綠威膠囊對乙醇致小鼠急性胃潰瘍的保護作用

劉培剛 張宏建 胡恩瑩 梁衛青 浦錦寶#

1 浙江省中醫藥研究院 浙江 杭州 310007

2 浙江中醫藥大學 浙江 杭州 310053

關鍵詞 綠威膠囊 乙醇 胃潰瘍 胃黏膜 抗氧化 小鼠

綠威膠囊以葉綠素銅鈉鹽和蠶蛹復合氨基酸（經水解提取精制而得）為主，輔以薏苡仁、茯苓及山楂等[1]，能促進損傷組織愈合、治愈潰瘍及保護胃黏膜。本實驗旨在研究綠威膠囊抵抗胃潰瘍的作用，探討其可能的作用機理，為綠威膠囊保健應用和功能拓展提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 藥物：綠威膠囊，浙江紅綠生源健康生物技術有限公司，批號：171016；奧美拉唑腸溶片，浙江金華康恩貝生物制藥有限公司，批號：JA1701004。

1.2 動物：雄性SPF級BALB/c小鼠60只，體重20±2g，北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號：SCXK（京）2016-0011，分籠飼養，自由飲水和攝食，5天后開始實驗，控制室溫22±2℃，濕度55±15%。

1.3 儀器：JJ-12J型脫水機、JB-P5包埋機，武漢俊杰電子有限公司；ROTAZ型超薄切片機，德國徠卡公司；烤箱，上海?，攲嶒瀮x器有限公司；倒置熒光顯微鏡成像系統，日本尼康公司；5430R型離心機，德國艾本德股份公司；Power Wave XS2型酶標儀，美國BioTek公司；pH精密試紙（0.5～5.0），杭州特種紙業有限公司。

1.4 動物分組和給藥：BALB/c小鼠60只，隨機分為6組，每組10只，包括：正常對照組（生理鹽水）、模型對照組（生理鹽水）、陽性對照組（奧美拉唑20mg/kg）、綠威膠囊低劑量組（20mg/kg）、綠威膠囊中劑量組（40mg/kg）、綠威膠囊高劑量組（80mg/kg）；連續進行灌胃給藥6天，每日1次，第5次給藥后禁食24h，自由飲水，末次給藥30min后，給予70%乙醇0.1ml/只，構建胃潰瘍模型，正常組灌胃給予相同劑量的生理鹽水，4小時之后眼球采血，制備血清后備用。

1.5 髓過氧化物酶（MPO）的活性和丙二醛（MDA）的含量測定：造模1h后摘眼球取血，3000r/min和4℃條件下制備血清留作備用；離心后的血清用生理鹽水5倍稀釋后取20μl，按MPO及MDA測定試劑盒說明書測定其A值并計算含量（波長為450nm）。

1.6 胃黏膜觀察：頸椎脫臼法將小鼠處死后剖腹快速取出胃，在賁門處使用精密pH試紙測定pH值。幽門與賁門結扎后將1.5ml 10%甲醛注入小鼠胃腔中，小鼠胃固定10～15min后，沿大彎剪開用生理鹽水沖洗干凈后展平并將水分吸干以備后續檢測。觀察胃黏膜損傷情況。利用游標卡尺對小鼠的潰瘍面積進行精密計算：按Gut h標準展開潰瘍指數及抑制率的計算[2]。潰瘍抑制率=（平均模型組UI-平均實驗組UI）/平均模型組UI×100%。

1.7 胃組織形態學觀察：取相同10%甲醛溶液浸泡小鼠胃組織部位采用常規石臘包埋，4μm切片，HE染色后通過光鏡進行胃部組織學變化的觀察。

2 結果

2.1 綠威膠囊對胃潰瘍的影響：正常組小鼠胃黏膜色澤較紅潤，表面光滑且無損傷，未見出血點；模型組小鼠出現嚴重潰瘍，都有條索狀或點狀出血。與模型組比較，綠威膠囊各劑量組和奧美拉唑組小鼠胃黏膜點狀出血和損傷程度均有不同程度減輕。且在綠威膠囊各劑量組中均能發現在胃潰瘍部位形成葉綠素鹽保護膜進行保護。

2.2 胃黏膜潰瘍指數及潰瘍抑制率比較：見表1。

表1 綠威膠囊對乙醇致小鼠急性胃潰瘍的影響（）

表1 綠威膠囊對乙醇致小鼠急性胃潰瘍的影響（）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

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2.3 胃液pH值變化比較：相比正常組，乙醇誘導急性胃潰瘍小鼠胃液pH顯著降低。綠威膠囊各劑量組與模型組比較，均可抑制胃酸分泌，與正常組和奧美拉唑組比較均無明顯差異，且在中高劑量組中部分實驗結果略高于正常組和奧美拉唑組。說明綠威膠囊各劑量組均能提高胃潰瘍小鼠胃內pH值。結果見圖1。

圖1 各組小鼠胃內pH值比較

2.4 胃組織病理切片HE染色：正常組小鼠胃黏膜層結構連續完整；表層上皮黏液細胞正常，沒有壞死及出血現象。模型組小鼠胃黏膜上皮腺體減少現象清晰可見，出血及壞死現象發生，肌層肉芽組織增生，大部分區域微黏膜的上皮細胞出現大量脫落的狀況，胃底腺結構紊亂且黏膜下層增厚。與模型組比較，綠威膠囊各劑量組和奧美拉唑治療后胃黏膜均有不同程度的減輕，可見大部分區域結構清晰，無血管擴張和上皮細胞脫落，未見壞死及出血，但可見不同程度的腺體減少。見圖2。

圖2 各組小鼠胃組織病理切片比較（HE染色）

2.5 綠威膠囊對胃潰瘍小鼠血液中MPO及MDA含量的影響：模型組中MPO含量較正常組降低（P＜0.01），MDA含量升高（P＜0.01）；與模型組比較，綠威膠囊各劑量組MPO均升高（P＜0.01），但對MDA含量未表現出明顯影響，其中只有高劑量具有明顯降低作用（P＜0.01），說明綠威膠囊能升高乙醇引起的急性胃潰瘍小白鼠胃組織的MPO含量，一定程度上降低小鼠胃組織MDA的含量。結果見表2。

表2 綠威膠囊對血液中MPO和MDA含量的影響（）

表2 綠威膠囊對血液中MPO和MDA含量的影響（）

注：與正常組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

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3 討論

現代醫學認為，某些特殊原因導致胃酸、胃蛋白酶等攻擊因子增強或者胃黏膜保護因子降低使得局部黏膜的抵抗力明顯降低，從而導致胃潰瘍發生[3]。高度酒精作為一種攻擊因子，不僅能引起體內產生大量的氧自由基及MDA，還對MPO起抑制作用，從而引起胃黏膜受損[4]。綠威膠囊的主要成分葉綠素銅鈉鹽是從中藥蠶砂中提取而來，經過脫鎂離子并用銅離子取代獲得的葉綠素衍生物，能促進損傷組織愈合、治愈潰瘍和保護胃黏膜。

以往研究表明，中性粒細胞浸潤在胃黏膜炎癥和損傷的發展中至關重要。通過MPO進入中性粒細胞的含量可以對胃黏膜組織進行評估。MDA是多不飽和脂肪酸的最終產物，它通常被用作評估胃黏膜脂質過氧化的指標。本實驗結果顯示：正常對照組小鼠潰瘍面積明顯小于模型對照組小鼠，說明成功構建了急性胃潰瘍小鼠模型。綠威膠囊各劑量組均可以明顯減小乙醇所誘導的急性胃潰瘍小鼠模型的潰瘍面積，顯示綠威膠囊具有不錯的胃保護功效。通過測定MPO和MDA含量，表明綠威膠囊各劑量組均能顯著增加乙醇誘發急性胃損傷小鼠模型胃組織中的MPO含量及一定程度降低小鼠胃組織的MDA含量。結果證實綠威膠囊可能通過胃黏膜的保護、氧自由基的清除及脂質過氧化抑制而起到對胃潰瘍保護功效。