MMP-1、MMP-13及TIMP-1聯合檢測在下肢靜脈曲張血管中的表達及價值

葛明廣

（臨沂市精神衛生中心檢驗科，山東臨沂 276000）

在曲張靜脈中的細胞外基質以及平滑肌細胞等等出現結構的改變，則稱之為下肢靜脈曲張血管重塑，這是情況通常是因各種病理狀態而使得靜脈壁采取補償所引起的[1-2]。在人體內基質金屬蛋白酶（MMPs）以及內源性抑制劑基質金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMPs）能夠共同協調的將所有細胞外基質成分降解掉[3]。因此，可以推測出在人體內TIMPs/MMPs系統能夠在靜脈曲張血管重塑中起著非常重要的作用[4]。目前已經清楚MMP-1能夠有效地降解Ⅰ型膠原三螺旋結構，MMP-13能夠有效地降解Ⅲ型膠原三螺旋結構[5]。該研究檢測在該院（2016年1月—2017年4月）接受治療的下肢靜脈曲張患者的TIMP-1、MMP-1以及MMP-13，并研究TIMPs/MMPs系統在治療靜脈曲張的作用，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇在該院接受治療的下肢靜脈曲張患者（40例）為研究對象，這些患者中男女比例為1∶1（男性20例女性20例），患者年齡均在25～65歲之間，平均年齡為（39.7±3.2）歲。另外還有因外傷所造成截肢者或者靜脈作供體移植的患者作為對照組 （共有20例），且無血管疾病，這些患者中男女比例為1∶1（男性10例，女性10例），年齡均在23～62歲之間，平均年齡為（37.4±2.7）歲。兩組患者的一般資料對比差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

采用的檢測方法是免疫組化檢測法，所用的試劑有DAB顯色劑、兔抗人MMP-1多克隆抗體 BA0568、通用型SP-9000試劑盒以及抗人MMP-13多克隆抗體 BA0574。首先將組織切片再用PBS沖洗，再加非特異性動物血清溫室孵育10 min，再加第一抗體[TIMP-1(即用型)、MMP-1（1∶150）以及 MMP-13（1∶150）]，培育過夜后用PBS沖洗，加入2滴DAB溶液，在顯微鏡下觀察效果較為滿意后用水沖洗。

1.3 結果判定

陽性對照選擇的是結腸腺癌切片，陰性對照組選擇的是PBS。當細胞質被染成棕黃色均勻顆粒時確定為陽性染色，計算在十個高倍視野下的陽性細胞數，將等級分為四個 （當大于75%時定義為+++，當大于50%小于75%時定義為++，當大于25%小于50%時定義為+，當不大于25%時定義為-）。

1.4 統計方法

對數據進行處理和分析采用SPSS 19.0統計學軟件計數資料采用百分率（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MMP-1表達強度對比

通過對比曲張靜脈萎縮組、正常大隱靜脈以及曲張靜脈肥大組的陽性率以及MMP-1表達強度發現，曲張靜脈萎縮組以及肥大組的MMP-1強度和陽性率較正常組均有較大的提高，并且對比差異有統計學意義（P＜0.05），詳細情況見表1。

表1 曲張靜脈萎縮組、正常大隱靜脈以及曲張靜脈肥大組的陽性率以及MMP-1表達強度對比

2.2 MMP-13表達強度對比

通過對比曲張靜脈萎縮組、正常大隱靜脈以及曲張靜脈肥大組的陽性率和MMP-13表達強度發現，曲張靜脈萎縮組以及肥大組的MMP-13強度和陽性率較正常組均有較大的提高，并且對比差異有統計學意義（P＜0.05），詳細情況見表2。

表2 對比曲張靜脈萎縮組、正常大隱靜脈以及曲張靜脈肥大組的陽性率和MMP-13表達強度

2.3 TIMP-1表達強度對比

通過對比曲張靜脈萎縮組、正常大隱靜脈以及曲張靜脈肥大組的陽性率和TIMP-1表達強度發現，曲張靜脈萎縮組以及肥大組的TIMP-1強度和陽性率較正常組均有較大的提高，并且對比差異有統計學意義（P＜0.05），詳細情況見表3。

3 討論

在曲張靜脈中會出現細胞外基質以及平滑肌細胞等主要成分出現結構上的改變的現象稱為下肢靜脈曲張血管重塑，這種現象是靜脈壁為了適應各種各樣的病理狀態所采取的補償措施所引起的。組織形態的塑形以及形態發生改變主要是由細胞外基質的更新所引起的。MMPs是一種依賴Ca2+和Zn2+的一種酶，這種酶在人體中起著清除細胞外基質的作用，這種酶通常與內源性抑制劑TIMPs共同參與細胞外基質的代謝[5]。通過對曲張靜脈管壁中MMPs含量改變的監測能夠間接地了解到細胞外基質的重塑，進而對疾病的發展情況進行全面的了解。

表3 對比曲張靜脈萎縮組、正常大隱靜脈以及曲張靜脈肥大組的陽性率和TIMP-1表達強度

該研究通過對比曲張靜脈萎縮組、正常大隱靜脈以及曲張靜脈肥大組的陽性率以及MMP-1表達強度發現，曲張靜脈萎縮組以及肥大組的MMP-1強度和陽性率均有較大的提高，并且對比差異有統計學意義（P＜0.05）；通過對比曲張靜脈萎縮組、正常大隱靜脈以及曲張靜脈肥大組的陽性率和MMP-13表達強度發現，曲張靜脈萎縮組以及肥大組的MMP-13強度和陽性率均有較大的提高，并且對比差異有統計學意義（P＜0.05）；通過對比曲張靜脈萎縮組、正常大隱靜脈以及曲張靜脈肥大組的陽性率和TIMP-1表達強度發現，曲張靜脈萎縮組以及肥大組的TIMP-1強度和陽性率均有較大的提高，并且對比差異有統計學意義（P＜0.05）。

綜上所述，對下肢靜脈曲張血管中的TIMP-1、MMP-1以及MMP-13進行聯合檢測具有良好的監測效果，值得推廣。