TTF-1、CK7、Napsin A聯合檢測對肺腺癌的診斷價值

趙煥芬，杜倩，李冰潔，康林，陳琛，馬曉麗，張秀智

(河北省人民醫院，石家莊050051)

非小細胞肺癌(NSCLC)占肺癌總數的80%～85%，腺癌和鱗癌是其最常見的組織學類型[1～3]。近年來隨著靶向藥物在臨床上廣泛應用，肺癌治療進入精準醫學時代。臨床研究發現，靶向藥物的療效與NSCLC組織學類型密切相關。甲狀腺轉錄因子1(TTF-1)、細胞角蛋白7(CK7)、天門冬氨酸蛋白酶A(Napsin A)均為鑒別NSCLC組織學類型常用的免疫標記物。本研究觀察了NSCLC組織TTF-1、CK7、Napsin A表達變化，現對三者單獨和聯合檢測診斷肺腺癌的價值進行分析。

1 臨床資料

選擇2016年1月～2017年11月河北省人民醫院收治的初診NSCLC患者100例，男78例、女22例，年齡32～83歲、中位年齡63歲。所有患者經肺組織活檢或術后組織病理檢查明確診斷，術前未行任何抗腫瘤治療。排除合并其他部位惡性腫瘤者、入院前接受過其他抗腫瘤治療者以及臨床病理資料缺失者。根據2015年WHO肺腫瘤分類標準，鱗癌58例、腺癌42例。本研究經河北省人民醫院醫學倫理委員會批準，患者或其家屬均知情同意。

2 方法與結果

2.1 統計學方法 采用SPSS16.0統計軟件。計數資料比較采用χ2檢驗和Fisher確切概率檢驗。采用四格表法計算各指標單獨和聯合檢測診斷肺腺癌的敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值、診斷準確率。P<0.05為差異有統計學意義。

2.2 肺腺癌與肺鱗癌組織TTF-1、CK7和Napsin A表達檢測 采用免疫組化SP法。取所有患者活檢或手術切除肺腫瘤組織，4%中性甲醛固定，常規石蠟包埋，4 μm厚連續切片。將石蠟切片置于68 ℃烤箱烤片1 h，經二甲苯和梯度乙醇脫蠟至水，3%過氧化氫室溫孵育10 min，以消除內源性過氧化物酶活性；然后將切片置于0.01 mol/L枸櫞酸修復液(pH 6.3)中煮沸20 min進行抗原修復。自然冷卻至室溫，正常山羊血清封閉10 min，分別滴加TTF-1、CK7和Napsin A一抗工作液，4 ℃孵育過夜；次日，滴加生物素標記的兔抗山羊IgG二抗工作液，37 ℃孵育30 min；滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37 ℃孵育30 min。DAB顯色，自來水沖洗，蘇木素復染，脫水透明，常規封片。用PBS代替一抗作為陰性對照。結果判定:采用雙盲法由2位經驗豐富的病理科醫師獨立閱片，結果不一致時請第3位高年資病理科醫師判讀。CK7陽性染色定位于細胞質和細胞膜，呈棕黃色顆粒；Napsin A陽性染色定位于細胞質，呈黃色或棕黃色顆粒；TTF-1陽性染色定位于細胞核，呈棕黃色顆粒。隨機選擇5個高倍視野(400×)，計數每視野中陽性細胞數，計算陽性細胞率。陽性細胞率=每視野陽性細胞數/每視野細胞總數×100%。以陽性細胞率≥10%為陽性表達，<10%為陰性表達[4]。結果顯示，肺腺癌與肺鱗癌組織TTF-1陽性表達率分別為92.86%(39/42)、1.72%(1/58)，CK7陽性表達率分別為100%(42/42)、36.21%(21/58)，Napsin A陽性表達率分別為85.71%(36/42)、0。肺腺癌組織TTF-1、CK7、Napsin A陽性表達率均明顯高于肺鱗癌組織(χ2分別為84.298、42.529、77.679，P均<0.01)。

2.3 TTF-1、CK7和Napsin A單項或聯合檢測診斷肺腺癌的效能 以病理檢查結果為金標準，CK7單項診斷肺腺癌的敏感性高，但特異性較低，診斷準確率為79.00%；Napsin A單項診斷肺腺癌的特異性高，但敏感性偏低，診斷準確率為94.00%；TTF-1單項診斷肺腺癌的敏感性和特異性均較高，診斷準確率為96.00%。聯合檢測時，三項均陽性診斷肺腺癌的特異性為100%，診斷準確率為93.00%；至少一項陽性診斷肺腺癌的敏感性為100%，診斷準確率為78.00%。具體結果見表2。

表2 TTF-1、CK7和Napsin A單項和聯合檢測對肺腺癌的診斷效能(%)

3 討論

隨著分子生物學技術的發展和對肺癌發生、發展機制研究的不斷深入，分子靶向治療已逐漸成為治療NSCLC的主要手段，且治療效果較為滿意。研究發現，部分新上市的靶向治療藥物，如人表皮生長因子受體(EGFR)抑制劑吉非替尼、厄洛替尼和埃克替尼以及間變性淋巴瘤激酶抑制劑克唑替尼等，治療效果與腫瘤病理類型密切相關。吉非替尼對NSCLC中EGFR基因突變者靶向治療有效率接近100%，而在肺腺癌、肺腺鱗癌中EGFR基因突變率明顯高于肺鱗癌或其他類型[5]。因此，對肺癌病理類型的精準判斷能使患者在靶向治療時獲益更大。

肺腺癌和肺鱗癌是NSCLC最常見的病理類型，光鏡下通過腺體形成和胞質內有黏蛋白、角化和細胞間橋等形態特征進行鑒別。但低分化肺腺癌和肺鱗癌不具備上述典型的形態特征，尤其是活檢小標本的分型診斷十分困難，30%～40%的活檢標本需通過免疫組化染色鑒定[6]。肺癌的組織學類型和免疫表型非常復雜[7]，通過單種抗體鑒別肺癌組織類型結果并不可靠[7～9]，故尋找敏感性和特異性均較高的抗體組合尤為重要。

TTF-1又稱甲狀腺特異性增強子結合蛋白，是核轉錄蛋白NKx2基因家族成員之一，相對分子質量38 kDa，由常染色體14q13的單一位點基因編碼產生，是肺、甲狀腺和間腦早期發育過程中的一種組織特異性轉錄因子。有研究報道，肺腺癌組織TTF-1陽性表達率為27%～100%，而肺鱗癌組織幾乎無陽性表達[8～10]。王紅梅等[11]研究發現，原發性肺腺癌組織TTF-1陽性表達率為84.6%，而在肺鱗癌組織中僅為5.0%。本研究肺腺癌組織TTF-1陽性表達率明顯高于肺鱗癌組織，與上述報道基本一致，說明TTF-1單項檢測可用于肺腺癌診斷。Warth等[12]研究發現，TTF-1診斷肺腺癌的敏感性和特異性分別為87.7%、85.6%。本研究結果顯示，TTF-1診斷肺腺癌的敏感性和特異性分別為92.86%、98.28%，均高于Warth等[12]報道。其原因一方面可能與本研究嚴格的免疫組化檢測質控(假陰性樣本均重新檢測)有關，另一方面可能與樣本量不同有關。

Napsin A是1998年發現的、在肺和腎組織顯著表達的胃酶樣天冬氨酸蛋白酶，是一種相對分子質量接近38 kDa的單鏈蛋白，其編碼基因位于人染色體19q13.3，由420個氨基酸組成。生理情況下，Napsin A表達于Ⅱ型肺泡上皮細胞和肺泡巨噬細胞，在肺腺癌組織中多呈陽性表達，而在肺鱗癌組織中極少出現陽性表達。以往研究報道，肺腺癌組織Napsin A陽性表達率為83%，而在肺鱗癌組織中無表達[14]。有研究發現，在部分TTF-1陰性表達的低分化肺腺癌組織中Napsin A通常陽性表達[4,13]，并具有極高的特異性。本研究結果顯示，肺腺癌組織Napsin A陽性表達率為85.71%，而肺鱗癌組織中無陽性表達，與文獻[14]報道基本一致。本研究結果顯示，Napsin A診斷肺腺癌的敏感性和特異性分別為85.71%、100%，證實Napsin A單項檢測有助于肺腺癌的診斷。

CK7為低分子量的Ⅱ型堿性細胞角蛋白，其相對分子質量為54 kDa，主要表達于腺上皮和移行上皮[15]。在非肺源性腺癌組織中，CK7表達廣泛見于乳腺、胃、卵巢、胰腺等惡性腫瘤組織。有研究發現，CK7診斷肺腺癌的敏感性高達100%[16]，在肺腺癌的診斷和鑒別診斷中常作為首選的抗體組合成員。但CK7在30%～60%肺鱗癌組織亦呈陽性表達，特異性相對較低，故在肺腺癌的診斷中需與其他特異性較高的抗體(如TTF-1、Napsin A)聯合應用。有研究報道，CK7診斷肺腺癌的敏感性和特異性分別為93.8%、50.0%[6]。本研究結果顯示，肺腺癌組織CK7陽性表達率明顯高于肺鱗癌組織，CK7診斷肺腺癌的敏感性和特異性分別為100%、63.79%，與文獻[6]報道相符。

本研究結果顯示，CK7、Napsin A及TTF-1單項檢測診斷肺腺癌的準確率分別為79.00%、94.00%、96.00%；三者聯合檢測時，至少一項陽性診斷肺腺癌的準確率為78.00%，三者均陽性診斷肺腺癌的準確率為93.00%。由于肺腺癌存在異質性，樣本量多少是影響檢測結果的重要因素之一。三者聯合檢測可將診斷肺腺癌的敏感性提高至100%，同時還能使診斷準確率保持在較高水平。我們認為，在臨床工作中，當樣本量足夠時推薦行TTF-1、CK7、Napsin A聯合檢測，而樣本量較少時首選TTF-1單項檢測。

綜上所述，TTF-1、CK7和Napsin A聯合檢測有助于提高肺腺癌的診斷準確率。