賴氨酸對奶牛乳腺上皮細胞內乳糖 合成相關基因表達的影響

陳 璐 趙艷麗 郭曉宇 史彬林 閆素梅

(內蒙古農業大學動物科學學院，呼和浩特010018)

乳糖是牛奶的主要成分，是限制牛奶產奶量的關鍵因素之一，在一定范圍內產奶量隨著乳糖合成的增加而增加[1-3]。氨基酸(AA)是合成乳蛋白的主要前體物，在影響乳蛋白合成的同時，也對乳糖合成產生影響[4]。賴氨酸(Lys)是乳蛋白合成主要的必需氨基酸(EAA)，也是奶牛的限制性氨基酸[5]。因此，深入研究Lys對乳糖合成的影響及機理，對調節乳腺內乳成分的合成和增加產奶量具有重要意義。王麗娜[6]發現以奶牛乳腺上皮細胞(BMECs)為模型，在培養基中添加EAA可同時促進了乳蛋白和乳糖的合成。云伏雨[7]研究表明，在奶牛飼糧中添加適宜水平的Lys可以提高產奶量、乳蛋白率和乳糖率。可見，Lys在一定程度上影響了乳糖的合成，但前人的研究多集中在向奶牛體內灌注Lys及體外培養添加Lys影響乳蛋白合成的方面，對體外添加Lys影響乳糖合成及其機理方面的探索研究甚少，有必要對此進行深入研究。鑒于此，本研究以BMECs為模型，研究不同濃度Lys對乳糖合成相關基因表達的影響，為進一步探討Lys對BMECs內乳糖合成的影響機理提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

試驗主要試劑：Ⅱ型膠原酶、DMEM/F12培養基、胰島素轉鐵蛋白硒鈉、胎牛血清(FBS)、0.25%胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)，購自Gibco公司；賴氨酸(Lys，L8662)、氫化可的松、表皮生長因子、催乳素、瓊脂糖，購自Sigma公司；RNAiso PLUS、PrimeScript RT Master Mix和SYBR Premix ExTaqTMⅡ，購自TaKaRa公司；牛D乳糖酶聯免疫吸附試劑盒(EHJ-90716h)，購自廈門慧嘉生物技術有限公司。……