不同保藏溫度對黑牛肝菌菌種活性的影響

崔文浩 鄭江程

（衢州市農業科學研究院，浙江衢州324000）

黑牛肝菌（Phlebopus portentosus）又名暗褐網柄牛肝菌，隸屬于擔子菌門、傘菌綱牛肝菌目、小牛肝菌科、脈柄牛肝菌屬[1]。黑牛肝菌味道鮮美、營養價值高，是一種極具經濟價值的食用菌品種。由于黑牛肝菌是一種高溫型食用菌，其菌絲在不當低溫條件下保藏容易死亡，從而影響菌種的保藏效果和繼代繁殖[1]。筆者研究了不同保藏溫度對黑牛肝菌菌絲生物學特性的影響[2]，篩選出適合黑牛肝菌菌種保藏的溫度條件。現將試驗結果總結如下。

1 材料與方法

1.1 供試材料

菌株黑牛肝菌菌株是云南西雙版納地區引進，在衢州當地人工栽培的子實體分離得到。

1.2 培養基配方

菌種培養基配方：松樹葉200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，谷物8 g，K2HPO41 g，MgSO40.5 g，水1 L，pH 6。

栽培料配方：發酵木屑69%，谷物20%，玉米粉10%，糖1%。

1.3 試驗方法

將長滿菌絲的斜面培養基分別放置于4℃、8℃條件下冷藏15 d，30 d，45 d（28℃常溫保藏45 d菌株作為對照組，下同）。試管樣品取出后在28℃下活化3 d，轉接到7 cm平板培養基上，在28℃恒溫培養箱中恢復培養。每個處理5個重復。觀察、測量各處理間菌絲的萌發率、菌絲生長速度、菌絲形態等。

將培養料基質拌勻后分裝到直徑24 mm的試管中，滅菌2 h。將低溫處理的黑牛肝菌試管活化后轉接到7 cm平板培養基上，培養20 d后選取大小相同的牛肝菌菌絲塊轉接到試管中。每個處理接種5個重復。記錄牛肝菌菌絲的發菌速度。

2 結果與分析

2.1 不同保藏溫度對黑牛肝菌菌株成活率和菌絲形態的影響

表1結果表明，黑牛肝菌菌株在4℃保藏15 d后活力下降，接種萌發率只有40%。當保藏時間超過 30 d，菌株全部失去萌發能力。而在8℃條件下，菌株保藏超過45 d仍然有萌發能力。觀察平板培養基上的菌絲形態，如圖1。4℃保藏15 d和8℃保藏45 d的菌株氣生菌絲發達，菌落邊緣有一圈明顯的白色絨毛，菌絲后期容易分泌出褐色水珠。8℃保藏15 d與對照菌絲形態相似，菌絲貼于培養基生長，會形成一層緊實的菌皮，且生長后期少量分泌或不分泌褐色水珠。8℃保藏30 d的菌落氣生菌絲和匍匐菌絲相互混合，菌落形態較8℃保藏15 d濃密。

表1 不同保藏溫度對黑牛肝菌菌種的保藏效果

圖1 不同保藏溫度牛肝菌在平板培養基上的生長情況

2.2 不同保藏溫度對黑牛肝菌菌絲體生長速度的影響

對平板培養基內所有萌發的菌株進行十字交叉法測量菌絲生長速度，如表2。結果表明，菌株萌發生長的前期（10 d內），4℃保藏15 d的菌絲生長速度與8℃保藏15 d、8℃保藏30 d有顯著差異。說明4℃保藏15 d的菌株活化、萌發速度最快，但菌絲生長10 d以后，菌絲生長速度下降，不同保藏溫度的菌絲生長速度沒有顯著差異。

表2 不同處理黑牛肝菌菌絲在平板培養基上的生長速度

2.3 黑牛肝菌菌株在培養料基質上發菌情況

選取經活化、大小相同的黑牛肝菌菌塊轉接到裝滿木屑培養料的試管中，觀察菌絲在基質中的發菌速度，如表3。結果表明，在萌發生長前期（30～40 d），4℃保藏15 d的菌株菌絲和8℃保藏45 d及對照的菌株生長速度快且與8℃保藏15 d差異顯著。接種40 d后8℃保藏30 d的菌絲生長速度下降，4℃保藏15 d、4℃保藏45 d和對照三個處理的菌株發菌速度與8℃保藏15 d、8℃保藏30 d差異顯著。

表3 不同處理黑牛肝菌轉接在培養料基質上的菌絲長速

3 小結與討論

試驗研究了4℃和8℃兩種低溫對黑牛肝菌菌種活力的影響。結果表明，4℃低溫條件保藏15 d后黑牛肝菌菌種萌發率只有40%，保藏30 d后黑牛肝菌菌種全部失活，說明黑牛肝菌菌種不適合在4℃條件下保藏。而在8℃保藏超過45 d，黑牛肝菌菌種依然具有較好的活力，說明8℃可以作為長期保藏黑牛肝菌的溫度條件。

不同處理間菌落形態差別很大。在8℃保藏15 d和30 d的菌株在平板培養基上菌落以匍匐菌絲為主，且菌絲萌發速度較慢。這可能與黑牛肝菌菌絲在8℃下處于休眠狀態，活化萌發需要一定時間有關。4℃保藏15 d的黑牛肝菌菌落氣生菌絲發達，且容易分泌褐色水珠；同時轉接菌絲在平板培養基和培養料基質上的發菌速度較快，與未冷藏的對照菌株沒有顯著差異。這可能與短時間4℃處理后黑牛肝菌菌絲表現出低溫抗氧化應答，抗氧化酶活性提高有關[3]，需做進一步的研究。