建立中藥材中磷化物殘留量的檢測方法

王 靜 李欣然 余曉燕 劉 衛(wèi) 陳小燕 王 華

（揚子江藥業(yè)集團江蘇制藥股份有限公司，江蘇 泰州 225321）

磷化鋁是現(xiàn)在使用較多的糧食熏蒸類殺蟲劑，也為中藥材滅蟲使用，因磷化鋁有劇毒性，如熏蒸后通風不徹底，殘余的磷化鋁將對人體造成傷害[1-5]。故我們通過建立中藥材中磷化物殘留量檢測方法，控制滅蟲后藥材質量，待檢測結果符合標準規(guī)定方可使用。

1 相關儀器及試劑

1.1 儀器：安捷倫7890氣相色譜儀NPD，型號 XPE205電子天平，型號HH-S電熱恒溫水浴鍋，20 mL頂空進樣瓶，1 mL密封性注射器。

1.2 試劑。磷化鋁：來源江蘇雙菱化工集團有限公司，含量85%；硫酸：GR，來源 國藥集團有限公司；超純水

2 檢測條件

頂空條件。平衡溫度：40 ℃；定量環(huán)溫度：50 ℃；傳輸線溫度：65 ℃；平衡時間：10 min。進樣持續(xù)時間：0.5 min；GC循環(huán)：15 min；樣品瓶體積：20 mL。

氣相色譜條件。色譜柱：毛細管色譜柱（HP-5，30 m×0.32 mm×0.25 μm）；載氣：高純氮氣；載氣流量：2 mL/min；進樣口溫度：150 ℃；柱溫：180 ℃；運行時間：10 min；進樣方式：分流進樣，分流比90∶1；檢測器溫度：250 ℃；氫氣：3 mL/min；空氣：60 mL/min；尾吹氣：30 mL/min。

3 驗證方法

3.1 供試品和對照品溶液配制方法及溶液的制備。樣品配制：用電子天平稱取中藥材粉末（過3號篩）0.5 g，稱取2份樣品，分別置于20 mL頂空進樣瓶中，精密加入10%硫酸溶液10 mL，扎蓋密封頂空瓶，將頂空瓶置于40 ℃水浴中持續(xù)振搖10 min，放入頂空樣品盤中按2.檢測條件測定。

對照品配制：①儲備氣的制備：取磷化鋁10 mg，于20 mL頂空進樣瓶中，使用移液槍精密加入10%硫酸溶液10 mL，立即密封頂空瓶，將頂空瓶置于40 ℃水浴中持續(xù)振搖10 min，使其充分反應，得貯備氣體。儲備氣體需當天制備。②對照品的制備：再取1 mL氣密性注射器從貯備氣體中抽取0.1 mL注入已精密加入10%硫酸溶液10 mL，并扎蓋封口的20 mL頂空瓶中，（為保證儲備氣體的準確性，一份儲備氣體只能抽取5次）將頂空瓶置于40 ℃恒溫水浴中持續(xù)振搖10 min，使其充分混勻，得對照氣體，放入頂空樣品盤中按設定條件測定。

溶液的制備：硫酸溶液：取100 mL硫酸（優(yōu)級純），緩緩加入900 mL水中，待冷卻后加水至1000 mL。

3.2 專屬性考察：取對照品溶液一份，供試品溶液一份，空白溶液一份，對照品供試品混合溶液一份。按測定方法進樣。結果：空白溶液未出現(xiàn)與對照品保留一致的峰，對照品供試品混合溶液峰無開裂。

3.3 準確度實驗。回收率樣品溶液的制備：取枳殼粉末約0.5 g，精密稱定，置于頂空瓶中，平行稱取6份，精密加入10%硫酸溶液10 mL至于密封頂空瓶，使用1 mL注射器從對照品氣體（2）中抽取0.1 mL分別注入上述6個20 mL頂空瓶中，將頂空瓶置于40 ℃水浴中持續(xù)振搖10 min，得回收率樣品溶液。

取對照品溶液（2）和回收率樣品溶液，分別進樣，記錄色譜圖結果。計算回收率樣品溶液的測得濃度，計算磷化鋁的回收率。經試驗，回收率為93%～97%，在藥典規(guī)定70%～150%范圍內。計算：回收率=[樣品實測面積-樣品理論面積]/對照品溶液理論面積×100%。對照品溶液理論面積為3針對照品溶液的平均值。見表1。

表1 回收率樣品溶液的制備

3.4 重復性試驗。配制空白溶液。使用1 mL注射器從3.1.對照品溶液（2）氣體中吸取0.1 mL，分別注入6個精密加入10 mL 10%硫酸溶液且扎蓋密封的20 mL頂空瓶中，置于40 ℃恒溫水浴中持續(xù)振搖10 min，得重復性試驗溶液。計算6針對照品RSD值，RSD為2.9%。見表2。

表2 重復性試驗

3.5 線性關系驗證：使用1 mL注射器從3.1.對照品溶液（2）氣體中吸取0.05 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL，注入已精密加入10 mL 10%硫酸溶液且扎蓋密封的20 mL 頂空進樣瓶中，將樣品瓶置于40 ℃恒溫水浴中振搖10 min，使其充分混勻，得線性對照品溶液。

將5份對照品溶液分別按設定條件測定，測定峰面積，以對照品濃度X（mg/mL）為橫坐標，峰面積積分值Y為縱坐標進行線性回歸。見表3。

表3 線性關系驗證

4 樣品測定

稱取2個不同批次的中藥材供試品0.5 g，各2份。同法測定空白一份。測定樣品中磷化物殘留，測得磷化物殘留量應不得過0.05 mg/kg。

4.1 未熏蒸樣品檢測結果，見表4。

表4 未熏蒸樣品檢測結果

4.2 第一次熏蒸樣品檢測結果，見表5。

表5 第一次熏蒸樣品檢測結果

4.3 第二次熏蒸樣品檢測結果，見表6。

表6 第二次熏蒸樣品檢測結果

通過對上述藥材兩次熏蒸后磷化物殘留進行連續(xù)監(jiān)測，第一次熏蒸為通風第2天開始檢測，因樣品通風效果不好，檢測至第5天時結果仍不符合要求。故進行第二次熏蒸試驗時，加強通風效果，并從熏蒸第3天開始連續(xù)監(jiān)測，第3天時，檢測結果已低于0.05 mg/kg，符合規(guī)定。通風效果對磷化物消散有較大影響，滅蟲后應保證足夠的通風，才能達到散氣效果。

5 結 論

經過驗證，中藥材中磷化物殘留量測定方法，專屬性符合規(guī)定，無雜質干擾供試品，對照品峰無開裂，準確度試驗回收率為93%～97%，重復性試驗RSD為2.9%，線性范圍R=0.997。且通過對12批樣品的檢測，本方法在上述范圍內測定中藥材中磷化物殘留量的結果準確有效，可以用于中藥材滅蟲后的磷化物檢測。