血清miR-145、血尿酸水平對(duì)狼瘡性腎炎疾病活動(dòng)度及其腎損害的作用

梁敬德 陳俏儀 范雪蓮 歐財(cái)文

1.廣州市海珠區(qū)婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510240；2.廣東省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510120

狼瘡性腎炎（LN）是系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）最常見的并發(fā)癥，發(fā)生率約60% ～ 80%，可導(dǎo)致不同程度腎損害，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致死亡的發(fā)生，其治療關(guān)鍵在于早期診斷和治療以控制腎衰竭發(fā)生、發(fā)展[1]。而近年來，隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，學(xué)界對(duì)LN的認(rèn)識(shí)不斷深入，有研究顯示，血清miR-145、血尿酸與LN的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[2-3]，但關(guān)于血清miR-145、血尿酸水平對(duì)LN疾病活動(dòng)度及其腎損害作用的報(bào)道較少。對(duì)此，本研究通過檢測(cè)LN患者血清miR-145、血尿酸水平，并分析二者與LN疾病活動(dòng)度及其腎損害的關(guān)系，以為L(zhǎng)N的臨床診治提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年6月～2017年6月廣東省中醫(yī)院和我院收治的LN患者150例作為L(zhǎng)N組，同期選取30例健康人員作為健康組，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）LN均經(jīng)臨床癥狀、病史、實(shí)驗(yàn)室、影像學(xué)等檢查確診[4]；（2）年齡＞18歲、無精神病病史；（3）入院前無降尿酸藥、保腎藥、利尿劑等藥物史；（4）患者或其家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）近1周內(nèi)進(jìn)食高脂高蛋白食物、大量飲酒等；（2）有高血壓、糖尿病；（3）有心、肝、腦等嚴(yán)重性疾??；（4）拒絕參與本次研究；本次研究已經(jīng)我院倫理委員會(huì)審批且通過，LN組：男88例，女62例，年齡23～59歲、平均（42.58±10.24）歲，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）值18.28 ～ 30.29kg/m2、平 均（24.57±4.72）kg/m2，健康組：男17例，女13例，年齡22～58歲、平均（41.87±10.16）歲，BMI值 18.22～ 30.36kg/m2、平均（24.65±4.77）kg/m2，兩組在性別、年齡、BMI值等一般資料上比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 血清miR-145、血尿酸水平檢測(cè) 所有受檢測(cè)者于清晨空腹抽取上臂靜脈血6mL置入無菌試管中，室溫放置2h內(nèi)，取3mL常規(guī)分離血清（3000r/min、10min、離心半徑 8.5cm）后，通過貝克曼全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血尿酸水平；另取3mL通過miRNA提取分離試劑盒采用TRIzol一步法提取總RNA，并反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，將1μL的cDNA置于10μL反應(yīng)體系、94℃中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)2min后純化DNA片段，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)檢測(cè)外周血中單個(gè)核細(xì)胞miR-145水平，miR-145基因序列為CTGGGAAAACTGGACCGTGAGG'，以β-actin 為內(nèi)參物，采用相對(duì)定量法行相對(duì)表達(dá)量計(jì)算，以2-△△CT法分析基因相對(duì)表達(dá)量，試劑均購(gòu)自北京天根生化科技有限公司。

1.2.2 疾病活動(dòng)度評(píng)估[5]采用SLE疾病活動(dòng)指數(shù)（SLEDAI）對(duì)LN患者進(jìn)行疾病活動(dòng)度評(píng)估，0～4分為無活動(dòng)、5～9分為輕度、10～14分為中度、＞14分為重度。

1.2.3 腎損害評(píng)估[6]采用慢性腎臟?。–KD）分期法對(duì)LN患者進(jìn)行腎損害評(píng)估，腎小球?yàn)V過率（GFR）～59mL/min為早期、30～59為中期、＜30為晚期。

1.2.4 觀察指標(biāo) 記錄和比較所有患者血清miR-145、血尿酸水平、LN疾病活動(dòng)度、腎損害情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，對(duì)計(jì)數(shù)資料比較以（%）表示采用χ2檢驗(yàn)，對(duì)計(jì)量資料比較以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，對(duì)多組資料采用重復(fù)測(cè)量方差分析F檢驗(yàn)，在P＜0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清miR-145、血尿酸水平比較

LN組血清miR-145水平明顯低于健康組，LN組血尿酸水平明顯高于健康組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05），見表1。

表1 兩組血清miR-145、血尿酸水平比較（ ± s）

表1 兩組血清miR-145、血尿酸水平比較（ ± s）

組別 n 血清miR-145 血尿酸（μmol/L）健康組 30 2.17±0.32 253.47±30.24 LN組 150 1.03±0.23 468.17±68.57 t 23.085 16.796 P＜0.001 ＜0.001

2.2 不同疾病活動(dòng)度LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較

本研究150例LN患者中，疾病活動(dòng)度為輕度、中度、重度的患者分別有30例（20.00%）、68例（45.33%）、52例（34.67%）；不同疾病活動(dòng)度LN患者血清miR-145、血尿酸水平基本相同，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同疾病活動(dòng)度LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較（ ± s）

表2 不同疾病活動(dòng)度LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較（ ± s）

疾病活動(dòng)度 n 血清miR-145 血尿酸（μmol/L）輕度 30 1.06±0.15 464.19±50.39中度 68 1.03±0.14 468.25±50.58重度 52 1.01±0.15 470.36±50.87 F 1.142 1.049 P 0.358 0.406

2.3 不同腎損害LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較

本研究150例LN患者中，腎損害早期、中期、晚期的患者分別有79例（52.67%）、56例（37.33%）、15例（10.00%）；在血清miR-145水平方面，腎損害晚期LN患者明顯低于中期患者，中期患者明顯低于早期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在血尿酸水平方面，腎損害晚期LN患者明顯高于中期患者，中期患者明顯高于早期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 不同腎損害LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較（± s）

表3 不同腎損害LN患者的血清miR-145、血尿酸水平比較（± s）

注：與早期同指標(biāo)比較，*P＜0.05；與中期同指標(biāo)比較，#P＜0.05

腎損害 n 血清miR-145 血尿酸（μmol/L）早期 79 1.15±0.16 445.66±40.26中期 56 1.01±0.13* 477.15±50.15*晚期 15 0.53±0.07*# 553.20±60.23*#F 43.592 36.487 P＜0.001 ＜0.001

3 討論

SLE是一種多系統(tǒng)、多器官受累的，免疫功能紊亂所致的慢性自身免疫性疾病，常累及腎臟而導(dǎo)致LN，LN實(shí)質(zhì)是一種免疫復(fù)合物性腎小球炎，嚴(yán)重增加了患者死亡的風(fēng)險(xiǎn)[7-8]。近年來，隨著LN早期診斷、免疫抑制療法及并發(fā)癥診療水平的提高，患者的疾病預(yù)后得到了良好的改善，但仍有部分患者進(jìn)展為終末期腎臟病，因此如何有效評(píng)估患者的疾病轉(zhuǎn)歸具有重要的臨床價(jià)值[9-10]。

有研究顯示，尿酸是嘌呤代謝的終產(chǎn)物，也是LN腎功能損害進(jìn)展的危險(xiǎn)因素，其水平過高會(huì)促進(jìn)腎功能損害的進(jìn)展及增加腎臟疾病患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)[11-12]。而有研究表明，LN不僅與腎小球和腎間質(zhì)損傷相關(guān)，還與腎血管損害有關(guān)，腎血管的損害會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)、加重慢性腎臟病進(jìn)展而形成惡性循環(huán)，加速腎衰竭的進(jìn)程[13-14]。而miR-145是最重要的血管調(diào)節(jié)因子，在血管平滑肌細(xì)胞促進(jìn)血管增殖表型和收縮表型間轉(zhuǎn)換過程中起重要的作用[15-16]。

而本研究通過檢測(cè)LN患者血清miR-145、血尿酸水平，并與健康人員作比較，發(fā)現(xiàn)LN組血清miR-145水平明顯低于健康組，LN組血尿酸水平明顯高于健康組，表明血清miR-145、血尿酸水平與LN的發(fā)生有關(guān)。這可能是由于機(jī)體的70%的尿酸通過腎臟排泄，會(huì)轉(zhuǎn)化為單鹽-水化合物或尿酸鹽結(jié)晶沉積在腎間質(zhì)及腎小管中，并激活腎素-血管緊張素系統(tǒng)而促進(jìn)炎性反應(yīng)[17-18]，因此其水平過高會(huì)造成腎臟炎癥反應(yīng)和纖維化的形成，損傷腎小球基底膜通透性、血管平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等，從而導(dǎo)致腎損害的發(fā)生。而miR-145在可表達(dá)于腎臟中的血管平滑肌細(xì)胞、系膜細(xì)胞、未分化近髓細(xì)胞等，具有血管損傷與修復(fù)的動(dòng)態(tài)平衡的調(diào)節(jié)作用[19-20]，因此其水平過低會(huì)促使血管平滑肌細(xì)胞表型調(diào)節(jié)，促使細(xì)胞外基質(zhì)的加速遷移、增殖及堆積，使血管內(nèi)膜脫落、中膜增厚，導(dǎo)致腎血管完整性缺失加重，從而加劇了腎損害。而本研究中，在血清miR-145水平方面，腎損害晚期LN患者明顯低于中期患者，中期患者明顯低于早期患者，在血尿酸水平方面，腎損害晚期LN患者明顯高于中期患者，中期患者明顯高于早期患者，提示血清miR-145、血尿酸水平與LN的腎損害有關(guān)。這可能是由于腎損害程度越嚴(yán)重的患者，上述的病理損害變化越嚴(yán)重，故表現(xiàn)為血清miR-145水平較低、血尿酸水平較高，隨腎損害程度的加重，血清miR-145水平有降低的趨勢(shì)、血尿酸水平有升高的趨勢(shì)。但本研究中，輕度、中度、重度疾病活動(dòng)度LN患者血清miR-145、血尿酸水平基本相同，提示血清miR-145、血尿酸水平與LN疾病活動(dòng)度無關(guān)，這可能是因?yàn)楸狙芯坎捎玫脑u(píng)估疾病活動(dòng)度的標(biāo)準(zhǔn)包含很多影響因素，其中腎臟因素所占比例較小所致。

綜上所述，血清miR-145、血尿酸水平與LN疾病活動(dòng)度無關(guān)，但與LN發(fā)生及其腎損害有關(guān)，血尿酸可能參與患者腎組織的損害，血清miR-145則可能參與患者腎組織的修復(fù)，提示監(jiān)測(cè)二者水平可能有助于了解腎臟損害程度以及進(jìn)一步了解LN的發(fā)病機(jī)制，并為L(zhǎng)N的診治提供新的思路和依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Levy GD， Rashid N， Niu F， et al. Effect of urate-lowering therapies on renal disease progression in patients with hyperuricemia[Jl. J Rheumatol， 2014， 41（5）： 955-962.

[2] 謝婷婷，陳夢(mèng)穎，唐湘玲，等.高尿酸血癥是狼瘡性腎炎患者腎病理損傷及預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[J].中南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2016，41（10）：1052-1057.

[3] 劉華，何小解，胡志蘭.狼瘡性腎炎腎血管損害和miR-145 的表達(dá) [J].臨床兒科雜志，2016，34（6）：406-410.

[4] 宋紅梅，李冀.狼瘡性腎炎診療建議介紹[J].中華實(shí)用兒科臨床雜志，2014，29（5）：326-330.

[5] 劉淵彬，關(guān)彤，張明英，等.基于尿液生物學(xué)標(biāo)記物評(píng)價(jià)昆母湯聯(lián)合激素治療狼瘡性腎炎療效研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，32（2）：212-215.

[6] 袁杉，張穎，王力寧.抗C1q抗體與系統(tǒng)性紅斑狼瘡及狼瘡腎炎的相關(guān)性[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，36（10）：63-66.

[7] Matias ML， Romao M， Weel IC， et al. Endogenous and uric acid- induced activation of NLRP3 inflammasome in pregnant women with preeclampsia [J]. PLuS One， 2015，10（6）： e 129095.

[8] 劉沙沙，宋佳敏，朱瑾，等.狼瘡性腎炎患者尿液足細(xì)胞和podocalyxin變化及其意義[J].交通醫(yī)學(xué)，2017，31（1）：9-12.

[9] Kim SM， Lee SH， Kim YG， et al. Hyperuricemia-induced NLRP3 activation of macrophages contributes to the progression of diabetic nephropathy[J]. Am J Physiol Renal Physiol， 2015， 308（9）：F993-F1003.

[10] 蔡輝，常文靜.狼瘡性腎炎相關(guān)的生物標(biāo)記物[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11（13）：1848-1850.

[11] 歐姆，梁孟君，張望，等.狼瘡腎炎患者高尿酸血癥患病率及其危險(xiǎn)因素分析[J].中華腎臟病雜志，2014，30（11）：805-812.

[12] Pramanik T， Khatiwada B， Pradhan P. Serum uric acid level in normal pregnant and preeclamptic ladies： a comparative study[J]. Nepal Med CollJ， 2014， 16（1）：30-32.

[13] 寧春艷，黨西強(qiáng)，宋芳，等.狼瘡性腎炎患兒血管損傷中心肌素與miR-145的表達(dá)情況及其臨床意義研究 [J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2016，19（31）：3831-3836.

[14] Kojima S， Enokida H， Yoshino H， et al. The tumorsuppressive microRNA-143/145 cluster inhibits cell migration and invasion by targeting GOLM1 in prostate cancer[J]. J Hum Genet， 2014， 59（2）：78-87.

[15] 劉華，何小解，李國(guó)君，等.microRNA-145對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響[J].中國(guó)當(dāng)代兒科雜志，2017，19（6）：712-718.

[16] Wei Y， Nazari-Jahantigh M， Neth P， et al.MicroRNA-126，-145， and -155： a therapeutic triad in atherosclerosis- [J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2013， 33（3）： 449-454.

[17] 權(quán)志慧，夏成云.女性狼瘡性腎炎患者血清尿酸水平變化及意義[J].中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2016，10（1）：34-37.

[18] Kirac Y， Bilen S， Duranay M. Comparison of laboratory findings in patients with glomerulonephritis classified according to histopathologic diagnosis[J]. Minerva Med，2014， 105（2）： 149-156.

[19] 查宜鳳，王嘉鋒，李和文，等.缺血再灌注損傷大鼠腎臟miRNA表達(dá)譜的篩查與分析[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，35（5）：465-470.

[20] Megiorni F， Cialfi S， Cimino G， et al. Elevated levels of miR-145 correlate with SMAD3 down-regulation in cystic fibrosis patients[J]. J Cyst Fibros， 2013， 12（6）：797-802.