顯微鏡計數法復核血細胞分析儀計數PLT的臨床價值分析

陳小美 梁建嫦

廣東省云浮市衛生學校，廣東云浮 527300

血小板計數在各種出血性與血栓性疾病診斷中具有重要意義，是一項重要的血液常規檢查，目前已逐漸應用于臨床診斷疾病。乙肝、肝硬化均為我國高發疾病，防治任務艱巨，由于肝病患者肝臟功能明顯受損，無法發揮合成與清除功能，常出現PLT異常[1]。因此，加強PLT含量的檢測，提高計數真確性，對早期發現疾病，評估疾病進展顯得尤為重要。近年來血細胞分析儀器隨著科技的進步而得到快速發展，并因其檢測準確、快速、可重復性等優點而廣泛應用于臨床實驗室[2]，其檢測的血液標本抗凝劑選用EDTA-K2，但EDTA-K2可引起PLT凝集，從而造成PLT假性減少現象，加之PLT聚集與部分紅細胞體積較小等因素的干擾，導致PLT計數存在一定缺陷[3]。故本研究探討手工顯微鏡計數法復核血細胞分析儀計數在PLT計數中的應用價值。現報道如下。

1　資料與方法

1.1　一般資料

選取我院2017年1～8月住院患者血液標本548份，所有標本PLT計數均經血液細胞分析儀檢測不足50×109/L，且根據PLT計數范圍548份標本分為兩組，A組：PLT計數（20～50）×109/L，B組：PLT計數＜20×109/L。所有患者均知曉并同意參與本研究，自愿簽署知情同意書，獲我院倫理委員會審核通過。

1.2　方法

儀器與試劑：采用貝克曼庫爾特Act5diffal5分類全自動分析儀與配套試劑、EDTA-K2真空管、稀釋液中EDTA-K2含量0.2g/L、全血質控物。血液標本取自患者晨起空腹靜脈血，約3mL，經EDTAK2抗凝測定PLT計數，混勻至標本無血凝塊或溶血，但避免應用振搖器。顯微鏡PLT計數稀釋液為草酸銨，嚴格按照操作規程進行檢測，采用細滴管吸取1滴懸液至計數池內，注意避免外溢或有氣泡。水平靜置20min后，借助高倍鏡手工計數PLT數。血涂片法：取干凈載片做血液標本推片，將其晾干后，采用瑞士染色，閱片。

1.3　觀察指標

不同計數方法PLT計數結果，PLT假性減少標準：PLT＜50×109/L，無黏膜或淺表皮膚出血。染色后經油鏡下閱片顯示，PLT聚集成堆。

1.4　統計學處理

采用SPSS21.0軟件進行數據處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1　不同PLT計數方式結果比較

經計數發現，10例為PLT假性減少，其余538例可分為A組（350例）與B組（188例）兩組。A組顯微鏡計數、血涂片計數及儀器計數結果與B組三種計數結果比較，差異無統計學意義（t=1.951、1.181、0.826，P＞0.05）；而在B組計數中，顯微鏡計數與血涂片計數均明顯多于儀器計數（t=10.005、11.788，P＜0.05），血涂片與顯微鏡計數比較，差異無統計學意義（t=1.694，P＞0.05）。見表1。

表1　不同PLT計數方式結果比較（x ± s ，×109/L）

2.2　PLT假性減少標本計數結果

儀器計數結果為（15.86±5.29）×109/L，顯微鏡計數結果為（190.51±28.76）×109/L，顯微鏡計數PLT明顯多于儀器計數，差異有統計學意義（t=18.887，P＜ 0.05）。

3　討論

PLT是一種具有生理活性及酶的無核細胞，產生于巨核細胞脫落顆粒，具有生理性止血功能，常作為凝血與止血障礙的重要指標。PLT由骨髓釋放至外周血，可經歷5～7d的半衰期，其凝血功能與分布寬度、平均體積呈正相關，PLT曲線平滑度可有效判斷標本凝結與否，曲線終點位置可對骨髓造血功能進行判斷[4]。目前，我國衛生部門規定流式細胞術檢測由單克隆抗體標記的全血PLT與紅細胞比值為PLT計數方法，但其操作過于繁瑣，且價格高昂，不利于臨床廣泛應用[5]。因此，積極選取簡單精確的PLT計數方法稱為臨床關注的焦點之一。

近年來，國內血液檢驗學界對國際血液學組織建議采用顯微鏡復檢的標準給予了密切關注，其內容主要包括：復查標本、復核儀器報告、人工分類涂片、確認標本，檢查儀器運行狀態[6]，血細胞分析儀對PLT進行計數雖可有效縮短計數時間，實現簡單、快速計數PLT的目的，其具有可重復性等優點，同時可減輕醫務人員工作強度，便于批量檢測。但臨床實際檢測過程中受諸多因素影響常常發生PLT假性減低等現象，且PLT凝集常被計數為白細胞，進而導致白細胞假性增多[7-8]。兩者均可在一定程度上造成醫療隱患，指導錯誤治療，一旦引發醫療事故，后果不堪設想。基于此情況，本研究采用顯微鏡計數法對血細胞分析儀計數PLT進行復核。研究結果顯示，PLT＞20×109/L時，顯微鏡計數、儀器計數及血涂片計數差異無統計學意義，但PLT＜20×109/L時，顯微鏡計數可達到與血涂片計數法相近的結果，同時PLT計數明顯高于儀器計數法，提示儀器計數法可信度不足，應采用顯微鏡計數復核，確保計數結果的準確度。同時顯示血涂片法亦具有一定的優點：能夠對PLT形態進行準確的識別，將可疑物質如雜物、細胞碎片等排除，避免對PLT計數造成影響，有助于降低PLT計數假性降低，且能夠減少異常PLT漏檢事件的發生。而自動血細胞分析儀計數PLT的原理在于散射光、電阻抗法與熒光法結合進行PLT計數，通過低頻電流對PLT體積進行準確分析，繪制PLT直方圖，從而對PLT進行計數[9]。該測定原理的局限為：干擾PLT計數的因素較多，尤其是血小板、大血小板聚集、紅細胞碎片、小紅細胞等，影響檢測結果的準確性[10-11]。手工計數檢測結果相對準確則是由于其干擾因素較少，應用草酸銨稀釋液可增強紅細胞破壞能力，清晰辨認PLT形態。在該法應用過程中值得注意的是：（1）稀釋液配成后需經有效過濾方可應用，避免造成細菌與微粒感染。（2）保持吸管與試管干凈清潔，以防交叉污染。（3）采血時注意針刺稍深，快速完成操作，以免PLT聚集，引起PLT假性降低。（4）檢測應在標本采集1h之內完成，防止擱置時間過長對檢測結果造成影響。（5）充入計數池后，靜置10～ 15min左右，保持適當的光線，注意區別灰塵、雜志及折光性PLT。另本研究發現，PLT假性減少10例，雖發生率較低，但易對臨床診斷造成明顯影響，如誤診，進而貽誤病情、造成患者經濟損傷，引發醫療糾紛。PLT假性減少10例血液標本中，經手工顯微鏡下計數證實PLT均處于正常范圍，而出現假性的原因多由EDTA-K2抗凝劑引起PLT聚集成堆所致[12-13]。PLT計數波動是臨床工作中常見的問題之一，亦是困擾檢驗醫師進行臨床診斷的重要難題。考慮其原因為：（1）人為因素，臨床護理人員等醫務人員在標本采集時存在操作不規范現象，未充分混勻抗凝劑與標本；或采血過程不暢，造成標本凝集，進而出現PLT計數假性降低情況。（2）儀器因素，多數實驗室應用的全自動血液分析儀為電阻抗原理，在同一通道上測量紅細胞與PLT，導致無法將PLT衛星現象、PLT凝集、體外溶血、冷球蛋白對PLT計數造成的影響排除[14-15]。因此，操作人員在發現PLT減少或異常報警時，應高度懷疑是否存在PLT凝集現象，并采用顯微鏡計數法進行復核，同時應聯合血涂片染色檢查，以最大限度減少誤診事件的發生。顯微鏡檢能夠準確觀察PLT形態及分布情況，判斷血涂片中PLT數量，結合顯微鏡計數結果可獲得更加客觀、準確的PLT計數結果，從而為臨床診斷與治療提供科學合理的依據。

綜上所述，顯微鏡計數法復核血細胞分析儀計數PLT的臨床應用價值顯著，能夠較好的彌補儀器法的缺陷，有助于早期發現PLT假性減少，做出準確診斷，減少誤診，為臨床掌握患者病情進展，制定合適的治療方案提供合理參考，從而有助于改善疾病的防治工作，構建和諧的醫患關系。

[參考文獻]

[1] 孫育.血液分析儀計數血小板假性異常及其影響因素分析 [J].醫學綜述，2013，19（4）：762-764.

[2] 魏靜，冷姍姍.Sysmex不同型號血細胞分析儀檢測結果的比對分析和偏倚評估[J].檢驗醫學與臨床，2016，13（10）：1399-1401.

[3] 陳偉，涂慧英，李月.3種血小板計數方法的比較研究[J].重慶醫學，2015（26）：3677-3679.

[4] 胡莉，韋永瓊.不同型號血細胞分析儀檢測結果的比對分析 [J].國際檢驗醫學雜志，2016，37（12）：1687-1688.

[5] 關向前，陳發珍.EDTA依賴性血小板聚集及其對血小板計數的影響[J].臨床輸血與檢驗，2015，17（3）：239-242.

[6] 張穩燕，周開礦，陳穎，等.外周血血涂片估測血小板的方法研究 [J].檢驗醫學與臨床，2016，13（22）：3242-3244.

[7] 王丹，潘莉娟，歐國平，等 .SysmexXT1800i血細胞分析儀血小板計數準確性的研究[J].檢驗醫學與臨床，2015，12（19）：2842-2844.

[8] 李彬，王川.不同血小板計數方法結果比較及臨床應用[J].海南醫學院學報，2016，22（16）：1877-1879，1883.

[9] 崔俊林，曹娟.乙二胺四乙酸依賴性假性血小板減少的分析[J].國際檢驗醫學雜志，2016，37（1）：105-106.

[10] 金芳，龍建成，張春霞.Sysmex XN20 A1全自動血細胞分析儀性能評價[J].中國醫學裝備，2016，13（8）：31-34.

[11] 崔曉陽，馮春顏，朱彩云，等.血液分析儀新型熒光血小板計數法的基本性能評價[J].中國醫學裝備，2016，13（1）：70-74.

[12] 王培昌，鄭宇佳，高世超.血細胞分析儀未檢出血小板分布寬度的原因分析及該類標本血小板計數準確性評價 [J].現代檢驗醫學雜志，2016，（1）：117-120.

[13] 劉非，梁綺華，姜志勇，等.血小板分布異常原因分析及對血小板計數的影響[J].國際檢驗醫學雜志，2014，35（6）：726-728.

[14] 李惠卿，賴馨，蔡潔丹，等.血細胞分析儀計數血小板假性減少原因分析及對策探討[J].臨床和實驗醫學雜志，2014，14（9）：764-767.

[15] 許文艷，涂云貴，杜巧麗.血小板假性減少的原因分析與對策 [J].國際檢驗醫學雜志，2016，37（8）：1157，1161.