胃癌組織TREM2表達變化及其臨床意義

馮春念，馬婷婷，趙千秋，毛雪梅

(1宣漢縣人民醫(yī)院，四川達州636150；2 棗莊市薛城區(qū)人民醫(yī)院)

胃癌是我國最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其病死率居癌癥相關(guān)死亡原因的第二位[1，2]。盡管近年來癌癥診療技術(shù)取得了一定進步，但胃癌患者5年生存率仍然不高[3]。髓系細(xì)胞觸發(fā)受體2(TREM2)是近年發(fā)現(xiàn)的一種免疫球蛋白超家族受體，可選擇性表達于髓樣細(xì)胞，并通過DNAX活化蛋白12和磷酸化酪氨酸激酶進行細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[4]。TREM2與其配體結(jié)合后可促進腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞高表達CD163，放大腫瘤局部微環(huán)境中炎性反應(yīng)，促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[5，6]。已有研究證實，肺癌、肝癌、卵巢癌等惡性腫瘤組織TREM2表達增加，其表達變化可促進腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和遷移。但目前TREM2表達與胃癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的報道較少。為此，本研究探討了胃癌組織TREM2表達變化及其臨床意義?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年6月～2013年6月宣漢縣人民醫(yī)院收治的胃癌患者78例。所有患者經(jīng)術(shù)后組織病理檢查明確診斷。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合胃癌診斷；②臨床病理資料完整；③接受胃癌根治性手術(shù)，術(shù)前未接受化療、放療或基因治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②術(shù)前已接受抗腫瘤治療者；③臨床資料不完整者。其中，男56例、女22例，年齡37～72歲(≥60歲50例、<60歲28例)；腫瘤直徑：≥4 cm 18例，<4 cm 60例；組織分化程度：高中分化21例，低未分化57例；TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期47例，Ⅲ、Ⅳ期31例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移50例。本研究經(jīng)宣漢縣人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者或其家屬均知情同意。

1.2 TREM2表達檢測 ①TREM2 mRNA：采用RT-PCR法。取手術(shù)切除的胃癌組織及其癌旁正常組織(距腫瘤組織邊緣﹥2 cm)，TRIzol法提取組織總RNA，經(jīng)紫外分光光度計和1.5%瓊脂糖凝膠電泳鑒定，提取的總RNA符合實驗要求。按PrimeScriptTMOne Step RT-PCR Kit試劑盒說明將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板，按Sensi-Mix One-Step Kit說明進行PCR擴增。所有引物由上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司設(shè)計合成。引物序列：TREM2上游引物5′-ACTACTCTGCCTGAACAC-3′，下游引物5′-GCTAAATATGACAGTCTTGGA-3′；GAPDH上游引物5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，下游引物5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。PCR反應(yīng)體系共20 μL：10×Buffer 1 μL，dNTP 1.6 μL，上下游引物各0.6 μL，Taq酶1 μL，ddH2O 13.2 μL，DNA模板2 μL；反應(yīng)條件：95 ℃ 45 s，55 ℃ 45 s，72℃ 90 s，共30個循環(huán)；溶解曲線：95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，95 ℃ 15 s。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計算TREM2 mRNA相對表達量。實驗重復(fù)3次，取平均值。②TREM2蛋白：采用免疫組化法。取手術(shù)切除的胃癌組織及其癌旁正常組織，10%中性甲醛固定，石蠟包埋，5 μm厚切片。將切片置于60 ℃烤箱烤片60 min，常規(guī)脫蠟、水化，3% H2O2室溫孵育15 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶；10 mmol/L檸檬酸鈉緩沖液(pH 6.0)高壓鍋加熱3 min修復(fù)抗原，自然冷卻至室溫，滴加5% BSA封閉液封閉；加入山羊抗TREM2抗體(稀釋比1∶200)，4 ℃孵育過夜。次日PBS沖洗3 min×3次，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的驢抗羊IgG抗體(稀釋比1∶5 000)，室溫孵育15 min；PBS沖洗3 min×3次，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。以PBS代替一抗作為陰性對照，用已知結(jié)果陽性的胃癌組織切片作為陽性對照。TREM2蛋白陽性表達定位于細(xì)胞質(zhì)，呈黃褐色顆粒。每張切片隨機選取5個200倍視野，根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例和染色強度按半定量評分法判定結(jié)果。陽性細(xì)胞所占比例評分：陽性細(xì)胞所占比例<5%計0分，陽性細(xì)胞所占比例5%～<25%計1分，陽性細(xì)胞所占比例25%～<50%計2分，陽性細(xì)胞所占比例50%～<75%計3分，陽性細(xì)胞所占比例≥75%計4分；染色強度評分：不著色計0分，淡黃色計1分，黃色或棕黃色計2分，黃褐色計3分。陽性細(xì)胞所占比例評分與染色強度評分乘積0～2為陰性表達、3～9為陽性表達。所有切片由兩位病理科醫(yī)生采用盲法閱片，結(jié)果不一致時請第三位病理科醫(yī)生閱片，以兩個相同結(jié)果為準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織與癌旁正常組織TREM2表達比較 胃癌組織與癌旁正常組織TREM2 mRNA相對表達量分別為3.75±0.27、2.17±0.15，二者比較P<0.05。胃癌組織與癌旁正常組織TREM2蛋白陽性表達率分別為62.8%(49/78)、39.7%(31/78)，二者比較P<0.05。

2.2 胃癌組織TREM2蛋白表達與患者臨床病理特征的關(guān)系 見表1。

3 討論

我國是世界上胃癌高發(fā)國家之一，全世界因胃癌死亡患者中，我國占35%[7]。有研究表明，早診斷、早治療可在一定程度上改善胃癌患者預(yù)后[8]。但多數(shù)患者就診時已屬進展期，即使接受根治性手術(shù)，患者術(shù)后復(fù)發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移率依然較高，5年生存率僅20%左右[3]。

TREM2是存在于細(xì)胞膜表面的信號受體，在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)等病理過程中發(fā)揮關(guān)鍵性作用。研究發(fā)現(xiàn)，TREM2異常表達與阿爾茨海默病等神經(jīng)系統(tǒng)病變的發(fā)生和進展有關(guān)[9]。近期研究發(fā)現(xiàn)，TREM2在惡性腫瘤的發(fā)生和進展過程中可能具有癌基因作用[10]。Li等[11]報道，TREM2可抑制T細(xì)胞增殖，負(fù)性調(diào)控腫瘤免疫。Phongsisay等[12]研究發(fā)現(xiàn)，TREM家族成員可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移等生物學(xué)行為。Korvatska等[13]研究發(fā)現(xiàn)，TREM2與接頭蛋白DAP12結(jié)合，可激活PI3K并抑制TLR活化，繼而抑制腫瘤壞死因子分泌和巨噬細(xì)胞活性，而抑制腫瘤壞死因子分泌和巨噬細(xì)胞活性與腫瘤的發(fā)生、進展密切相關(guān)。Finelli等[14]研究認(rèn)為，TREM2高表達可放大腫瘤微環(huán)境中的炎性反應(yīng)，促進腫瘤細(xì)胞形成，而且局部炎性微環(huán)境還能介導(dǎo)上皮-間質(zhì)表型轉(zhuǎn)化，促進腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移。因此，TREM2可能通過誘導(dǎo)損傷、抑制修復(fù)等機制參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織TREM2表達明顯高于癌旁正常組織，提示TREM2表達上調(diào)可能與胃癌的發(fā)生、進展有關(guān)。進一步分析胃癌組織TREM2蛋白表達與患者臨床病理特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，TREM2蛋白表達與腫瘤直徑、組織分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說明TREM2高表達可能促進胃癌的發(fā)生、發(fā)展。由于本研究樣本量相對較少，而且國內(nèi)外關(guān)于TREM2表達與胃癌關(guān)系的研究尚處于起步階段，缺少相應(yīng)的文獻支持，故其結(jié)論尚需進一步研究證實。另外，限于實驗條件，尚未對TREM2下游信號通路或調(diào)控靶基因進行研究。

綜上所述，胃癌組織TREM2表達升高，其表達變化與胃癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。