表皮生長因子對脂多糖刺激斷奶仔豬腸道鈉磷轉運載體蛋白Ⅱb表達的影響

湯小朋 徐 榮 李成良 彭 鵬 禹琪芳 方熱軍

(湖南農業大學動物科學技術學院，湖南畜禽安全生產協同創新中心，長沙410128)

磷(P)是生物系統的重要組成部分，涉及到各種生理過程，包括能量代謝、細胞信號、核苷酸和磷脂生物合成以及牙齒、骨骼形成[1-2]。研究已證實鈉磷轉運載體蛋白Ⅱb(type Ⅱb sodium-phosphate cotransporter, NaPi-Ⅱb)是介導腸道磷主動轉運的主要途徑[3-4]。NaPi-Ⅱb受許多因素的調節，表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)是調節其表達的重要因素之一[5-8]。EGF是一種重要的生長因子，廣泛存在于乳液、唾液、尿液、腸液、血液、羊水等體液中，對細胞生存、增殖與分化、遷移、凋亡等具有重要作用[9-11]。前人在人Caco2細胞及豬小腸上皮細胞(IPEC-J2)中的研究表明，EGF可抑制細胞NaPi-Ⅱb的表達，說明在正常培養條件下，EGF可能通過其他途徑調節細胞對磷的吸收。理論上講，在EGF對腸道屏障功能的修復過程中，必然伴隨大量DNA、RNA和蛋白質的合成，其前提需要經腸道吸收更多的磷，此過程中所需更多的磷是通過何種途徑滿足機體需要還未見報道。因此，本研究通過細胞試驗與動物試驗相結合的方法，研究EGF對脂多糖(LPS)刺激的應激狀態下斷奶仔豬小腸磷吸收的影響，為進一步詮釋EGF對磷的吸收提供新的認識。

1 材料與方法

1.1 細胞試驗

1.1.1 主要試劑

EGF購自Peprotech公司；LPS、Tris、十二烷基磺酸鈉(SDS)、過硫酸銨(APS)、四甲基乙二胺(TEMED)、吐溫-20(Tween-20)、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、麗春紅購自Sigma公司；胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶、青鏈雙抗購自Gibco公司；DMEM/F12(HyClon)培養基購自GE公司；CCK-8試劑盒、BCA蛋白試劑盒、磷酸緩沖液(PBS)、RIPA蛋白裂解液購自索萊寶公司；Trizol試劑購自Invitrogen公司；……