NNK抑制ATM基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究

陳俊生，董 琪,曹玉祥，吳志浩

(1.皖南醫(yī)學(xué)院 麻醉學(xué)院，安徽 蕪湖 241002；2.皖南醫(yī)學(xué)院 精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)興趣小組,蕪湖 安徽 241002；3.皖南醫(yī)學(xué)院 臨床醫(yī)學(xué)院，安徽 蕪湖 241002；4.安徽師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，安徽 蕪湖 241000；5.皖南醫(yī)學(xué)院 細(xì)胞生物學(xué)教研室，生物活性大分子重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 蕪湖 241002)

煙草的使用是全世界主要的公共衛(wèi)生問(wèn)題，與煙草有關(guān)的癌癥每年造成數(shù)百萬(wàn)人死亡，其中肺癌患者占絕大多數(shù)[1]。4-甲基亞硝胺基-1-3-吡啶基-1-丁酮(4-methylnitrosamino-1-3-pyridyl-1-butanone，NNK)是煙草中重要的致癌物質(zhì)，其在體內(nèi)可被代謝為強(qiáng)致癌物4-羥基-1-(3-吡啶基)-1-丁酮[2]。在細(xì)胞中發(fā)生了這些復(fù)雜的生化反應(yīng)的結(jié)果是NNK廣泛地誘導(dǎo)DNA損傷[3-5]。

毛細(xì)血管擴(kuò)張-共濟(jì)失調(diào)突變基因(Ataxia-telangiectasia mutated,ATM) 定位于染色體11q22-23，長(zhǎng)度為13 kb，其中含有66個(gè)外顯子，編碼一個(gè)13 kb長(zhǎng)度的mRNA。其編碼產(chǎn)物為ATM蛋白，屬于一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，含有3056個(gè)氨基酸殘基，是一種分子質(zhì)量為350 ku大分子量蛋白，ATM是磷脂酰肌醇激酶相關(guān)激酶(PIKK)家族的成員，其在DNA雙鏈斷裂(DSB)誘導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)中起主要作用[6-7]。在細(xì)胞受到DNA雙鏈損傷時(shí)，它能被磷酸化激活并啟動(dòng)雙鏈修復(fù)阻止細(xì)胞周期的進(jìn)程[4]。因此，研究其活性調(diào)控及蛋白表達(dá)的機(jī)制具有重要的臨床意義。目前關(guān)于ATM基因表達(dá)的相關(guān)機(jī)制還尚未明確，為了后續(xù)探究ATM信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的相關(guān)分子機(jī)制，我們構(gòu)建了人源ATM基因啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒，并對(duì)其活性進(jìn)行初步研究。

1 材料與方法

1.1 材料 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞H1299為本實(shí)驗(yàn)室凍存；DMEM培養(yǎng)基(HyClone公司)；小牛血清(南京博全科技有限公司)；……