乳腺癌組織中miR-320a的表達(dá)及意義

程瑩星，黃勇，張麗娟，鄭虹，姜孝娟

(合肥市第二人民醫(yī)院，合肥 230001)

乳腺癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，2008年全球乳腺癌新發(fā)病例約138萬(wàn)，死亡約46萬(wàn)，乳腺癌是一種高度異質(zhì)性疾病，根據(jù)雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)的表達(dá)情況，可分為不同分子亞型。流行病學(xué)結(jié)果顯示，ER、PR及HER2表達(dá)對(duì)乳腺癌患者的預(yù)后有較大影響，如三陰性乳腺癌患者的5年總生存率低于其他分子亞型乳腺癌[1]。近年來(lái)，NUCB2、Cbx2[2]多種新靶標(biāo)已用于乳腺癌的診斷、治療和預(yù)后判斷，但乳腺癌患者的預(yù)后仍不樂(lè)觀，尋找新的、有效的乳腺癌新靶標(biāo)，對(duì)提高治療效果、改善患者預(yù)后有積極意義。微小RNAs(microRNAs)是由18～25個(gè)核苷酸組成的進(jìn)化保守的非編碼小RNA分子，在基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中發(fā)揮重要作用。大量研究證實(shí)，microRNAs與腫瘤形成、惡性進(jìn)展及預(yù)后均密切相關(guān)，具有作為腫瘤治療靶標(biāo)的潛能，microRNA-320(miR-320)家族共有5個(gè)成員，在乳腺癌中的表達(dá)有一致性[3]。2013年1～12月，我們觀察了乳腺癌組織中miR-320a表達(dá)，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2013年1～12月入住本院行切除手術(shù)的乳腺癌患者癌組織及其癌旁組織(距離癌組織>5 cm)新鮮標(biāo)本，術(shù)中取出后立即置于液氮中保存。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前未接受抗腫瘤治療；初次乳腺癌手術(shù)；具備完整的病例和隨訪資料；簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；合并肝腎等重要器官功能不全等。共收集符合標(biāo)準(zhǔn)的91例乳腺癌患者，年齡29～62歲，其中<55歲患者52例，≥55歲患者39例；已絕經(jīng)患者42例，未絕經(jīng)患者49例；腫瘤直徑<2 cm者29例，腫瘤直徑≥2 cm者62例；ER陰性表達(dá)者35例，ER陽(yáng)性表達(dá)者56例；PR陰性表達(dá)者33例，PR陽(yáng)性表達(dá)者58例；HER2陰性表達(dá)者50例，HER2陽(yáng)性表達(dá)者41例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者68例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者23例；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者71例，無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者20例；TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期70例，Ⅲ+Ⅳ期21例。手術(shù)成功后，所有患者接受1～60個(gè)月的隨訪，以門診或電子通訊的方式為主，直至死亡或隨訪時(shí)間結(jié)束。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 乳腺組織miR-320a表達(dá)檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR)法。切取適量液氮保存的組織樣本(20～30 mg)，采用TRIzol試劑提取組織中總RNA，紫外分光度計(jì)測(cè)量RNA純度和濃度，cDNA合成試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)條件：30 ℃ 10 min；42 ℃ 30 min；99 ℃ 5 min；4 ℃ 5 min，產(chǎn)物cDNA置于-20 ℃冰箱保存。定量PCR試劑盒進(jìn)行Real-time PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件：95 ℃ 5 min；94 ℃ 20 s；60 ℃ 20 s；40個(gè)循環(huán)。定量PCR引物序列如下，miR-320a正向引物：5′-TATTCGCACTGGATACGACTCCAGC-3′,反向引物：5′-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGG-3′；U6正向引物：5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′，反向引物：5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3′。以U6為內(nèi)參，采用2-ΔΔCT法計(jì)算miR-320a相對(duì)表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 不同乳腺組織中miR-320a表達(dá)比較 乳腺癌、癌旁組織中miR-320a相對(duì)表達(dá)量分別為0.21±0.06、1.14±0.15，二者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-54.91，P=0.000)。

2.2 miR-320a表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 以miR-320a相對(duì)表達(dá)量的平均值為界限，>平均值為miR-320a高表達(dá)(44例)，≤平均值為miR-320a低表達(dá)(47例)。結(jié)果顯示，乳腺癌組織中miR-320a表達(dá)與患者年齡、是否絕經(jīng)、ER表達(dá)、PR表達(dá)、HER2表達(dá)和TNM分期均不相關(guān)(P均>0.05)；miR-320a表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均有關(guān)(P均<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 乳腺癌組織中miR-320a表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

2.3 乳腺癌組織中miR-320a表達(dá)對(duì)患者預(yù)后的影響 Log Rank檢驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-320a高表達(dá)者術(shù)后5年總生存率81.82%(36/44)，高于320a低表達(dá)者的53.19%(25/47)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.207，P=0.004)。

3 討論

microRNAs在細(xì)胞不同生理過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵性調(diào)控作用，如增殖、凋亡、遷移、侵襲、分化和代謝等[4]。研究揭示，在腫瘤形成和惡性進(jìn)展過(guò)程中，根據(jù)microRNAs下游靶基因的功能不同，microRNAs既能發(fā)揮促癌基因作用又可發(fā)揮抑癌基因作用[5]。目前，已在結(jié)直腸癌、膀胱癌和胃癌等[6]腫瘤中發(fā)現(xiàn)多種異常表達(dá)的microRNAs。microRNAs具有成為腫瘤治療有效治療靶標(biāo)的潛能。

有研究發(fā)現(xiàn)，miR-17和miR-20b在乳腺癌組織中表達(dá)降低，且參與誘導(dǎo)產(chǎn)生紫杉醇耐藥，miR-17和miR-20b可作為乳腺癌的治療靶標(biāo)[7]。miR-320a在非小細(xì)胞肺癌[8]、肝細(xì)胞癌[9]等多種腫瘤組織中均存在異常表達(dá)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與癌旁正常組織相比，miR-320a在乳腺癌組織中的相對(duì)表達(dá)量降低，提示在乳腺癌腫瘤形成過(guò)程中，miR-320a具有抑癌基因功能，其表達(dá)降低參與并促進(jìn)了乳腺癌腫瘤形成。Liu等[10]發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)鏈非編碼RNA SUMO1P3在乳腺癌中表達(dá)增加，且可能是通過(guò)負(fù)調(diào)控miR-320a表達(dá)，促進(jìn)乳腺癌的惡性進(jìn)展；Yu等[11]在乳腺癌細(xì)胞中外源性增加miR-320a表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力均被顯著抑制，推測(cè)miR-320a在乳腺癌腫瘤形成過(guò)程中發(fā)揮抑癌基因功能。

本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組織中miR-320a表達(dá)與患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、ER/PR/HER2表達(dá)狀態(tài)和TNM分期均不相關(guān)，而與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均有關(guān)，提示miR-320a表達(dá)可能與乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲緊密相關(guān)，如Lu等[9]在肝細(xì)胞癌中發(fā)現(xiàn)，miR-320a表達(dá)下降可激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖；在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中，miR-320a可通過(guò)靶向調(diào)節(jié)AQP4基因表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞遷移和侵襲過(guò)程[12]；而在鼻咽癌中，增加miR-320a表達(dá)，可降低BMI-1基因表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖、遷移和侵襲[13]，以上研究均證實(shí)，miR-320a具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的功能，且通過(guò)調(diào)節(jié)信號(hào)通路活性或基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)。

本研究結(jié)果顯示，miR-320a高表達(dá)者術(shù)后5年總生存率高于低表達(dá)者，預(yù)后較好，提示miR-320a表達(dá)可能是乳腺癌患者預(yù)后預(yù)測(cè)的負(fù)因子。Yang等[14]證實(shí)miR-320a是侵襲性乳腺癌的獨(dú)立預(yù)后靶分子，提示miR-320a可作為乳腺癌患者預(yù)后預(yù)測(cè)的靶標(biāo)。

綜上所述，miR-320a在乳腺癌組織中表達(dá)降低，其低表達(dá)可能促進(jìn)了疾病惡性進(jìn)展、導(dǎo)致患者預(yù)后不良。miR-320a可作為乳腺癌病情判斷和預(yù)后預(yù)測(cè)的靶標(biāo)分子。