無創DNA產前篩查1200例結果分析

余 勛 馬小娜 葉婉玲

廣東省東莞市婦幼保健院，廣東東莞 523000

目前全球每年約有500萬新生兒有出生缺陷。我國出生缺陷的發生率約為5.6%。染色體異常是新生兒出生缺陷發生最常見的病因，目前產前檢查金標準羊水穿刺是一種有創的檢查方式，不適宜大范圍應用，快捷而有效的檢查方法是臨床所需的有效方式[1]。本研究中分析產前進行無創DNA篩查的產婦1200例的結果，并且將其中高風險產婦的羊水穿刺檢查結果作為對照，以研究無創DNA產檢的臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

我院自2014年12月～2016年12月收診進行無創DNA產前篩查孕產婦1200例，納入標準：簽署知情書者，單胎者，無精神疾病者，未合并惡性腫瘤者；孕周15～24周，平均孕周（19.7±6.6）周；根據孕產婦年齡、血清學篩查的結果進行分組，高危年齡組（n=582），年齡均≥35歲；高危血清學篩查組（n=277），年齡均＜35歲，血清學篩查結果：18-三體臨界高風險1例，18-三體高風險6例，21-三體臨界高風險15例，21-三體高風險255例；其他原因組（n=341），根據情況分成3個小組：1組（n=250）年齡均＜35歲，未進行血清學篩查，或者血清學篩查顯示低風險，進行無創DNA檢測；2組（n=42）年齡均＜35歲，超聲檢查結果有異常；3組（n=49）年齡均＜35歲，有不良孕產史。3組一般資料比較，具有可比性。

表1 本組無創DNA產前篩查結果分布[n（%）]

1.2 方法

采取半導體測序法對胎兒的染色體非整倍體13-三體、18-三體、21-三體進行檢測。清晨空腹抽取外周靜脈血8mL，使用EDTA行抗凝血處理，4小時內處理完畢，1600g離心10min，將上清液置入離心管，再進行1600g離心10min，再將上清液置入離心管，獲取血漿，將其分4份，每一份1mL，在-20℃進行保存。根據核酸提取試劑盒的說明書（磁珠法）進行操作，加大至3倍反應體系，將600μL的血漿游離DNA，獲得DNA溶液30μL。采取文庫構建試劑盒，進行DNA文庫構建，采用熒光定量PCR儀行文庫定量。上機測序后，采取第2代的測序儀DA 8600行上樣、測序。將染色體篩查出的堿基進行統計，病計算正常樣本堿基與本組樣本的偏差，也就是Z值，確定胎兒13號、18號、21號染色體情況，觀察是否有異常，若胎兒13號、18號、21號染色體Z值在3以上，可判斷有異常，若≤3，可判斷為低風險，并對無創DNA產前篩查高風險產婦進行羊水穿刺。

1.3 觀察指標

觀察本組無創DNA產前篩查結果分布，包括13-三體高風險、18-三體高風險、21-三體高風險。計算高風險率=13-三體高風險率+18-三體高風險率+21-三體高風險率。

1.4 統計學方法

數據采用專業SPSS17.0軟件進行統計學分析處理。計數資料用率（%）表示，計量資料以（±s ）表示，組間t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 本組無創DNA產前篩查結果分布

高危年齡組高風險率2.06%，高危血清學篩查組高風險率1.81%，其他原因組高風險率1.47%，高危年齡組孕產婦的高風險率最高，其他原因組孕產婦的高風險率最低，但3組間高風險率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 無創DNA產前篩查的高風險與羊水穿刺分析

無創DNA產前篩查的高風險孕產婦22例，經過羊水穿刺后發現，13-三體高風險、18-三體高風險、21-三體高風險的準確率為86.36%，檢出率為100.00%。詳見表2。

表2 無創DNA產前篩查的高風險與羊水穿刺分析 [n（%）]

3 討論

我國出生缺陷高發，需要依賴產前診斷進行篩查，控制出生缺陷率[2-3]。進入二十一世紀后，雖然我國在優生優育，預防出生缺陷方面做了大量卓有成效的工作，但仍存在較大的漏檢情況，中孕期三聯血清學篩查技術是目前前檢中應用最廣泛的篩查手段，但檢出率較低（60%～70%），且有較高的假陽性率。而羊水細胞染色體核型分析為產前診斷金標準[4]，但該方法屬于一種有創的檢查方法，還有可能引起流產、宮內感染，孕婦和家屬難以接受，在產檢中具有很大的局限性和風險，一般僅對高危人群使用，因此需要更加便捷并且無創的產前檢查方法[5-6]。而傳統的產前超聲檢查和血清學檢查雖然便捷易用，可用于胎兒染色體異常的評估[7-9]，但由于敏感度和準確性較低的緣故遭人詬病，研究無創并且高效的產前篩查方法是控制缺陷兒出生的重點[10-11]。

上世紀末，Lo等[12]首次在孕婦外周血中檢測出胎兒Y染色體特異性DNA 序列，開創了無創DNA產前檢測的新紀元。無創DNA檢測通過大規模并行測序法和目標區域擴增測序法來進行分析，是對母體外周血中的胎兒游離DNA 進行深度測序，從而檢測胎兒染色體信息的方法。近年來無創DNA產前篩查已逐漸應用于臨床，其為一種產前篩查的新技術。多方研究結果中顯示[13-15]，無創DNA產前檢查優于傳統超聲檢查和血清學檢查，其為近年新興測序技術，大規模平行測序技術廣泛運用后，經過大量實驗的一種科學的檢測方法。本研究結果中顯示，無創DNA產檢適用于各類產婦的篩查中，并查出高危產婦，其中，高危年齡組孕產婦的高風險率最高。并且對無創DNA產檢產前篩查的高風險孕產婦22例進行羊水穿刺，將兩者進行結果對照，13-三體高風險、18-三體高風險、21-三體高風險的檢查準確率為86.36%，而檢出率為100.00%。因此說明了無創DNA產檢十分適合用于初步篩查，準確率和檢出率均處于較高水平，并且該檢查無創，操作便捷，可重復性強，還可與血清學檢查等進行聯合篩查，以做出明確的診斷，具有較高的應用價值。但無創DNA產前檢測也存在一些缺陷，如自身染色體異常的孕婦不適合；另外無創DNA檢查僅針對性染色體數目異常、21-三體綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征等，而且無法準確檢測易位、缺失等染色體結構異常疾病。

綜上所述，無創DNA篩查可準確的檢出13-三體綜合征、18-三體綜合征、21-三體綜合征，用于初篩中十分適宜，具有許多優點，準確、快速、無創，相信隨著該項技術的進一步改進，會更具臨床價值，幫助醫師做出明確診斷。

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