中僅加入1ml待測樣品。然后在所有試管中加入試劑甲5ml，混勻，室溫放置10min后，再加入試劑乙0.5ml，立即搖勻，顯色30min后，以空白管為對照，測定各管A660值。以A為縱坐標，蛋白質C（濃度）為橫坐標，繪制標準曲線。根據第7管A660計算出樣品的蛋白含量。表1是實驗數據。

二、采用Origin軟件進行數據處理和制圖

1.采用Origin軟件對數據生成散點圖。在電腦上下載并安裝Origin8.0或9.0，打開軟件輸入數據如圖1（左）所示，在新建的表中A（X）一欄輸入各標準蛋白濃度數據，在B（Y）一欄輸入相應標準管A660值。選中所有數據，點擊散點（或工具欄Plot-Symbol-Scatter），生成相應散點圖（見圖1右），并設定濃度為X軸，吸光度為Y軸。

2.運用Origin軟件對實驗數據進行處理分析和制作標準曲線圖。點擊散點圖，選擇Analysis-Fitting-Fit linear-Open Dialogue進行線性擬合并設定截距為0，可得到標準曲線。顯示其斜率為0.00202，R2為0.99728。R2越接近1，表明線性越好。再雙擊X軸或Y軸，在彈出的窗口中，對相應坐標軸的刻度大小和格式進行設定，可得到美觀的標準曲線圖（見圖2）。

根據線性方程y=0.00202x，可知A660=0.00202C。將待測樣品的A660值0.256代入公式，即可計算出C≈126.73μg/ml。

三、采用坐標紙手工描點作圖

傳統的生物化學實驗教學對數據采用手工計算和坐標紙描點繪圖（見圖3）。根據待測樣品A660為0.256，可由標準曲線上查出相應蛋白濃度值約為126μg/ml。經手工描點繪制標準曲線具有很大的主觀隨意性，由此產生人為因素的誤差，這導致最終分析結果的準確度和客觀性均較差，難以達到質控要求。

四、結語

在實驗教學過程中，將Origin軟件處理數據引入生物化學實驗，方便、快捷，并且可大大提高實驗結果的準確度和精確度，能保證結果的科學性、客觀性和直觀性。此舉可激發學生課堂學習的主動性，有助于提升實驗教學效果。同時基于量化的實驗結果使教師在批閱學生的實驗報告時評價更公正和客觀。在大數據背景下，高校教師需不斷改進實驗教學方法，將Origin軟件應用與生物化學實驗數據處理相結合，取代傳統方法處理數據將成為必然趨勢。

參考文獻：

[1]曾衛民，李文凱，傅俊江.生物化學與分子生物學實驗教程[M].北京：科學出版社，2013：95-96.

[2]邢琳，楊威，余林坡，等.Origin軟件在實驗數據及圖形處理中的應用[J].科技視界，2014，（13）：54-55.

[3]譚江成，楊欣，劉瞻，等.物理化學實驗數據處理中Origin軟件的應用[J].廣州化工，2016，（9）：177-179.

[4]閆宗蘭，趙鵬英，王湛.Origin軟件在磷的比色測定實驗數據處理中的應用[J].教育教學論壇，2018，（14）：264-266.