伏馬毒素B1適配體的篩選及其 快速定量檢測方法的建立

周 妍 刁晨曦 張圓圓 陸濤峰 趙麗麗 陳洪巖**

(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，哈爾濱150030；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，獸醫(yī)生物技術(shù) 國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱150069；3.牡丹江師范學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，牡丹江157011)

伏馬毒素(fumonisins)主要是由串珠鐮刀菌和多育鐮刀菌在一定的溫度和濕度下產(chǎn)生的一類由不同多氫醇和丙三羧酸組成的結(jié)構(gòu)類似的雙酯水溶性化合物[1]，主要包括伏馬毒素B1(fumonisin B1，F(xiàn)B1)、伏馬毒素B2和伏馬毒素B3等，其中FB1毒性最強(qiáng)，污染最普遍[2]。河南省玉米樣品中FB1的陽性率為97.71%，湖北、廣東、四川、廣西和吉林5省全部為100%[3]。歐盟規(guī)定未加工玉米及嬰兒食品中FB1的最大殘留量為200 μg/kg[4]。我國規(guī)定FB1在糧食食品中的最大殘留量為12 μg/kg[5]，低于歐盟標(biāo)準(zhǔn)。動(dòng)物毒害作用研究證明FB1可致馬腦白質(zhì)軟化病[6]、猴動(dòng)脈粥樣硬化[7]、豬肺水腫[8]、大鼠肝癌[9-10]等。

近幾年，適配體(aptamer)研究以其勢不可擋的態(tài)勢一躍成為科學(xué)家們的討論焦點(diǎn)。它是利用指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)技術(shù)，即從單鏈寡核苷酸文庫中篩選出能與靶標(biāo)高親和力和特異性結(jié)合的寡核苷酸序列。適配體是通過鏈內(nèi)堿基間的氫鍵作用折疊形成穩(wěn)定的發(fā)卡、莖環(huán)、假結(jié)、口袋、凸環(huán)和G-四鏈體等二級或三級結(jié)構(gòu)，與靶標(biāo)空間結(jié)構(gòu)匹配結(jié)合的RNA或單鏈脫氧核糖核酸(ssDNA)[11-12]。理論上任何靶標(biāo)都可以篩選到對應(yīng)的適配體，包括小分子物質(zhì)[13]。適配體一般由幾十個(gè)核苷酸組成，相對分子質(zhì)量小、易穿透細(xì)胞膜、性質(zhì)穩(wěn)定、容易制備和修飾[14]。……