不同保存條件對分離膠采血管血清生化結(jié)果影響的研究

姚秀菊 李廣權(quán)

（三六三醫(yī)院檢驗科 四川 成都 610041）

臨床檢驗工作中常有不能及時檢測或檢測后要求復(fù)檢的情況，為保證檢測或復(fù)檢結(jié)果的可靠性，防止樣本結(jié)果在放置過程中發(fā)生較大變化。可利用一種惰性聚合高分子物質(zhì)：分離膠，其穩(wěn)定性好，比重為1.045～1.050，恰好在血清比重和血細胞比重之間，離心后可有效地將血清與血細胞分隔開[1]，避免血液離體后細胞內(nèi)外某些成分濃度差異而相互滲透而使結(jié)果受到胞內(nèi)高濃度物質(zhì)及血細胞代謝影響。本次研究我們通過比較分離膠采血管血清即時測定結(jié)果與室溫及4℃冰箱保存一段時間后的結(jié)果差異，旨在評估分離膠真空采血管保存血清的可行性及最佳保存方式。

1.材料與方法

1.1 標本來源

選取參加我院健康體檢的志愿者20例（包括本科實習(xí)生10例），要求采血前空腹8h以上，脂血溶血樣本除外。

1.2 儀器與試劑

采用Hitachi公司7600-010生化分析儀，原裝配套ISE試劑及校準液。ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶），AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶），GGT（谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶），AKP（堿性磷酸酶），TBIL（總膽紅素），DBIL（直接膽紅素），BUN（尿素），Cr（肌酐），HDL-C（高密度脂蛋白膽固醇）試劑由日本和光株式會社提供，TP（總蛋白），ALB（白蛋白），UA（尿酸），GLU（葡萄糖），TG（甘油三酯），TC（總膽固醇）試劑由四川邁克公司提供，校準品為德國Roche公司生產(chǎn)的多項目C.F.A.S校準液（批號：177955），質(zhì)控品由英國朗道公司提供（批號：中值：897UN，高值：697UE）。

1.3 真空分離膠管

成都瑞琦公司提供（批號：20150612）。

1.4 研究方法

1.4.1 樣本準備 納入研究的20例志愿者于同一天上午8∶00左右每人用分離膠管采集兩管靜脈血，每支采集4ml，并編上號。將采集的血樣分成兩組，每組20管，每組包含每例志愿者的樣本各一管）。對采集的血樣室溫直立靜置30min后以4000r/min離心10min分離出血清（血清與血細胞之間用分離膠隔開）待檢測。

1.4.2 樣本檢測 隨機選擇一組離心后的樣本立即進行ALT，AST，GGT，AKP，TP，ALB，TBIL，DBIL，BUN，Cr，UA，GLU，TG，TC，HDL-C，K，Na，Cl指標檢測，檢測結(jié)果以初始結(jié)果表示，檢測結(jié)束后立即用原樣本管蓋加蓋保存。一組樣本放置于室溫（25℃）加蓋保存，另一組樣本加蓋置于冰箱4℃保存。室溫放置樣本分別于24h后及7天后再次檢測上述生化指標，4℃冰箱放置樣本放置7天后再次對上述指標檢測，每次檢測結(jié)束后均用原樣本管蓋加蓋保存，每次檢測均按實驗項目標準化操作程序（SOP），確保當天的質(zhì)控結(jié)果通過后再進行檢測。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料采用均值±標準差表示，組間比較采用配對t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 分離膠血清初始結(jié)果與室溫放置24小時檢測結(jié)果比較 對分離膠采血管內(nèi)血清即時檢測上述生化結(jié)果與室溫放置24小時后檢測結(jié)果比較，采用配對t檢驗分析，對應(yīng)t值分別為1.658，1.575，0.991，-1.686，-1.715，1.258，1.852，1.971，-1.777，-1.759，-1.301，0.786，-1.085，-1.266，0.576，1.035，1.124，1.718，P值均＜0.05，其差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義，比較結(jié)果見表1。

表1 分離膠采血管初始結(jié)果與室溫放置24小時檢測結(jié)果比較（）

表1 分離膠采血管初始結(jié)果與室溫放置24小時檢測結(jié)果比較（）

*初始結(jié)果與室溫放置24小時后檢測結(jié)果經(jīng)配對t檢驗比較。

ALT 1.658 0.118 AST 1.575 0.125 GGT 0.991 0.362 AKP -1.686 0.114 TP -1.715 0.103 ALB 1.258 0.212 TBIL 1.852 0.072 DBIL 1.971 0.063 Urea -1.777 0.080 Cr -1.759 0.090 UA -1.301 0.201 GLU 0.786 0.454 TG -1.085 0.300 TC -1.266 0.210 HDL-C 0.576 0.511 K 1.035 0.355 Na 1.124 0.267 Cl 1.718 0.102

2.2 分離膠采血管初始結(jié)果與室溫放置7天結(jié)果比較及初始結(jié)果與4℃冰箱放置7天結(jié)果比較 分離膠采血管血清初始生化結(jié)果與室溫放置7天后結(jié)果比較，采用配對t檢驗分析，GGT，GLU，Na，Cl對應(yīng)P值分別為0.062，0.054，0.076，0.065外，表明這4個項目室溫放置7天后結(jié)果與初始結(jié)果的差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義，其余項目對應(yīng)P值均＜0.05，即其余項目在室溫放置7天后結(jié)果與初始結(jié)果的差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義。而4℃冰箱保存7天樣本生化結(jié)果與初始結(jié)果比較，采用配對t檢驗分析，所有項目對應(yīng)P值均＞0.05，表明4℃冰箱保存7天生化結(jié)果與初始結(jié)果的差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義，比較結(jié)果見表2。

表2 分離膠采血管初始結(jié)果與室溫放置7天結(jié)果比較以及初始結(jié)果與冰箱放置7天結(jié)果比較（）

表2 分離膠采血管初始結(jié)果與室溫放置7天結(jié)果比較以及初始結(jié)果與冰箱放置7天結(jié)果比較（）

*初始結(jié)果與室溫放置7天后檢測結(jié)果配對t檢驗比較；**初始結(jié)果與4℃冰箱放置7天后檢測結(jié)果配對t檢驗比較。

初始結(jié)果與室溫放置7天 初始結(jié)果與4℃放置7天生化指標 結(jié)果比較 結(jié)果比較t值 P值* t值 P值**ALT 2.618 ＜0.05 1.658 0.118 AST 2.259 ＜0.05 1.575 0.125 GGT 1.891 0.062 0.991 0.362 AKP -3.296 ＜0.05 -1.686 0.114 TP -3.435 ＜0.05 -1.715 0.103 ALB 6.778 ＜0.05 1.258 0.212 TBIL 3.552 ＜0.05 1.852 0.072 DBIL 3.451 ＜0.05 1.971 0.063 Urea -7.347 ＜0.05 -1.777 0.080 Cr -9.199 ＜0.05 -1.759 0.090 UA -3.851 ＜0.05 -1.301 0.201 GLU 1.986 0.054 0.786 0.454 TG -18.385 ＜0.05 -1.085 0.300 TC -7.066 ＜0.05 -1.266 0.210 HDL-C 2.892 ＜0.05 0.576 0.511 K-8.134 ＜0.05 1.035 0.355 Na 1.849 0.076 1.124 0.267 Cl 1.965 0.065 1.718 0.102

3.討論

分離膠采血管不僅避免了離體后細胞內(nèi)外某些成分因濃度差的相互滲透而造成的分析前誤差，同時避免了因放置時間過長導(dǎo)致細胞溶血對血清生化指標的影響，在一定時間內(nèi)保證了血清成分的穩(wěn)定性。比如血液中穩(wěn)定性較差的葡萄糖，實際工作中為了便于與其它生化指標同時檢測，臨床上普遍采用普通生化管收集，很多研究[2，3]表明，葡萄糖在普通生化管很容易酵解，特別在樣本量較大的臨床實驗室，后檢測的血液葡萄糖結(jié)果往往降低非常明顯，嚴重影響了近些年日益增多的糖尿病的檢出率。雖然在防止糖酵解劑的容器中有一定的抑制作用[4]，但隨著放置時間的延長，葡萄糖降低還是很明顯。本次研究結(jié)果表明，葡萄糖在分離膠采血管中的穩(wěn)定性不管是室溫放置7天還是4℃冰箱放置7天葡萄糖結(jié)果與初始結(jié)果比較變化均不明顯。

本研究我們發(fā)現(xiàn)，采用分離膠采血管收集的血清，室溫放置24小時后其生化指標仍很穩(wěn)定，明顯高于普通生化管中血清生化指標穩(wěn)定性[5]。同時我們還發(fā)現(xiàn)，分離膠管中血清在4℃冰箱保存7天后生化指標的穩(wěn)定性明顯高于室溫放置7天的結(jié)果，與Marquet P[6]等研究報道一致。提示檢驗工作者在遇到不能及時檢測或需要復(fù)檢前幾天的樣本，若采用分離膠管收集并4℃冰箱保存的血清，其檢測結(jié)果的可靠性明顯高于室溫保存的血清。這是由于分離膠的穩(wěn)定性除了與分離膠質(zhì)量有關(guān)外[7]，還受溫度影響較大，由于不同廠家對分離膠管要求的儲存溫度不同，其中也包括離心時的溫度[8]，因為普通離心機離心時可使樣本的溫度升高，達到規(guī)定的溫度會使分離膠溶解在血清中，漂浮的分離膠或油滴不僅對生化反應(yīng)杯和樣本針造成堵塞和污染，而且將對一些生化測定結(jié)果產(chǎn)生影響。比如我們本次研究發(fā)現(xiàn)，室溫放置7天后的樣本組甘油三酯結(jié)果增高明顯。也有研究[9]發(fā)現(xiàn)離心后分離膠的漂浮物可引起IgG檢測結(jié)果增高，所以有條件的單位最好采用低溫離心機對分離膠采血管離心處理。同時有研究[10,11]發(fā)現(xiàn)不同材質(zhì)分離膠管保存的血清，其穩(wěn)定性是不同的，塑料材質(zhì)分離膠管比玻璃材質(zhì)的分離膠管可提供更佳品質(zhì)的檢測樣本。所以實驗室在選用采血管前，應(yīng)參照美國CLSI在2010年12月出版的GP34-A文件對擬選用采血管進行性能驗證和評價[12］。

本研究表明：普通生化管穩(wěn)定性差的生化項目，可以考慮使用分離膠采血管采集，并及時分離血清及時檢測，對檢測后樣本或不能及時檢測的樣本，分離血清后最好置4℃冰箱保存，不宜長時間室溫放置，以保證復(fù)檢或檢測結(jié)果的可靠性。