清胰湯與善寧聯(lián)用對重癥急性胰腺炎大鼠的治療作用*

錢 濤 李昌陽

江蘇省中西醫(yī)結合醫(yī)院 江蘇 南京 210028

本文旨在探討清胰湯與善寧聯(lián)用對重癥急性胰腺炎的作用及機制，為中醫(yī)藥的推廣提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料：牛黃膽酸鈉購自Sigma公司，清胰湯由柴胡、白芍、黃連、延胡索、生大黃各15g，黃芩、木香、芒硝各10g組成，由江蘇省中西醫(yī)結合醫(yī)院中藥房煎煮濃縮至每ml相當于1g生藥。組織裂解液購自碧云天，COX-2兔抗大鼠多克隆抗體、β-act in小鼠抗大鼠多克隆抗體、HRP標記的羊抗小鼠二抗、HRP標記的羊抗兔二抗、IL-6 ELISA試劑盒均購自南京拓科達生物科技有限公司，ECL化學發(fā)光試劑盒購自Phar macia公司。

1.2 動物分組及處理：普通級Wist ar大鼠，雌雄各半，50只（南京青龍山繁殖場提供），體重250±50g，隨機分為5組：假手術組（SO組）；重癥急性胰腺炎組（SAP組）；清胰湯組（QY組）；善寧組（SN組）；清胰湯聯(lián)合善寧組（QY＋SN組）。SO組開腹后輕挑十二指腸，然后關腹。SAP組、QY組、SN組和QY＋SN組均制作SAP模型。在造模成功后，QY組立即胃注清胰湯（10ml/kg），SN組立即皮下注射善寧（16μg/kg），QY+SN組立即等量胃注清胰湯和皮下注射善寧，各組6h和12h后分別再次給藥，SO組和SAP組予以等量生理鹽水處理。術后24h心臟取血處死大鼠，收集血樣，液氮保存胰腺標本。

1.3 動物模型建立：采用文獻方法[1]建立SAP模型。

1.4 檢測指標和方法：血清淀粉酶（AMY）用10ml注射器刺入心臟采血4～8ml,不加抗凝劑,血凝后4℃下3000r/min離心10min,取血清不少于0.5ml，采用全自動生化分析儀器測定。胰腺組織COX-2蛋白質表達水平的檢測：采用west ern bl ot法測定。用組織細胞裂解液按說明書要求在玻璃勻漿器中研磨胰腺組織，提取組織總蛋白，按5∶1的比例加入6×l oading buf f er，煮沸5～10min，電泳分離蛋白、轉膜、封閉，依次加一抗（COX-2兔抗大鼠多克隆抗體，β-act in小鼠抗大鼠多克隆抗體，工作濃度分別為1∶200、1∶400），二抗（HRP標記的羊抗兔二抗，工作濃度l∶2000,HRP標記的羊抗小鼠二抗，工作濃度1∶5000），ECL發(fā)光法檢測，顯影于柯達膠片，用COX-2與β-act in的灰度密度比值表示結果。血清IL-6表達檢測：按上述方法取血清液，按照ELISA試劑盒進行操作。胰腺病理學表現(xiàn)：中性甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色，高倍鏡下觀察組織結構變化，并參照Amy法進行評分。

1.5 統(tǒng)計學方法：采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析，所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩兩比較方差齊時采用 LSD（Last Signif icant Dif f er ence）法檢驗，方差不齊采用Dunnett T3方法。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 血清AMY水平：各組別間比較，血清AMY水平差異有統(tǒng)計學意義：與SO組的血清AMY水平相比，其余各組血清AMY水平均升高（P＜0.01）；QY組和SN組單給藥治療后血清AMY水平較SAP組降低（P＜0.01）；QY＋SN組血清AMY水平又較單給藥組降低（P＜0.01）。見表1。

表1 各組大鼠血清 AMY水平（，U/L）

表1 各組大鼠血清 AMY水平（，U/L）

注：與SO組比較，a P＜0.01；與SAP組比較，bP＜0.01；與QY組和SN組比較，c P＜0.01。

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2.2 COX-2和IL-6的水平：與SO組相比，其余各組胰腺COX-2蛋白質的表達和血清IL-6水平均升高（P＜0.01）；與SAP組相比，QY組和SN組胰腺COX-2蛋白質的表達和血清IL-6水平均降低（P＜0.01或P＜0.05）；與單給藥組相比，QY＋SN組胰腺COX-2蛋白質的表達和血清IL-6水平進一步降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01或P＜0.05）。見表2、表3。

表2 COX-2蛋白半定量值（cox-2/β-act in比值）（)

表2 COX-2蛋白半定量值（cox-2/β-act in比值）（)

注：與SO組比較，a P＜0.01；與SAP組比較，b P＜0.01；與QY組和SN組比較，c P＜0.01。

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表3 IL-6檢測值（，ng/L）

表3 IL-6檢測值（，ng/L）

注：與SO組比較，a P＜0.01；與SAP組比較，b P＜0.01；與QY組和SN組比較，c P＜0.01。

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2.3 病理損傷程度：分述如下。

2.3.1 肉眼觀察：術后24h剖腹觀察，SO組大鼠胰腺肉眼觀光澤度好，無水腫，腹腔內少量清亮腹水。SAP組胰腺水腫、出血明顯，胰腺及網(wǎng)膜組織大量皂化斑，血性腹水形成，胃腸擴張，明顯充血。QY組和SN組，胰腺損害較SAP組減輕,QY＋SN組病損程度進一步減輕。

2.3.2 電鏡下觀察：術后24h剖腹觀察，SO組大鼠的胰腺組織結構清晰，細胞形態(tài)正常，間質無明顯水腫，無炎性細胞浸潤，無出血壞死。SAP組大鼠的胰腺可見間質明顯充血水腫，間質增寬，有滲出物，腺泡細胞結構模糊；間質及腺泡大量炎性細胞浸潤及出血，可見微血栓形成；大片組織壞死。QY組和SN組癥狀有所減輕，QY＋SN組進一步減輕。

2.3.3 損傷評分：SAP組大鼠的胰腺組織病理損害評分顯著高于SO組(P＜0.01)，QY組和SN組胰腺病理損害評分減輕，QY＋SN組進一步減輕(P＜0.01)。見表4。

表4 大鼠胰腺病理損害評分（，分)

表4 大鼠胰腺病理損害評分（，分)

注：與SO組比較，a P＜0.01；與SAP組比較，b P＜0.01；與QY組和SN組比較，c P＜0.01。

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3 討論

清胰湯化裁于大承氣湯，方中大黃、芒硝攻里通下，瀉三焦之熱；柴胡、白芍、木香調氣疏肝，緩急止痛；黃芩、黃連清肝胃之熱，延胡索活血行氣。全方疏肝理氣，清熱利濕，通里攻下，活血化瘀解毒。善寧是一種人工合成的8肽生長抑素類似物，具有顯著抑制腸肽釋放及胃腸、胰內外分泌的功能。具有刺激胰腺細胞修復的作用，目前臨床上已常規(guī)應用于急性胰腺炎的治療。

本實驗發(fā)現(xiàn)：SAP大鼠血清淀粉酶水平、COX-2和IL-6的表達明顯高于SO組，我們應用清胰湯和善寧治療后，血清淀粉酶水平、COX-2和IL-6的表達均降低，清胰湯聯(lián)合善寧治療后發(fā)現(xiàn)各水平進一步降低。在病理損傷評分方面，變化趨勢與上述變化趨勢一致，清胰湯和善寧單給藥治療，病理學評分均降低，兩者聯(lián)合治療后病理損傷和評分進一步減輕。所以本研究提示，清胰湯和善寧均能有效地減輕SAP大鼠胰腺的損傷，但兩者聯(lián)合治療的效果明顯優(yōu)于單藥使用，其治療機制可能與抑制炎癥因子釋放有關，從而減輕胰腺組織的損傷。這為中西醫(yī)結合治療胰腺炎提供了理論依據(jù)。