沙棘果油對(duì)酒精引起小鼠骨髓細(xì)胞微核率和肝臟損傷的影響

王 波

(西安文理學(xué)院 生物與環(huán)境工程學(xué)院基因工程實(shí)驗(yàn)室，陜西 西安 710065)

沙棘(Hippophaerhamnoides) 是胡頹子科沙棘屬，是一種落葉性灌木沙棘極耐干旱，在我國(guó)西北部大量種植。近年來，沙棘作為一種藥食同源植物，沙棘產(chǎn)品開發(fā)受到廣泛關(guān)注。沙棘油是沙棘中最有價(jià)值的組分之一，目前對(duì)沙棘油對(duì)調(diào)節(jié)血脂[1]、促進(jìn)微循環(huán)[2]、抗炎、調(diào)節(jié)免疫[3]以及抗癌[4]等方面的報(bào)道。《柳葉刀》雜志最新研究發(fā)現(xiàn)，酒精已經(jīng)成為全球第七大導(dǎo)致早死及致殘因素,并導(dǎo)致肝損傷[5]。隨著酒精攝入量增加，出現(xiàn)健康問題的風(fēng)險(xiǎn)顯著升高。金艷花等人發(fā)現(xiàn)，酒精依賴患者平均微核細(xì)胞率明顯高于正常人[6],提示酒精對(duì)遺傳物質(zhì)有損傷作用。雖然很多學(xué)者沙棘油的藥理作用、營(yíng)養(yǎng)保健作用做了大量的研究，但沙棘果油能對(duì)遺傳物質(zhì)損傷是否有改善未見相關(guān)報(bào)道。微核試驗(yàn)是目前公認(rèn)的判斷遺傳物質(zhì)損傷的遺傳學(xué)指標(biāo)[7]。研究以沙棘果油為研究對(duì)象，探討沙棘果油對(duì)酒精引起的遺傳物質(zhì)損傷是否有改善作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康成年昆明小鼠100只，雌雄兼用，體重20～25 g之間，由西安文理學(xué)院動(dòng)物中心提供。小鼠隨機(jī)分為5組，對(duì)照組，飲酒組和沙棘果油組(飲酒+沙棘果油組)，每組20只，雌雄各半，體重在20～25 g左右。小鼠在實(shí)驗(yàn)期間自由取食和飲水，飼養(yǎng)溫度在20～25℃，濕度維持在40%～60%。光照按照12 L∶12D的光周期控制，動(dòng)物的飼養(yǎng)按照西安文理學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)的要求進(jìn)行飼養(yǎng)。

1.2 材料

沙棘果油(國(guó)食健字G20120054)，購(gòu)于山西五臺(tái)山沙棘制品有限公司。白酒(50%)，陜西省太白酒業(yè)有限責(zé)任公司。超氧化物歧化酶(SOD)、還原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒均在南京建成生物工程研究所購(gòu)買。酶標(biāo)儀(BioTek ELX800)，離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限夠公司，H1650-W)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

飲酒模型組和沙棘果油不同劑量組小鼠每天上午9點(diǎn)按照0.2 mL·10 g-1灌胃白酒，沙棘果油不同劑量組在每天下午3點(diǎn)分別灌服低中高三個(gè)劑量組(5 mL·kg-1·bw-1，10 mL·kg-1·bw-1和20 mL·kg-1·bw-1沙棘果油，n=10)。對(duì)照組在上下午分別灌服等量的蒸餾水(n=10)，模型組在下午灌服等量蒸餾水，連續(xù)灌胃14 d。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)

1.4.1 微核率制備與計(jì)數(shù) 末次灌服沙棘果油24 h后，將小鼠頸椎脫臼處死，按常規(guī)制備方法[7],吸取小牛血清1 mL反復(fù)沖洗兩頭剪開的股骨頭，獲取小鼠骨髓細(xì)胞，甲醇固定后，Giemsa染液中染色10～15 min，最后用蒸餾水沖洗，制備晾干。在低倍顯微鏡下觀察骨髓涂片并觀察細(xì)胞分散狀況，在油鏡下觀察骨髓嗜多染紅細(xì)胞(PCE)，對(duì)微核數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)算微核率，微核率(0/00)=含微核的細(xì)胞數(shù)/嗜多染紅細(xì)胞×1 000 ‰，并觀察、統(tǒng)計(jì)嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞(NCE)的比例，計(jì)算PCE/NCE的比值。

1.4.2 肝組織獲取及生化指標(biāo)檢測(cè) 每只小鼠取0.2 g肝組織，在低溫條件下迅速剪碎，加9倍體積的預(yù)冷的生理鹽水勻漿后離心取上清液，按照試劑盒的說明利用酶標(biāo)儀檢測(cè)SOD、GSH和MDA的含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 沙棘果油對(duì)酒精損傷后微核率的影響

由表1發(fā)現(xiàn)，沙棘果油對(duì)不同性別小鼠骨髓微核率沒有影響。與對(duì)照組相比，模型組(飲酒)組微核率顯著升高，沙棘果油低、中劑量濃度組的微核率顯著高(P< 0.01)；而高劑量沙棘果油組的微核率也升高(P< 0.05)但不顯著。與模型組相比，只有高劑量組的微核率顯著降低(P<0.01)。不同劑量沙棘果油對(duì)微核異常增加呈劑量依賴性降低。提示，高劑量沙棘果油對(duì)酒精損傷造成的微核率有所降低。各組之間PCE/NCE無顯著差異，提示沙棘果油對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞增殖無不良影響。

表1 沙棘果油對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞微核發(fā)生率的影響(x±s，n=10)

注: 與空白對(duì)照組比較，△P< 0.05，△△P< 0.01; 與模型組比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

2.2 沙棘果油對(duì)酒精損傷后鼠肝組織SOD、MDA和GSH水平的影響

沙棘果油對(duì)雌雄小鼠的肝組織中的各項(xiàng)指標(biāo)沒有顯著性差異(P> 0.01)。小鼠模型組(飲酒)的SOD、GSH顯著低于對(duì)照組(P< 0.01)，而MDA水平顯著低于對(duì)照組(P< 0.01)(見表2)。與模型組相比，沙棘果油高、中劑量的SOD和GSH均顯著升高(P< 0.01)；而只有沙棘果油高劑量組的MDA顯著低于模型組(P< 0.01)。

表2 沙棘果油對(duì)小鼠肝組織SOD、MDA和GSH的影響(x±s，n =10)

注: 與空白對(duì)照組比較，△P< 0.05，△△P< 0.01; 與模型組比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

3 討論

對(duì)連續(xù)飲酒的14 d的小鼠觀察發(fā)現(xiàn)，酒精造成小鼠微核率增加，以及肝臟中的SOD、GSH水平降低和MDA水平的升高，進(jìn)一步驗(yàn)證了酒精對(duì)機(jī)體會(huì)造成遺傳物質(zhì)的改變[6]以及氧化損傷[8]。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，給予小鼠一段時(shí)間沙棘果油后，飲酒小鼠的微核率降低并且與沙棘果油劑量呈正相關(guān)，提示，沙棘果油可能能夠飲酒造成的DNA損傷有一定的修復(fù)。研究發(fā)現(xiàn)SOD 是機(jī)體中最重要的抗氧化酶,在清除O2-中起關(guān)鍵作用；MDA 是脂質(zhì)過氧化物的分解產(chǎn)物，它反映了脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度的強(qiáng)弱以及機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的程度；谷胱甘肽(GSH)是一種低分子清除劑[9]。沙棘果油提高了酒精損傷的肝臟SOD、GSH水平和減低了MDA水平。提示，沙棘果油可能是通過減少自由基的在肝臟的積累，通過快速清除多余的自由基等方式，降低了酒精對(duì)肝臟損傷，從而起到了保護(hù)肝臟的作用，驗(yàn)證了沙棘果油的抗氧化性[10]。但仍需在細(xì)胞水平對(duì)它的抗氧化性進(jìn)一步的探討。

綜上所述，沙棘果油在一定劑量能夠改善酒精對(duì)肝臟的損傷，防治遺傳物質(zhì)的改變。為沙棘果油的用途提供了新的理論依據(jù)。