勿忘我花揮發(fā)油化學(xué)成分分析

李國明 張麗萍 劉小瓊 戴余波 李慶聰 王曉媛

摘 要 為了研究勿忘我花揮發(fā)油的化學(xué)成分，采用石油醚蒸餾提取法從勿忘我花干樣中提取揮發(fā)油，并用GC-MS法對揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行鑒定，鑒定出43種主要化合物，其峰面積相對含量約占揮發(fā)油總量的92.89%。勿忘我花揮發(fā)油的主要組分為4-戊烯-2-醇（3.49%）、γ-戊內(nèi)酯（5.51%）、1-戊醇（7.77%）、2-乙基己醇（5.83%）、肉豆蔻醇（5.26%）、月桂酸（5.91%）、香葉醇（4.62%）、正癸酸（6.64%）、十一醛（7.81%）、萜品油稀（6.90%）、Gamma-萜品稀（5.11%）和桉葉油醇（4.47%）。

關(guān)鍵詞 勿忘我花 ；揮發(fā)油 ；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀 ；分析鑒定

中圖分類號 Q949.777.4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2018.04.012

Abstract The volatile oils were extracted from dry flowers of Myosotis sylvatica by steam distillation and petroleum ether， and their chemical constituents were analyzed and identified by the method of GC-MS. There were 43 major compounds identified， which accounted for 92.89% of the total volatile oils. The main components of the volatile oils were 4-penten-2-ol （3.49%），γ-valerolactone （5.51%）， 1-amyl alcohol （7.77%）， 2-ethyl hexanol （5.83%）， myristyl alcohoa （5.26%）. dodecanoic acid （5.91%）， geraniol （4.62%）， capric acid （6.64%）， undecanal （7.81%）， terpinolene （6.90%）， gamma-terpinene （5.11%）， and cineole （4.47%）.

Keywords flower of Myosotis sylvatica ； volatile oils ； Gas Chromatography-Mass Spectrometry ； analysis and identification

勿忘我（Myosotis sylvatica），別名勿忘草、星辰花、補(bǔ)血草、匙葉草、不凋花等，為一種多年生紫草科勿忘我屬的植物。勿忘我有開淺藍(lán)色的小花，花期是4～5月。勿忘我適應(yīng)力強(qiáng)，喜干燥、涼爽的氣候，忌濕熱，喜光，耐旱，生長適溫為20～25 ℃；適合在疏松、肥沃、排水良好的微堿性土壤中生長；分布于歐洲、伊朗、俄羅斯、巴基斯坦、克什米爾、印度以及中國江蘇、西北、華北、四川、云南、東北等地；生長于海拔200～4 200 m的地區(qū)；多生于山地林緣、山坡、林下以及山谷草地[1]。

中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，勿忘我花性味甘、寒，入肝、脾、腎經(jīng)，富含維生素C和花青素等，具有清熱解毒、清心明目、養(yǎng)陰補(bǔ)腎之功，適用于肺風(fēng)粉刺、疔瘡癤腫、皮膚粗糙、視物昏花、大便秘結(jié)、小便短黃等[2]；也用于治療雀斑粉刺、免疫力低下、病毒感染、心腦血管供血不足等疾病方面，是健康女性的首選飲品，在醫(yī)藥、食品、化妝品等領(lǐng)域應(yīng)用前景廣泛[3～4]。

現(xiàn)階段，對勿忘我花研究主要集中在勿忘我花色素的分離與鑒定[2～4]，勿忘我花中礦質(zhì)元素的測定[5]，勿忘我花中總黃酮含量的測定[6]，勿忘我組織培養(yǎng)技術(shù)的研究[7～11]，及勿忘我花色素的性質(zhì)研究[12]等方面，對勿忘我花中揮發(fā)性化學(xué)成分的研究鮮有報道。鑒于這樣的研究現(xiàn)狀，筆者采用石油醚蒸餾提取法從勿忘我花干樣中提取揮發(fā)油，并以氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）對其揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行了分析鑒定，以峰面積歸一化法計算了揮發(fā)性化學(xué)成分的相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)，為進(jìn)一步研究和開發(fā)勿忘我花提供參考性的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

勿忘我花，2017年9月購買于瑞麗市臺麗街農(nóng)貿(mào)市場花卉區(qū)，并經(jīng)云南省德宏熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所李守嶺副研究員鑒定。

儀器，Trace ISQ氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Thermo Fisher公司）；色譜柱，毛細(xì)管色譜柱TG-1701MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；索氏提取裝置，天津化玻有限公司；電熱套，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；移液器，METTLER TOLEDO；無水硫酸鈉（分析純）；石油醚（分析純）：沸程30～60℃；無水乙醇（色譜純）；

1.2 方法

1.2.1 勿忘我花揮發(fā)油提取

以購買于瑞麗市臺麗街農(nóng)貿(mào)市場的勿忘我花為材料，對新鮮的勿忘我花進(jìn)行陰干，粉碎成花末過20目樣品篩；稱取15.5 g勿忘我花樣品，用濾紙筒包裹好放入索氏提取管中，蒸餾燒瓶內(nèi)加入100 mL石油醚，控制溫度為50℃，回流提取4 h，最后揮干溶劑收集所得的淡紫色澄清液體即為勿忘我花揮發(fā)油，帶有特殊的香味；經(jīng)稱量計算可知出油率為1.5%，采用5.0 mL色譜純乙醇溶解后轉(zhuǎn)移至試劑瓶中，密封保存待分析。

1.2.2 供測試溶液的制備

以移液器準(zhǔn)確移取0.5 mL勿忘我花揮發(fā)油于5.0 mL容量瓶中，加色譜純無水乙醇定容至刻度，經(jīng)旋渦混合器充分混勻靜置后，吸取1.0 mL待測液至進(jìn)樣瓶中。

1.2.3 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）分析條件

氣相色譜條件：TG-1701MS毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），程序升溫（初始溫度為70℃保持3 min，以3.0℃/min的升溫速率升至220℃保持8.0 min），載氣為高純He，恒流模式，柱流量為1.0 mL/min，平均線速度為37 cm/s，進(jìn)樣量1.0 μL，進(jìn)樣口溫度230℃，分流比50∶1。

質(zhì)譜條件：EI電離模式，電子倍增管電壓1 913.0 V，電子能量70.0 eV，離子傳輸管溫度250 ℃，離子源溫度230 ℃，掃描質(zhì)量范圍m/z為40～550 amu。

1.2.4 成分分析

按上述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析條件，將制備好的勿忘我花揮發(fā)油待測溶液通過氣相色譜儀的自動進(jìn)樣器進(jìn)樣測試，得到勿忘我花揮發(fā)油總離子流圖。總離子流圖中各色譜峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到的揮發(fā)性化學(xué)成分色譜圖由質(zhì)譜工作站Xcalibur 3.0結(jié)合NIST08標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫，通過對比進(jìn)行檢索，并對圖譜進(jìn)行綜合分析。

2 結(jié)果與分析

采用石油醚蒸餾提取法從勿忘我花干樣中提取揮發(fā)油，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）對揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行分析鑒定，得到的勿忘我花揮發(fā)油總離子流圖見圖1。通過Xcalibur3.0質(zhì)譜工作站結(jié)合NIST08標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫進(jìn)行對比分析，共鑒定出43種主要的揮發(fā)性化學(xué)成分，占揮發(fā)油總成分的92.89%。各揮發(fā)性化學(xué)成分的出峰時間及相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)見表1。

由表1可知，從瑞麗市購買的勿忘我花揮發(fā)油中揮發(fā)性化學(xué)成分相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)2.0%以上的主要成分有17個，分別為：4-戊烯-2-醇（3.49%）、γ-戊內(nèi)酯（5.51%）、1-戊醇（7.77%）、2-乙基己醇（5.83%）、肉豆蔻醇（5.26%）、月桂酸（5.91%）、香葉醇（4.62%）、正癸酸（6.64%）、1-十一醛（7.81%）、萜品油烯（6.90%）、Gamma-萜品稀（5.11%）、桉葉油醇（4.47%）、天竺葵醇（2.25%）、α-辛基-γ-丁內(nèi)酯（2.08%）、10-十一碳稀酸（2.35%）、芳樟醇（2.01%）和1-對薄荷稀-9-醛（2.20%），這17個揮發(fā)性成分占揮發(fā)油色譜總餾出峰面積的80.21%。

3 討論

本研究采用有機(jī)溶劑石油醚代替水來進(jìn)行勿忘我花干樣中揮發(fā)油的蒸餾提取，通過與前期采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油的效果比較來看，對于樣品量較少的干樣，石油醚能較大程度地將勿忘我花中的脂溶性揮發(fā)油提取出來，且鑒定出的組分與水蒸氣蒸餾法有所差異，水蒸氣蒸餾法對新鮮樣品中揮發(fā)油的提取效果比較明顯。

現(xiàn)階段對勿忘我化學(xué)成分研究主要集中于對其花色素的分離鑒定及黃酮含量的測定等方面，關(guān)于勿忘我花揮發(fā)油化學(xué)成分的研究相對較少。丁來欣等[2]采用超聲波強(qiáng)化溶劑法提取了勿忘我花色素，并利用液相色譜儀分離出了7個組分，經(jīng)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀鑒定出勿忘我花色素中含有矢車菊、葡萄糖苷、黃酮及其衍生物、飛燕草素、芍藥定及其苷；劉步東等[6]采用乙醇為提取劑，超聲波提取法提取勿忘我花中的黃酮，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，通過紫外分光光度計測得勿忘我花中總黃酮含量為1.3%；劉宇等[13-14]分別采用水蒸氣蒸餾法和超臨界CO2萃取法對與勿忘我同屬的植物黃花補(bǔ)血草花進(jìn)行了揮發(fā)油的提取，并采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析鑒定，水蒸氣蒸餾法共鑒定出了70種化合物，其中主要成分為2-硝基乙醇（59.63%）、正二十四烷（3.71%）、二苯胺（2.31%）、6，10，14-三甲基-2-十五烷酮（1.79%）、正二十一烷（1.57%）、丙二醇（1.40%）；超臨界CO2萃取法共鑒定出了59種化合物，其中含量較高的主要成分為鄰苯二甲酸異丁基辛酯（12.47%）、十七烷（1.37%）、7-十五烷（1.40%）、二十三烷（8.21%）、2，6，10，14-四甲基十六烷（3.16%）、二十七烷（8.21%）、1-碘十六烷（1.40%）、二十九烷（13.77%）、菜油甾醇（13.28%）、22，23-二氫豆甾醇（3.87%）、羽扇豆醇（1.43%）等。本研究采用石油醚蒸餾提取法從勿忘我花干樣中提取揮發(fā)油，并采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析鑒定，其揮發(fā)性化學(xué)成分及含量均與同屬植物黃花補(bǔ)血草有所差異，這些差異與提取溶劑和提取方法等因素有關(guān)。隨著新的分析鑒定和處理方法的應(yīng)用，關(guān)于勿忘我花化學(xué)成分的研究必會更加深入，為進(jìn)一步研究和開發(fā)應(yīng)用勿忘我花提供科學(xué)依據(jù)。

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