全自動快速微生物檢測系統在鑒定流感嗜血桿菌中的應用價值

呂其凡

（丹東市婦女兒童醫院，遼寧 丹東 118000）

流感嗜血桿菌即流感桿菌，作為人類上呼吸道正常菌群，該細菌經人工培養時需加血液方可生長，因此被命名為嗜血桿菌。流感嗜血桿菌作為致病性細菌，可誘發原發性化膿性感染和呼吸道繼發感染，呼吸道和孕婦產道為該細菌兩大傳染途徑，臨床常表現為肺炎、泌尿生殖道及婦產科感染、腦膜炎、會厭炎及其他化膿性感染（闌尾炎、膽道感染、化膿性關節炎）等，醫者多根據臨床表現結合實驗室檢查（病原學檢查、細菌培養）確診，以便為后續醫療工作的正常開展奠定基礎，如一般治療、對癥治療、病原學治療等，以減少醫患負擔，實現最佳治療效果[1-2]。現有流感嗜血桿菌鑒定方法較為多樣，本文就全自動快速微生物檢測系統其應用價值進行分析，資料報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：從2016年1月至2017年6月于我院就診的38例肺部炎癥患者作為研究對象，均為女性；年齡3～29歲，平均（14.2±1.2）歲；組織采集痰液，制作標本后經16SrDNA（金標準）檢測均鑒定出流感嗜血桿菌，所有入選對象均同意參與研究，每例病患制作4份痰液標本，分別進行16SrDNA、VITEK MS、APINH、V+X因子檢測評估流感嗜血桿菌檢出率。

1.2 研究方法

1.2.1 痰液標本采集：運用自然咳痰法晨起組織患者冷水漱口，深呼吸后用力咳出呼吸道深部痰液或采用霧化蒸汽吸入法和一次性吸痰管法采集痰液標本，標本量不少于1 mL，切記痰液標本忌與唾液、鼻咽分泌物、漱口水和食物混淆，將置于痰杯中的痰液加蓋及時送檢，若無法及時送檢者暫時冷藏保存，核對病患信息。

1.2.2 流感嗜血桿菌檢測：①準備DNA提取試劑盒、PCR擴增試劑盒、離心機、PCR儀、電泳儀及測序儀，嚴格按規定對痰液標本進行檢測并進行DNA測序，其結果與BLASET數據庫中序列進行比對，鑒定細菌。②VITEK MS檢測，取培養的無菌接種環置于質譜儀檢測板上，隨后滴加1 μL質譜樣品處理基質溶液覆蓋樣品后待其干燥后經質譜儀鑒定。③APINH檢測，將菌株標本接種于細菌培養基上，于35 ℃條件下培養18～24 h觀察培養基情況，運用APINH鑒定條，檢查細菌情況。④V+X因子檢查，運用血平板、嗜血桿菌分離平板、V因子、X因子和V+X因子紙片嚴格按規定進行分離鑒定。

1.3 觀察指標：以16SrDNA檢查結果為金標準，比較其余三項檢查其病菌檢出率；比較四種檢查方法檢查所需時間。

1.4 統計學處理：使用統計學軟件SPSS20.0處理數據，用（）、（%）表示，用t和χ2檢驗，分析組間差異，若P＜0.05，即有統計學意義。

2 結果

2.1 16SrDNA與VITEK MS檢出率比較：所有痰液標本經16SrDNA檢查均檢測出流感嗜血桿菌，其檢出率達100.0%（38/38）；VITEK MS檢出率為89.5%（34/38），兩種檢查方法其檢出率相比無統計學意義（χ2=4.222，P=0.040）。

2.2 VITEK MS與APINH、V+X因子需求性試驗檢出率比較：VITEK MS檢出率為89.5%（34/38）均優于APINH檢出率71.1%（27/38）和V+X因子需求性試驗檢出率68.4%（26/38），數據對比均有統計學意義（χ2=4.070，P=0.044；χ2=5.067，P=0.024）。

2.3 四項檢查方法耗時比較：16SrDNA檢查耗時為（2.4±0.3）h、VITEK MS耗時為（0.4±0.1）h、APINH耗時（11.5±2.5）h、V+X因子需求性試驗耗時為（27.5±2.5）h，VITEK MS檢查耗時明顯短于 16SrDNA、APIN及V+X因子需求性試驗，均有統計學意義（t=38.987，P=0.000；t=27.348，P=0.000；t=66.769，P=0.000）。

3 討 論

流感嗜血桿菌前稱費佛氏桿菌/拜菲爾氏菌或流感桿菌，屬于孤菌科嗜血桿菌屬，是一種沒有運動力的革蘭陰性桿菌，嗜血桿菌最早于1892年由費佛教授在流行性感冒瘟疫中發現，曾被誤認為時1889年流感大流行的病因，直至1933年發現流感性感冒病毒性病原后才得以消除此誤解。流感嗜血桿菌廣泛寄居于人們上呼吸道中，常誘發呼吸道病變、繼發感染及急性化膿性感染，為有效防治疾病，幫助病患擺脫病魔困擾，進而減輕醫患負擔，醫者多通過實驗室檢驗分離病菌，給予對癥治療[3-4]。16SrDNA檢查雖為流感嗜血桿菌鑒定金標準但因耗時長，且容易存在污染，為提高檢測的安全性，以便醫者快速獲取準確檢測結果，臨床常用VITEK MS、APINH、V+X因子需求性試驗作為替代，但有學者在研究中提出APINH、V+X因子需求性試驗檢測準確率尚有待提高且耗時長，可肉眼判讀，無需特殊儀器，成本較低，但存在一定人為失誤，VITEK MS自動判讀，檢測耗時短，操作簡便（無需革蘭染色）、靈活（所有微生物簡單樣品制備后均可鑒定）、準確（能滿足臨床與科研需求）、迅速（10min內即可獲取檢測結果）、高通量（可同時檢測192個樣本），具有極佳推廣前景[5-6]。本次研究結果顯示：VITEK MS檢出率低于16SrDNA有統計學意義（P＞0.05）；但均優于APINH、V+X因子需求性試驗檢出率，差異有統計學意義（P＜0.05）；檢測耗時VITEK MS短于16SrDNA、APINH及V+X因子需求性試驗，均有統計學意義（P＜0.05），即流感嗜血桿菌運用VITEK MS安全高效便捷，具有極高應用價值。總之，全自動快速微生物檢測系統鑒定流感嗜血桿菌效果顯著，可臨床推廣應用。