細胞蠟塊聯合免疫組化技術在提高肺癌胸水細胞學陽性檢出率及提供分型診斷方面的應用價值分析

吳冬梅 吳艷霞 袁振興 王志強 郭潤民

1.廣東醫科大學附屬醫院病理診斷與研究中心，廣東湛江 524001；2.廣東醫科大學附屬醫院臨床醫學研究中心，廣東湛江 524001；3.廣東醫科大學附屬醫院心血管內科，廣東湛江 524001

肺癌是我國最常見的癌癥[1]，約15%的肺癌患者在初診時已存在胸腔積液， 約50%的患者在疾病進展過程中出現胸腔積液[2]。目前，我國對于惡性胸腔積液的精確診斷技術尚未成熟， 鑒別良、惡性胸腔積液依然存在爭議[3]。近年來我院開展的胸水液基細胞學檢查在胸水標本的制片質量和制片滿意度方面優于傳統涂片細胞學，對惡性胸腹水的診斷陽性率略高于傳統細胞學檢查，但差異無統計學意義[4]。為了解決這一問題，我院采用液基細胞學檢查結合改良細胞蠟塊技術，并進一步做免疫組化檢查，取得了理想結果[5-7]。為觀察細胞蠟塊結合免疫組化技術在提高肺癌胸水細胞學陽性檢出率以及提供分析診斷方面的應用價值，我院進行了相關研究，現報道如下。

表1　兩種細胞學檢查對肺癌診斷的靈敏性和特異性比較

1　資料與方法

1.1　一般資料

收集我院2015年10月～2017年12月經活檢確診肺癌患者胸水58例進行研究。其中男41例，女17例，年齡28～88歲，平均（56.33±12.33）歲。

1.2　方法

1.2.1研究方法 所有胸水標本分別進行薄層液基細胞學沉降式制片和制備成細胞蠟塊后結合免疫組織化學染色兩種方法進行檢查。

薄層液基細胞學沉降式制片：取新鮮胸水標本100mL放置到保存液中，搖勻，取50mL使用1500r/min的離心機離心5min，棄掉上清液，加入5mL細胞固定液，搖勻，以1500r/min速度離心5min，棄掉上清液，加入1mL緩沖液，搖勻，取其中800μL在沉降倉內靜置20min，棄除沉降液，加1mL沖洗液沖洗2次，1mL緩沖液2次，使用蘇木素染液1mL染色，放置90s，倒掉，再次使用1mL沖洗液和1mL緩沖液沖洗2次，使用伊紅染液1mL染色10s，再次沖洗2次，取出玻片，使用無水乙醇2min，二甲苯2min后封片。

制備細胞蠟塊并使用免疫組化染色法：薄層液基細胞學沉降式制片后剩余胸水樣本加入保存液，在4℃冰箱靜置至細胞完全沉淀，棄除上清液，以2000r/min速度離心5min，取沉淀加入5mL福爾馬林溶液震蕩后以2000r/min速度離心5min，取沉淀，加入10mL 95%乙醇脫水，以2000r/min離心5min，在擦鏡紙包裹下放入取材盒，脫水3h后常規包埋，切片。使用MaxVision二步法對細胞蠟塊進行免疫組化染色。將蠟塊切成厚度為3μm的蠟片，防脫玻片裱片，使用二甲苯進行脫蠟，常規梯度乙醇至水，高壓修復，以3%H2O2室溫下放置10min，一抗37℃孵育60min，二抗37℃15min，使用DAB顯色。

1.2.2分析指標[3]以活檢標本病理診斷為金標準，觀察兩種制片方法診斷的靈敏度和特異度。以及比較制片染色效果情況，觀察細胞蠟塊結合免疫組化結果對于肺癌分析診斷的準確率。靈敏度=真陽性人數/（真陽性人數+假陰性人數）×100%。特異度=真陰性人數/（真陰性人數+假陽性人數）×100%。

1.3　統計學分析

采用統計學軟件SPSS19.0版對數據進行統計分析，計量資料采用（）表示，采用t檢驗，計數資料采用百分數（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1　兩種細胞學檢查對肺癌診斷的靈敏性和特異性比較

薄層液基細胞學沉降式制片對58例肺癌患者胸水診斷的靈敏度和特異度分別為81.25%、60.00%，明顯低于細胞蠟塊聯合免疫組化染色法的95.83%、90.00%，且差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。薄層液基細胞學沉降式制片得到的圖像對比清晰，細胞分別均勻，具有較好的細胞形態，但是對于成團、腺樣等結構顯示的較少，見圖1。細胞蠟塊結合免疫組化染色法得到的涂片染色對比清晰，細胞數目更為富集，均勻，細胞排列方式和結構在多數涂片中均能清楚顯示，見圖2。

2.2　細胞蠟塊結合免疫組化結果對于肺癌分析診斷的準確率觀察

圖1　薄層液基細胞學沉降式制片（HE×400）

圖2　細胞蠟塊結合免疫組化染色法（HE×400）

48例經病理檢查確診為肺癌的患者，細胞蠟塊結合免疫組化染色法檢查總準確率為95.83%，其中腺癌的準確率最高，為94.12%。未分化癌檢查的準確率最低，2例均未檢測，4例標本細胞蠟塊結合免疫組化染色法確診為肺癌，但是無法分型。見表2。

表2　細胞蠟塊聯合免疫組化結果對于肺癌分析診斷的準確率觀察

3　討論

晚期肺癌患者的主要癥狀表現包括胸腔積液，對于惡性腫瘤引起的漿膜腔積液，影像學檢查由于受積液干擾一般無法準確觀察原發灶，也無法通過內鏡活檢、體外穿刺及手術切除獲得組織標本，只能依靠漿膜腔積液細胞病理學檢測尋找惡性證據[8]。因此漿膜腔積液細胞病理學診斷可能是這類患者唯一能起到確診作用的選擇[9]。液基細胞學檢測技術應用于臨床有100余年的歷史，在婦科標本的檢測中得到廣泛應用[10]，并逐漸推廣用于漿膜腔積液[10]和尿液[11]脫落細胞學檢查。其與普通涂片相比，均勻薄層，細胞結構清晰，背景干凈，能清晰的觀察細胞三維結構，肺癌診斷率較高，但敏感性和特異性不高[4]。因為經過此種技術制備的細胞失去細胞排列方式和背景細胞，因此對于未分化癌、反應性間皮細胞癌等鑒別準確性較低，也存在免疫組化染色率低，標本不易長期保持等問題[6，12]。而改良的細胞蠟塊技術是離心富集標本去除血細胞后，經過福爾馬林和95%乙醇先后固定，再進行脫水、石蠟包埋進行制片[5，13]。從本次研究中看，液基細胞學對58例疑似肺癌患者診斷的靈敏度和特異度分別為81.25%、60.00%，明顯低于細胞蠟塊結合免疫組化染色法的95.83%、90.00%，且差異有統計學意義（P＜0.05），而且細胞蠟塊結合免疫組化染色法能夠更好的檢查出細胞的結構，解決了傳統細胞學檢查的缺陷。48例經病理檢查確診為肺癌的患者，細胞蠟塊結合免疫組化染色法檢查總準確率（95.83%），其中腺癌的準確率最高（94.12%），未分化癌檢查的準確率最低，2例均未檢測[5,9,14]。

采用液基細胞學法與細胞蠟塊組織切片法相結合，兩者間相互補充能夠更好的提升診斷效果，還能夠達到組織學活檢的目的，能為腫瘤的組織學分型、來源以及個體化治療提供幫助[15]。晚期肺癌患者有時以體腔積液為首發癥狀，而傳統細胞學檢查僅提供惡性腫瘤的診斷，對于原發病灶的尋找并沒有幫助， 但細胞蠟塊組織切片具有可以反復連續切片的優點，因此應用細胞切片進行的其他輔助檢查，可以為尋找原發病灶提供線索，同時能夠進行組織分型及分子病理檢測.有效指導腫瘤的分子靶向治療，該方法的應用對于不易獲取組織標本的晚期肺癌患者具有更重要的意義[16]。將液基細胞學法與細胞蠟塊組織切片法相結合后，作為一種改良的細胞學制片技術，更能提高肺癌組織學分型的符合率。液基細胞學法聯合細胞蠟塊組織切片法對于難以取得組織活檢標本的肺癌（如腫塊表面出血壞死、氣管鏡下看不到腫塊等情況）的病理組織分型診斷有著非常重大的意義。

綜上所述，細胞蠟塊結合免疫組化技術能夠明顯提高肺癌胸水細胞的陽性檢出率，且能夠為癌癥分型診斷提供可靠依據。

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