耐藥基因ERCC1、RRM1和BRCA1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及預(yù)后意義

尚春香

（青海省第五人民醫(yī)院腫瘤科，青海 西寧 810007）

肺癌屬于全球癌癥死亡主要原因，且非小細(xì)胞肺癌占了很大部分，約為80%。手術(shù)治療本病是常用方案，但術(shù)后生存期并不理想，有文獻(xiàn)指出Ⅰa、Ⅰb、Ⅱa、Ⅱb期非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后5年生存率分別為70%、60%、55%、40%，而存在同側(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，5年生存率不足15%[1]。如果可從生物標(biāo)記作為標(biāo)準(zhǔn)來篩選治療，除了可提高療效，還能避免不良反應(yīng)[2]，為此本文就非小細(xì)胞肺癌中耐藥基因ERCC1、RRM1和BRCA1的表達(dá)及其對預(yù)后的價值進(jìn)行了探討，將收治的30例非小細(xì)胞肺癌情況報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇我院2016年1月至2018年1月收治的非小細(xì)胞肺癌患者30例作為研究對象，其中含有旁癌組織15例、癌內(nèi)15例，男性23例、女性7例；年齡44～76（59.5±5.4）歲；鱗癌17例、腺癌13例；TNM分期顯示Ⅰ期10例、Ⅱ期8例、Ⅲ期12例。

1.2 方法：按照上海華舜生物工程公司有關(guān)于RNA抽提純化操作手冊的方式對肺癌與癌旁組織總RNA進(jìn)行抽提，提取RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行鑒定，判斷其完整性，經(jīng)紫外分光光度計測定光密度值（260 nm與280 nm），并計算RNA純度、濃度，以0.1%DEPC處理及抽提RNA到相同濃度。按照Promega公司的RT試劑盒說明，抽取前述RNA液2 μL保溫于70 ℃中10 min，然后將4 μL的25 mmol/L氯化鎂、2 μL的10 mmol/L dNTP、2 μL的10×逆轉(zhuǎn)錄酶緩沖液、0.5 μL的RNA酶抑制劑等加入其中，補(bǔ)充DEPC處理水到20 μL，保溫于42 ℃ 15 min后實施逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，合成cDNA第一鏈。結(jié)束后，加熱到99 ℃，5 min后滅活逆轉(zhuǎn)錄酶，將20 μL無菌水加入混勻后放置在-20 ℃冰箱中保存。之后按照熒光定量PCR法測定患者的ERCC1、RRM1、BRCA1基因mRNA，并做好記錄。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理：本研究數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS20.0處理，ERCC1、RRM1、BRCA1在癌內(nèi)與癌旁組織中的表達(dá)用（±s）表示，實施t檢驗，在肺癌組織表達(dá)的相關(guān)性則用秩相關(guān)性檢驗，在不同病理與分期表達(dá)用（±s）表示，實施t檢驗，生存期用（±s）表示，實施t檢驗，P＜0.05作為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ERCC1、RRM1、BRCA1在癌內(nèi)表達(dá)與癌旁組織表達(dá)中的差異比較：非小細(xì)胞肺癌中耐藥基因ERCC1、RRM1、BRCA1在癌內(nèi)的表達(dá)比癌旁組織明顯更高（P＜0.05），見表1。

表1 ERCC1、RRM1、BRCA1在癌內(nèi)表達(dá)與癌旁組織表達(dá)中的差異比較（±s，×10-3）

表1 ERCC1、RRM1、BRCA1在癌內(nèi)表達(dá)與癌旁組織表達(dá)中的差異比較（±s，×10-3）

注：與癌旁組織比較，*P＜0.05

表達(dá)部位 ERCC1 RRM1 BRCA1癌內(nèi)(15) 15.32±1.26* 5.48±0.85* 0.89±0.22*癌旁組織(15) 6.58±0.75 1.78±0.34 0.28±0.06

2.2 耐藥基因ERCC1、RRM1、BRCA1在癌內(nèi)表達(dá)相關(guān)性分析：30例非小細(xì)胞肺癌患者，ERCC1與RRM1表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0.763，P＜0.05；RRM1與BRCA1表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0.841，P＜0.05；ERCC1與BRCA1表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0.659，P＜0.05。

2.3 耐藥基因ERCC1、RRM1、BRCA1在不同病理類型與分期表達(dá)中的差異比較：RRM1在鱗癌中表達(dá)明顯比腺癌中高（P＜0.05），但不同分期表達(dá)無差異（P＞0.05），ERCC1、BRCA1不論是病理類型還是分期中差異均不明顯（P＞0.05），數(shù)據(jù)見表2。

表2 耐藥基因ERCC1、RRM1、BRCA1在不同病理類型與分期表達(dá)中的差異比較（±s，×10-3）

表2 耐藥基因ERCC1、RRM1、BRCA1在不同病理類型與分期表達(dá)中的差異比較（±s，×10-3）

注：與腺癌比較，*P＜0.05

欄目 情況 ERCC1 RRM1 BRCA1病理分型 鱗癌 14.39±3.21 7.84±1.24* 1.17±0.23腺癌 10.28±4.51 2.17±0.52 0.89±0.32臨床分期 Ⅰ期 2.11±0.83 0.54±0.22 0.77±0.15Ⅱ期 0.54±0.12 4.62±1.02 0.84±0.24Ⅲ期 9.45±1.45 2.18±0.67 1.02±0.33

2.4 耐藥基因ERCC1、RRM1、BRCA1表達(dá)與預(yù)后情況分析：RRM1、BRCA1在低表達(dá)組與高表達(dá)組間中位生存期均有明顯差異（P＜0.05，可見圖1A與C），而ERCC1則無差異（P＞0.05，可見圖1B），數(shù)據(jù)見表3。

表3耐藥基因ERCC1、RRM1、BRCA1表達(dá)與預(yù)后情況分析（±s，d）

表3耐藥基因ERCC1、RRM1、BRCA1表達(dá)與預(yù)后情況分析（±s，d）

注：與低表達(dá)相比，*P＜0.05

表達(dá)高低 ERCC1 RRM1 BRCA1低表達(dá) 702.18±84.26 600.04±56.51 502.18±34.57高表達(dá) 732.85±90.85 654.83±60.76* 555.48±43.21*

圖1 耐藥基因ERCC1、RRM1、BRCA1表達(dá)與預(yù)后之間的生存曲線圖大致情況

3 討 論

非小細(xì)胞肺癌病死率較高，手術(shù)治療是常用方案，但近幾年術(shù)后輔助化療或放療逐漸實施起來，若能探尋一種可預(yù)測預(yù)后的分子標(biāo)識，作為選擇患者治療的標(biāo)準(zhǔn)，對于改善預(yù)后有著積極的意義，可盡量減少不必要的不良反應(yīng)[3]。原癌基因與抑癌基因圖表、細(xì)胞因子、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白等預(yù)后分子標(biāo)志在非小細(xì)胞肺癌中均有涉及，但未找出可指導(dǎo)臨床治療的標(biāo)志物。近幾年，國外一些研究中指出ERCC1、RRM1和BRCA1作為修復(fù)DNA的基因，在非小細(xì)胞肺癌中可選為預(yù)后分子標(biāo)志物，并作為臨床治療指導(dǎo)。在本次研究中將收治的30例非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行研究，均測定耐藥基因ERCC1、RRM1、BRCA1，結(jié)果顯示在癌內(nèi)的表達(dá)比癌旁組織明顯更高（P＜0.05），且癌內(nèi)表達(dá)存在正相關(guān)；RRM1在鱗癌中表達(dá)明顯比腺癌中高（P＜0.05），但不同分期表達(dá)無差異（P＞0.05），ERCC1、BRCA1不論是病理類型還是分期中差異均不明顯（P＞0.05）；RRM1、BRCA1在低表達(dá)組與高表達(dá)組間中位生存期均有明顯差異（P＜0.05），而ERCC1則無差異（P＞0.05）。可以看出，瘤內(nèi)RRM高表達(dá)患者多伴有ERCC1與BRCA1表達(dá)升高，分析原因在于參與同一DNA修復(fù)路徑，均可修復(fù)DNA加合物。此外，DNA修復(fù)基因修復(fù)水平和肺癌發(fā)病與耐藥有一定關(guān)聯(lián)，比如DNA修復(fù)基因的修復(fù)能力低，則肺癌發(fā)生風(fēng)險更高，修復(fù)能力高則化療藥物耐藥性高，但ERCC1、RRM1和BRCA1的表達(dá)和非小細(xì)胞肺癌生存期之間的關(guān)系還需要不斷研究與探索，才能進(jìn)一步明確或證實[4]。綜上，非小細(xì)胞肺癌中耐藥基因ERCC1、RRM1和BRCA1的表達(dá)高于癌旁組織，且RRM1和BRCA1和生存期有著密切關(guān)聯(lián)，高表達(dá)情況下生存期越長，可將二者作為預(yù)后判斷指標(biāo)。