技術進步條件下豬圓環病毒病的研究進展

周文茂 陳海軍 高軍攀

（1河北省石家莊市畜牧獸醫技術開發中心，河北石家莊 050000；2河北省石家莊市動物衛生監督所，河北石家莊050000；3河北省石家莊市獸用制品供應站，河北石家莊050000）

豬圓環病毒病是由圓環病毒2型（PCV2）引起的一種豬免疫抑制性疾病，可以引起斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎腎病綜合征（PDNS）、母豬繁殖障礙性疾病、仔豬先天性震顫（CT）等一系列多種不同臨床癥狀的疾病[1]。PCV2一旦在豬群中流行傳播，將很難清除，感染的豬群可能表現為亞臨床癥狀，但其引起的免疫抑制使豬群易遭受其他病原的并發或繼發感染[2]，給養豬業造成巨大損失。因此，對PCV2的準確診斷和有效防控是當前亟待解決的問題。

1 流行病學

豬圓環病毒（porcine circovirus,PCV）屬于圓環病毒科圓環病毒屬，是感染脊椎動物最小的一種病毒[2]。豬圓環病毒有PCV1、PCV2和PCV3 3個血清型，其中PCV1無致病性，PCV3由2016年Phan等[3]在美國從有相似臨床癥狀的育肥豬中檢出，其致病性尚未明確；由PCV2引起的一系列相關綜合征稱為豬圓環病毒病。2000年，郎洪武等[4]首次報道我國存在PCV2，如今PCV2已呈世界性流行，在我國豬群中也普遍存在。

豬是PCV2的易感動物，患病豬和隱性帶毒豬是豬圓環病毒病的主要傳染源，感染豬的鼻液、唾液、淚液、糞便、尿液中都含有病毒，會污染周圍的環境，通過呼吸道或者消化道感染健康豬群。妊娠母豬感染后，病毒可以通過胎盤感染胎豬，導致妊娠后期出現死胎、僵尸胎等流產現象。感染公豬的精液中也會帶毒，可以通過輸精的方式感染母豬[5]。

豬圓環病毒病一年四季均可發生，沒有明顯的季節性特征，不論大小、公母，不同品種的豬均可以感染PCV2，但1～4月齡仔豬較多發，尤其是斷奶后1～2周的仔豬，逐漸失去了母源抗體的保護，但自身的免疫系統發育還不夠完善而發病，因此推斷該病的發生與斷奶應激有很大的關系。

2 臨床癥狀及病理變化

2.1 致病機理

PCV2的致病機理一直是學界、業界關注的熱點。研究發現PCV2侵襲的是單核吞噬細胞系統，而不存在于淋巴細胞中，但會導致豬的淋巴組織、肺臟、肝臟等器官出現炎癥反應，破壞豬的免疫系統，造成免疫功能紊亂，使機體易感染其他病原[6]。近年來的研究發現，PCV2單一病原感染發病少見，或者是因為單一感染時沒有出現典型的臨床癥狀而被忽視，常見的是與其他多種病原混合感染，如與PRRSV、CSFV、PPV、PRV等。

2.2 臨床癥狀

豬圓環病毒病是一系列臨床綜合征的總稱，每種綜合征之間所表現的臨床癥狀和病理變化存在一定的差異，一般表現為以下幾種類型。

2.2.1 斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS）

主要危害斷奶后仔豬，表現為呼吸困難、被毛粗亂、逐漸消瘦、生長發育受阻、腹股溝淋巴結腫大、腹瀉、精神不振，部分豬還出現貧血癥狀，皮膚蒼白。剖檢可見患病豬全身淋巴結腫大，肺腫脹、間質增寬、質地堅硬如橡皮樣、呈間質性肺炎，肺表面分布大小不等的紅色至褐色的斑點。脾臟與肝臟腫大。腎臟腫大，有時可見白色散在斑點。

2.2.2 豬皮炎腎病綜合征（PDNS）

主要發生于8～18周齡豬和育肥豬，多呈散發。臨床上表現為患病豬皮膚突然出現圓形或不規則形狀、呈紅色或紫紅色病變，病變部位中央呈黑色，隨著病情加重，病變區融合成較大的黑色壞死斑塊，結痂脫落后留下明顯疤痕。皮膚病變常見于病豬的后肢、腹部、會陰部，也可擴散至體側及耳部。感染嚴重時會表現出四肢跛行、發熱、厭食、皮下水腫、逐漸消瘦。剖檢可見腎臟腫脹、蒼白，皮質部有大面積出血或瘀血點，淋巴結腫大、出血。

2.2.3 母豬繁殖障礙性疾病

妊娠母豬感染PCV2后可出現繁殖障礙，主要表現為流產、產死胎、木乃伊胎和弱仔等。懷孕母豬在妊娠早期感染PCV2可以導致胚胎死亡，妊娠中后期感染則導致母豬產死胎、木乃伊胎，剖檢死胎可見非化膿性心肌炎[2]。一般初產母豬感染PCV2后流產率較高，經產母豬流產率較少，但產死胎和弱仔數量增加。公豬感染PCV2后精子數量減少、活力下降、配種率降低，導致繁殖障礙。

2.2.4 仔豬先天性震顫（CT）

初生仔豬感染PCV2可引起頭部、四肢和尾巴連續或間歇性震顫，嚴重者可見全身肌肉抖動，震顫為雙側性，外界刺激可引發或加重震顫，當病豬趴臥或睡覺時震顫可暫時性消失。病情嚴重時，震顫對骨骼和肌肉的影響使仔豬行走困難、無法正常吮奶，最終饑餓致死，若及時采取人工喂奶措施，有的仔豬1周后可逐漸恢復健康并存活。

3 實驗室檢測

由于豬圓環病毒病常并發或繼發多種病原感染，單純從臨床癥狀診斷難度較大，因此借助于實驗室檢測方法，可以準確、快速診斷PCV2感染。常用的實驗室檢測方法有病原學檢測和血清學檢測2大類。

3.1 病原學方法

3.1.1 病毒分離培養

取感染PCV2豬病變組織處理后，接種原代腎細胞或PK-15細胞培養，由于PCV2病毒不會引起細胞病變，不能直接判斷病毒分離情況，需要借助于間接免疫熒光試驗（IFA）、PCR或電子顯微鏡等方法進行確認。病毒分離培養費時費力，操作繁瑣，不適用于豬圓環病毒病的快速診斷。

3.1.2 間接免疫熒光試驗

取病變組織以蓋玻片在PK-15細胞中培養，丙酮固定，用兔抗PCV高免血清與細胞培養物中的PCV反應，可對PCV進行檢測和分型[7]。IFA用時少、操作簡便，應用非常廣泛，主要用于病毒分離效果的鑒定及病變組織PCV感染的檢測。

3.1.3 核酸原位雜交技術（ISH）

ISH敏感性高，可以精確地定位PCV病毒在組織細胞內的位置，有助于深入研究PCV的致病機理。Choi等[8]用地高辛標記的探針做原位雜交可檢測PCV。Nawagitgul等[9]根據PCV的基因序列，設計了一組探針可以區分PCV1和PCV2。Sirinarumitr等[10]利用熒光標記RNA探針，與細胞中病毒核酸，福爾馬林固定或石蠟包埋的組織中的PCV病毒核酸進行雜交，建立了快速檢測PCV的原位雜交技術。該方法應用快速加強雜交緩沖液（rate enhancement hybridization,REH），大大縮短了檢測時間，提高了PCV2的診斷效率。接著Siri-narumitr等[11]又建立了雙雜交方法，可同時檢測2種病毒的感染。

3.1.4 PCR方法

PCR方法具有快速、簡便、特異的優點，被廣泛應用于各種疫病的檢測。國內外已經建立多種PCR方法用于PCV檢測，包括常規PCR、復合PCR、競爭PCR和巢式PCR等[12]，可以特異性地區分PCV的不同血清型。當前國內對于PCV2的流行病學調查，最常用的就是PCR方法，已經出現豬圓環病毒PCR檢測試劑盒，但是PCR方法敏感性高，易出現假陽性結果，因此需要結合血清學方法進行檢測，確保檢測結果準確、可靠。

3.1.5 免疫組化（IHC）

IHC與IFA一樣，都屬于免疫染色方法。IHC技術是將抗原抗體反應的專一性和顯微形態學相結合，用以研究組織或細胞中抗原定位的一種方法。使用該方法檢測PCV病毒時，可以結合病毒形態變化，進行快速、特異的診斷。此外，IHC可以對攜帶病原的細胞及組織的大體形態進行評價，而且只需要借助于普通顯微鏡在日光下即可進行觀察。與IFA相比，該方法的樣本顏色更穩定、更易于保存。

3.2 免疫學方法

3.2.1 間接免疫熒光試驗

IFA即可用于抗原檢測，也可用于抗體檢測，國外已有檢測PCV的標準化試劑盒。可以通過檢測豬血清中的抗體，確定PCV的感染情況。該方法快速簡單，應用廣泛，但是洗滌不干凈，易出現非特異性結果。此外，該方法不能有效區分抗體對應的PCV血清型。

3.2.2 免疫過氧化物酶單層細胞試驗（IPMA）

該方法可以用于檢測PCV或血清中的PCV抗體，但是不能區分PCV血清型，應用局限，國外多用于研究，國內應用較少。

3.2.3 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA方法因為檢測速度快、敏感性高、特異性強等優點被廣泛應用于疫病臨床診斷中，也是檢測PCV2抗體的常用檢測方法。國內外的科研人員已經建立多種ELISA方法，為進行PCV感染的血清學調查提供技術支撐。Walker等[13]首次建立競爭ELISA方法用于檢測PCV2抗體，該方法敏感性高、特異性好，可以用于PCV2抗體的大規模檢測。2002年，Nawagitgul等[14]建立了2種ELISA方法，分別用于檢測針對PCV全病毒和病毒核衣殼蛋白的抗體，均具有較好的重復性和敏感性。但是ELISA方法與IFA存在同樣的缺陷，不能特異性區分PCV的不同血清型對應的抗體，且病毒獲得困難時該方法的應用受到一定限制。

4 綜合防治

PCV2感染已經成為影響養豬業的重大問題，但是目前仍沒有特效的治療方法，因此對該病的防治仍然是以預防為主、防治結合的方法。

4.1 疫苗免疫

疫苗免疫是目前預防PCV2的重要手段。2010年PCV2疫苗開始在我國使用，經過臨床驗證免疫接種是預防和控制豬圓環病毒最快捷、最有效的措施，可以提高生產性能、降低發病率和死亡率。目前已經有多種PCV2疫苗投入市場，主要有全病毒滅活疫苗、亞單位疫苗和嵌合病毒疫苗，其中全病毒滅活疫苗使用較為廣泛。

4.2 加強飼養管理

把好飼料關，避免霉菌毒素的危害，飼喂優質全價的飼料，提高豬群的免疫力；適當降低飼養密度，保持良好的通風和適宜的溫度條件，可以有效降低氨氣等有害氣體的濃度；不同日齡、不同來源的豬避免混群飼養，做到每欄全進全出；根據季節和氣候變化，適時做好防寒保暖、防暑降溫工作，盡量減少仔豬斷奶后的應激反應。

4.3 完善豬場生物安全體系

實行封閉式生產管理，建立合理的豬場準入制度，對外來的人員、車輛、設備器具等進行嚴格消毒；豬場內禁止飼養犬、貓和其他畜禽，并防止野禽進入；做好場區內的滅鼠、殺蟲工作；對場內糞尿和污水進行無害化處理。

4.4 藥物預防

目前還沒有治療該病的特效藥物。對于發病早期的疑似感染豬要及時隔離檢查治療，爭取做到早發現、早診斷、早治療，以控制病原的傳播。斷奶仔豬飼料中添加抗菌藥物提前預防，以控制細菌繼發感染；已發病的豬進行隔離治療，主要以治療繼發感染為主，及時撲殺失去治療價值的病豬，并作無害化處理。