食品微生物檢驗菌落總數測定方法的效果觀察

馬國善

（遼寧省遼陽縣衛生計生監督局，遼寧 遼陽 111200）

近年來，食品安全問題層出不窮，國家相關部門開始加大對食品安全的監管力度，食品微生物檢驗是保證食品安全工作的重要內容之一[1]。以往對于食品中細菌總數的檢驗常使用測試紙片法和計數瓊脂傾注皿培養計數法，但在實際應用中，易出現細菌菌落混淆的情況，不利于檢測菌落總數，其檢測結果會出現一定的偏差。本次研究分別采用平板菌落計數法、菌落總數測定法、TTC培養基法對110份樣品進行檢測，現報道分析如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：2016年1月至2017年1月，選取疾控中心接收的食品樣品110份進行研究，110份食品樣品均來自于疾控中心接收到的食品樣品，分別采用平板菌落計數法、菌落總數測定法、TTC培養基法3種方法進行檢測。平板菌落計數法采用北京陸橋計數有限責任公司的平板計數瓊脂培養基進行檢驗；菌落總數測定采用美國3M公司生產的細菌總數測試片進行檢驗；TTC培養基法由北京陸橋計數有限責任公司提供，TTC瓊脂按照體積比100∶1的比例在瓊脂中加入0.5%的氯化三苯四氮唑，濃度為0.005%。

1.2 方法

1.2.1 平板菌落計數法：采用國家標準方法GB4789.2-2010 進行檢測，無菌狀態下取25 g食品樣品放入裝有225 mL生理鹽水的錐形瓶中，輕輕搖晃使其混勻，采用無菌吸管抽取1∶10樣品勻液1 mL慢慢注入到裝有9 mL生理鹽水的試管內，輕輕搖晃使其混勻，并按照上述方法取1∶1000和1∶10000的樣品勻液。采用吸管吸取適宜稀釋度的樣品勻液分別注入到2個無菌平皿中，同時取1 mL空白稀釋液作為空白對照，然后將溫度為46℃的計數瓊脂培養基15 mL注入到平皿中，輕輕搖晃使其混勻，待瓊脂凝固后，將平皿翻轉，放入到恒溫（36±1） ℃中進行（48±2）h的培養。

1.2.2 菌落綜述測定方法：將測試片放于水平臺面上，去除附著的薄膜，采用與平板菌落計數法相同的方法制作不同稀釋度的樣品液放置于測試片中央位置，食品樣品各取1 mL，然后將蓋膜蓋好，待培養基凝固后，壓緊紙片，使樣品均勻分布在測試片上，每個稀釋度樣品均進行2片接種，放置于恒溫（36±1） ℃中進行（48±2）h的培養。

1.2.3 TTC培養基法：將1 mL濃度為0.5%的TTC溶液放入到100 mL瓊脂培養基中，制備TTC瓊脂培養基濃度為0.005%，接種與培養方法與菌落總數測定方法相同。

1.3 統計學分析：數據資料用SPSS19.5進行統計分析，計量資料用（±s）表示，用t檢驗；計數資料用（%）表示，用χ2檢驗，P＜0.05表示有統計學意義。

2 結 果

平板菌落計數法、菌落總數測定法、TTC培養基法3種檢驗方法測定出的不合格率分別為9.09%、8.18%、10.00%，3種結果對比無明顯差異（P＞0.05）。見表1。

表1 對比3種不同檢測方法的不合格率

3 討 論

食品安全一直是我國民生關注的重點，近來年，食品安全問題頻繁出現，嚴重威脅了人們的飲食健康。食品在加工、運輸、儲存中會接觸到各種微生物，導致食品變質，是威脅人們健康的重要因素之一。相關部門指出，將采用平板計數瓊脂代替營養瓊脂，同時對可能存在受損生物細胞存在的食品進行抽樣檢測，以此來保證食品安全[2]。

目前對食品中微生物菌落總數檢測中，常使用平板菌落計數法、菌落總數測定法、TTC培養基法3種檢驗方法，3種方法在本次研究中，其結果沒有太大差異，從應用價值上來說，3種檢驗方法都可推廣使用。本次研究中，平板菌落計數法、菌落總數測定法、TTC培養基法3種檢驗方法測定出的不合格率分別為9.09%、8.18%、10.00%，數據對比無統計學意義（P＜0.05）。在實際操作中，TTC培養基法菌落、平板菌落計數法、菌落總數測定方法都具有較高的檢出率。由于部分細菌體積小，生長在瓊脂內部，很難用肉眼觀察到，所以在計數中，往往不準確。大多數菌類都含有脫氫酶，TTC可以檢測脫氫酶脫下的氫，出現顏色由白變紅的現象，起到對細菌染色的目的，以便檢驗人員進行仔細觀察并計數[3]。另外，為了進一步提高檢測結果的準確性，可從以下幾個方面入手：①提高檢驗人員操作水平，規范檢驗操作，保證檢驗工作的有效性。②嚴格控制檢驗室內環境，注重培養皿溫度與濕度，定期對檢驗儀器進行校對，保證檢驗工作的準確性。③嚴格把控檢驗樣品劑量與質量，將配置好的樣品勻液妥善保存，放置于通風、干燥的環境中，對于需要冷藏的樣品，控制其溫度。④對于所有檢驗樣品，注明其使用的有效時間，超出使用期限的樣品不得參與檢驗。

綜上所述，平板菌落計數法、菌落總數測定法、TTC培養基法3種檢驗方法均具有較高的準確性和可行性，可根據環境要求選擇合適的檢驗方法。