糖皮質(zhì)激素聯(lián)合丙種球蛋白對(duì)重癥藥疹患者N—乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性的影響

汪小柳 劉志軍

摘要 目的：檢測糖皮質(zhì)激素聯(lián)合丙種球蛋白對(duì)N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性的影響，探討糖皮質(zhì)激素聯(lián)合丙種球蛋白治療重癥藥疹可能的機(jī)制。方法：收集正常人和重癥藥疹患者經(jīng)糖皮質(zhì)激素聯(lián)合丙種球蛋白治療前后尿液，采用反相高效液相色譜技術(shù)，檢測尿液中咖啡因的3種主要代謝產(chǎn)物5-乙酰氨基-6-甲酰氨基-3-甲基嘧啶（AFMU）、1-甲基黃嘌呤（1X）和l一甲基尿酸（1U）含量，以AFMU/（AFMU+1U+1X）的比率評(píng)價(jià)各組N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性。結(jié)果：重癥藥疹患者N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶平均活性（0.12±0.01），明顯低于正常人群組的（0.54±0.06）（P<0.01）。結(jié)論：N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶在重癥藥疹患者中活性降低，糖皮質(zhì)激素聯(lián)合丙種球蛋白治療有助于恢復(fù)N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性，是治療重癥藥疹的作用機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞 重癥藥疹；糖皮質(zhì)激素；丙種球蛋白；N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶；RP-HPLC

研究表明，重癥藥疹的發(fā)生與體內(nèi)N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性降低有關(guān)[1]。我們檢測正常人和重癥藥疹患者經(jīng)糖皮質(zhì)激素聯(lián)合丙種球蛋白治療前后N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性的變化，為糖皮質(zhì)激素聯(lián)合丙種球蛋白的臨床應(yīng)用提供更多的理論基礎(chǔ)。

資料與方法

試驗(yàn)對(duì)象：2015年1月-2017年6月收治重癥藥疹患者20例，男8例，女12例；平均年齡（25.3±5.6）歲；病程0.5～7 d。選取同期來本院體檢的健康人50例，男25例，女25例；平均年齡（28.3±7.8）歲。所有參與患者均簽署知情同意書。

儀器、試劑和藥品：IOAvp型高效液相色譜儀，包括SCL中央控制器，SPD紫外可見檢測器，LC高壓泵，SIL自動(dòng)進(jìn)樣器，CLASS-VP 5.0色譜數(shù)據(jù)工作站；甲潑尼龍琥珀酸鈉；5-乙酰氨基-6-甲酰氨基-3-甲基嘧啶、l-甲基黃嘌呤（Ⅸ，2-FJ-103-1）和l一甲基尿酸（1U，1399520）；雀巢咖啡。乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

色譜條件：Shim-pack VP-ODS柱、Shim-pack C18預(yù)柱；流動(dòng)相為乙腈（A相），0.05%醋酸（B相），O～24 min B相的比例從2.5%線性增加至8%；流速l mL/min；在柱溫25℃、280 nm波長下檢測。

方法：①治療方法：患者使用丙種球蛋白2g/kg，分3～5d靜脈滴注；同時(shí)結(jié)合靜脈使用糖皮質(zhì)激素相當(dāng)于潑尼松1 mg/（kg·d）治療，待病情穩(wěn)定后逐次遞減激素用量。②樣品收集及處理：試驗(yàn)當(dāng)日，受試者上午預(yù)留空白尿樣后，口服1杯咖啡（含咖啡因約215 mg），5h之后再次留取10mL尿液樣品置樣品瓶中（預(yù)先加入200mg維生素C），保存于-20℃直至上機(jī)分析。在整個(gè)試驗(yàn)過程中，受試者禁服其他含咖啡因的食物，且不得服用其他藥物。試驗(yàn)全過程受醫(yī)師監(jiān)護(hù)。上機(jī)分析時(shí)，精密稱取AFMU、IX和IU對(duì)照品適量，用ddH20陪成20μg/mL對(duì)照品溶液。根據(jù)AFMU/（AFMU+ 1X+ 1U）的峰面積比，繪制出概率分布直方圖。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 13.0 f'orWindows統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用（x±s）表示，計(jì)數(shù)資料比較使用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，相關(guān)關(guān)系采用配對(duì)資料的關(guān)聯(lián)性分析。P< 0.05代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

色譜分離：將咖啡因3種代謝物對(duì)照品溶液、空白尿液樣品和受試尿液樣品按照上述標(biāo)準(zhǔn)色譜條件進(jìn)樣測定，可見代謝物AFMU. 1U和IX之間具有良好的分離度，在3種峰位上沒有尿液中其他雜質(zhì)的干擾，而且代謝物與雜質(zhì)之間的分離度也比較清楚，可以用于分析N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶的活性，見圖l。

正常人和重癥藥疹患者治療前后N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性比較：采用RP-HPLC法測定大鼠服用咖啡因后尿液中代謝產(chǎn)物AFMU、1U和1X，其中以AFMU/（AFMU+1U+1X）的比率來評(píng)價(jià)N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶的活性。重癥藥疹患者N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶平均活性（O.12±0.01），明顯低于正常人群組（0.54±0.06）（P< 0.01），且服藥7d后平均活性（0.49±0.04），與正常組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表l。

討論

重癥藥疹在臨床上是常見的藥物不良反應(yīng)，不但皮膚損害嚴(yán)重，常常還伴有內(nèi)臟受損及全身中毒癥狀，易出現(xiàn)并發(fā)癥，如果未得到及時(shí)和有效的治療，該病死亡率相當(dāng)高。因此積極和早期治療重癥藥疹患者有著極其重要的意義。糖皮質(zhì)激素是有效的抗炎、抗過敏藥物，它能有效地減少炎性滲出[2]。而丙種球蛋白具有中和抗原、抑制細(xì)胞因子炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和釋放等作用，且其不良反應(yīng)少見，是臨床上治療重癥藥疹的重要手段。糖皮質(zhì)激素聯(lián)合丙種球蛋白目前是重癥藥疹治療中最有效的藥物[3]。但其治療機(jī)制仍尚未完全明確。

本研究結(jié)果與Dietrich的結(jié)果相符，與正常人群相比，重癥藥疹患者中N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性降低，而且，經(jīng)過糖皮質(zhì)激素聯(lián)合丙種球蛋白治療后，重癥藥疹患者中N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶活性逐漸升高，直至接近正常人水平，這可能是糖皮質(zhì)激素聯(lián)合丙種球蛋白治療重癥藥疹的機(jī)制之一，可為糖皮質(zhì)激素聯(lián)合丙種球蛋白的臨床應(yīng)用提供更多的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]包振宇，鄒先彪.重癥藥疹的研究進(jìn)展[J].實(shí)用皮膚病學(xué)雜志，2015，8（2）：1 12-1 14.

[2]汪小柳，李銳.方紅，等.38例重癥藥疹臨床分析[J].實(shí)用皮膚病學(xué)雜志，2010，3（3）：137-140.

[3]王俠生.重癥大皰型藥疹研究進(jìn)展[J].臨床皮膚科雜志，2004，33（4）：254-256.