野生香菇菌株篩選試驗

李 蓉 張金鈺 陳俊良 陳 麗 陶祥生 葉長文

（1浙江省慶元縣食用菌科學技術研究中心/浙江省麗水食用菌技術創(chuàng)新服務平臺/浙江省食用菌工程技術研究中心，浙江慶元323800；2慶元縣農(nóng)業(yè)局，浙江慶元323800）

香菇（Lentinus edodes），屬擔子菌亞門傘菌綱傘菌目香菇屬。香菇人工栽培有800多年的歷史，香菇產(chǎn)業(yè)的發(fā)展不僅是傳承了一個產(chǎn)業(yè)，更傳承著香菇的歷史、香菇的文化。香菇菌種直接決定了香菇的產(chǎn)量和質量。香菇菌種研發(fā)的重點方向，首先是野生種質資源的收集和利用[1]。

研究對從浙江慶元及福建省龍巖市采集的野生香菇種質進行形態(tài)特征、培養(yǎng)特性比較，以慶元當?shù)刂髟云贩N為對照，篩選出高產(chǎn)野生香菇菌株，對豐富、開發(fā)利用香菇種質資源具有重要意義。現(xiàn)將試驗結果總結如下。

1 材料與方法

1.1 供試香菇菌株

慶元周邊地區(qū)采集的45個野生香菇菌株，編號和來源分別為L-1～L-14，2014年采于福建武平縣十方鎮(zhèn)；L-16～L-41，2014年采于福建上杭縣白沙鎮(zhèn)；L-42～L-44，2014年采于福建永定縣坎市鎮(zhèn)；L-45、L-47，2014年采于慶元縣巾子峰；10個對照菌株L-48～L-57為浙江省慶元縣食用菌科學技術研究中心保藏菌株，具體見表1。

表1 對照香菇菌株編號及名稱

1.2 培養(yǎng)材料

平板PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖2 g，蛋白胨 2 g，加水1 000 mL。

培養(yǎng)料：木屑78%，麩皮20%，石膏1%，紅糖1%。料含水量60%，pH值自然。

1.3 試驗方法

1.3.1 供試香菇菌株間拮抗試驗

將55個（45個野生香菇菌株、10個對照菌株）試驗菌株活化后，在同一平板上按品字形接種3個菌株，在25℃、相對濕度50%培養(yǎng)。觀察菌絲間的拮抗反應情況[2]。

1.3.2 供試香菇菌株菌絲生長速度測定

將55個（45個野生香菇菌株、10個對照菌株）試驗菌株在PDA平板上培養(yǎng)7 d后，6 mm打孔器切取菌齡相同的接種塊，再接種于PDA培養(yǎng)基上，分別于10℃、15℃、20℃、25℃ 、30℃[3]，相對濕度50%下避光培養(yǎng)，在第5天、第7天、第9天、第11天劃線。設三個重復，計算每個菌株菌絲生長平均速度。

菌絲平均生長速度（mm/d）=菌落半徑/生長天數(shù)

1.3.3 供試香菇菌株菌絲及菌落性狀測定

將55個（45個野生香菇菌株、10個對照菌株）試驗菌株在PDA平板上培養(yǎng)7 d后，6 mm打孔器切取菌齡相同的接種塊，再接種于直徑90 mm的PDA培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，設三個重復。培養(yǎng)溫度25℃，避光培養(yǎng)。培養(yǎng)7 d后觀察菌絲濃密度差異，培養(yǎng)30 d后觀察菌落表面有無被膜形成、有無色素生成[3]。

1.3.4 供試香菇菌株子實體性狀及產(chǎn)量測定

將51個菌株（45個野生香菇菌株、6個目前主栽對照品種）在一致的環(huán)境條件下接種、發(fā)菌、出菇。每個菌袋（15 cm×55 cm×0.005 cm）裝濕料1.7～1.9 kg，98～100℃滅菌14～15 h。4月20日打孔接種，接種后加套外袋，室內黑暗條件25℃培養(yǎng)。5月4日，待菌絲長滿三分之一，進行第1次刺孔增氧，每袋均勻刺孔20個。5月19日，待菌絲快長滿全袋時進行第2次刺孔增氧，每袋均勻刺孔40個。9月26日菌袋搬至低棚出菇，10月17日看到菌袋上有較多原基時脫袋，進入出菇管理。每個菌株接種100袋計算成活率，選擇其中無雜菌污染的90袋分成3個小區(qū)統(tǒng)計產(chǎn)量。

采收第二潮菇（12月出菇的子實體）測定記錄子實體性狀（菌蓋縱切形狀、菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌柄長度、菌柄直徑、菌蓋緊實度、菌柄緊實度、菌蓋頂部著色、鱗片大小、菌褶有無及菌褶排列方式、菌褶密度、菌褶顏色，菌柄縱切面形狀、菌柄著色、菌柄纖毛密度，子實體著生狀態(tài)）。

2 結果與分析

2.1 拮抗試驗結果

拮抗試驗結果表明，55個香菇菌株（45個野生香菇菌株、10個對照）間均有拮抗性。L-4與L-41菌株之間的拮抗反應弱，表明它們的親緣關系較近；其余各菌株間都有強烈或非常強烈的拮抗反應，這表明這些菌株間的親緣關系較遠。

2.2 供試香菇菌株的菌絲生長速度比較

在10℃、15℃、20℃、25℃ 30℃不同溫度梯度下培養(yǎng)后測定各個菌株的菌絲生長速度。結果表明，所有菌株在10℃、15℃下菌絲生長速度均較慢；L-1、L-17、L-18、L-30、L-33、L-38、L-50這7個菌株在30℃時菌絲生長最快；L-2、L-5、L-7、L-9、L-10、L-11、L-12、L-13、L-14、L-16、L-19、L-21、L-22、L-25、L-26、L-27、L-28、L-29、L-35、L-36、L-37、L-39、L-40、L-41、L-42、L-43 、L-44、L-47、L-49、L-55、L-57這31個菌株在25℃菌絲生長最快；L-3、L-4、L-6、L-8、L-23、L-31、L-48、L-51、L-52、L-53、L-54 11個菌株在20℃時菌絲生長最快；L-20、L-24、L-32、L-34、L-45、L-56 6個菌株在20℃時菌絲生長速度較快，在30℃時菌絲生長速度最快，但在此溫度時菌絲很快產(chǎn)生色素，因此認為其菌絲生長最適溫度為20℃。

2.3 供試香菇菌株菌絲及菌落形態(tài)

培養(yǎng)7 d后觀察菌絲濃密度，只有L-9和L-51菌絲濃密度為疏，L-2、L-17、L-18、L-26菌絲濃密度為中，其余均為密。

圖1 不同菌株的部分拮抗現(xiàn)象

培養(yǎng)7 d后觀察菌絲均勻度，L-3、L-5、L-6、L-7、L-8、L-10、L-12、L-16、L-19、L-20、L-27、L-29、L-31、L-33、L-36、L-39、L-40、L-41、L-42、L-43、L-44、L-48、L-49、L-51這24個菌株菌絲生長不均勻，其余菌絲均可均勻生長。

培養(yǎng)30 d后觀察菌絲被膜形成情況，L-1、L-2、L-3、L-4、L-9、L-10、L-11、L-12、L-14、L-16、L-17、L-18、L-21、L-28、L-31、L-32、L-35、L-37、L-43、L-44、L-45、L-48、L-49、L-50、L-51、L-52、L-53、L-54、L-55、L-57這30個菌株無被膜的形成，其余均有被膜的形成。

培養(yǎng)30 d后觀察菌落色素，L-1、L-3、L-5、L-7、L-8、L-10、L-11、L-12、L-18、L-22、L-23、L-25、L-26、L-28、L-30、L-31、L-32、L-34、L-35、L-37、L-39、L-41、L-42、L-43、L-45、L-47、L-53、L-54、L-55、L-56這30個菌株無色素生成，其余均有色素生成。

2.4 供試香菇菌株子實體產(chǎn)量

根據(jù)栽培結果統(tǒng)計，成活率最高的是L-20，成活率達到96%，其次為L-4，成活率達到92%，其余成活率均在70%以下。單產(chǎn)最高的是L-44和L-23，產(chǎn)量達到637.66 g/袋和632.50 g/袋，與對照主栽培品種L-49（慶元9015）的630.56 g/袋和L-57（慶科20）的634.13 g/袋相當。其次為L-22、L-38、L-42，產(chǎn)量分別為617.41 g/袋、615.25 g/袋、602.24 g/袋，L-16、L-18、L-26、L-29、L-35、L-43產(chǎn)量在504.38～556.28 g/袋，其余產(chǎn)量均在500 g/袋以下。所有野生香菇菌株均具有出菇較遲、菇體較薄的特性。多個菌株在同一時間采取相同的出菇管理措施，可能由于菌株自身特性差異、統(tǒng)一管理方法不具針對性等原因而導致部分菌株產(chǎn)量較低。菌株L-23、L-44具有出菇時間集中、出菇整齊、子實體小、菇蓋薄而多的特性。

對照中L-49和L-57產(chǎn)量最高，分別為630.56 g/袋 和 634.13 g/袋 ，其 次 為 L-48，產(chǎn) 量 為602.97 g/袋，其余產(chǎn)量均在500 g/袋以下。主要是因為對照品種L-50、L-52均不適宜低矮棚栽培，L-56屬于短菌齡香菇品種，不適宜與長菌齡野生香菇品種在同一時間采用相同方法栽培管理。

表2 部分香菇菌株子實體性狀

L-39雖然產(chǎn)量不高，但是鮮菇具有野生香菇特有的香味。

2.5 部分香菇菌株子實體性狀

主要對產(chǎn)量較高的幾個香菇菌株進行子實體性狀分析，結果見表2。由表2結果可見：菌蓋形態(tài)，只有L-22菌蓋呈凹形，其余均呈凸形；菌蓋緊實度，三個對照（L-48、L-49、L-57）菌蓋結實，野生香菇L-23、L-39菌蓋結實；其余菌蓋緊實度為中或疏松；L-23和L-44由于，出菇期集中在12月10日-次年1月10日，出菇量達到總產(chǎn)量的71.6%，且爆發(fā)出菇原基數(shù)量多，使子實體著生成叢生狀；菌蓋直徑/菌柄長度值越大，表明該菇體菌柄相對越短，L-22、L-23、L-39、L-42菌柄相對較短；菌蓋直徑/菌蓋厚度值越小表明菇越厚，L-42和三個對照（L-48、L-49、L-57）菇相對較厚，菇質較優(yōu)。

3 小結與討論

真菌的拮抗反應是體細胞不親和的直接體現(xiàn)[4，5]。食用菌是具有重要經(jīng)濟價值的一類真菌，體細胞的不親和性現(xiàn)象同樣普遍存在。由于拮抗分類鑒定具有簡單、快速、直觀等優(yōu)點，因此是最常用的食用菌菌種鑒定方法。諸多研究顯示，該方法具有較高的可靠性，如黃傘的拮抗反應分類結果與以酯酶同工酶的分類方法相一致[6]，金針菇拮抗分類與RAPD分析結果吻合[7]。此外，白靈菇[8]、真姬菇[9]、姬松茸[10]、香菇[11]、靈芝[12]等拮抗分類鑒定結果與其他鑒定方法的分類結果也相吻合。

野生香菇經(jīng)馴化栽培，均可正常出菇，但菇蓋總體較薄，商品性狀較差。但從產(chǎn)量看，篩選出的L-44和L-23，產(chǎn)量分別達到637.66 g/袋和632.50 g/袋，與目前主栽品種中的高產(chǎn)品種“慶元9015”“慶科20”的產(chǎn)量相當，且L-23和L-44出菇期均較集中，可作為高產(chǎn)或工廠化香菇育種目標菌株進行進一步馴化，培育成高產(chǎn)或工廠化主栽香菇菌株。L-42產(chǎn)量為602.24 g/袋，但菇質相對較優(yōu)，可作為優(yōu)質香菇育種目標菌株進行進一步馴化。L-39由于具有特殊野生香菇香味，可作為風味鮮香菇育種目標菌株開展進一步研究。