微生物鑒定技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運用研究

萬清峰

【摘要】文章通過闡述微生物鑒定技術(shù)的內(nèi)涵特征，對微生物鑒定技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運用及藥品生產(chǎn)中的微生物污染控制策略展開探討，旨在為研究如何促進(jìn)藥品生產(chǎn)的安全有序開展提供必要思路。

【關(guān)鍵詞】微生物鑒定技術(shù);藥品;生產(chǎn)

藥品微生物檢測結(jié)果受諸多因素影響，例如產(chǎn)品抗菌性及抑菌性、微生物分布不均勻等。所以，對于藥品生產(chǎn)而言，要想保證檢測結(jié)果的可靠性，務(wù)必要依據(jù)對應(yīng)方法開展有效的方法驗證，依據(jù)驗證完畢的檢測方法對其開展微生物鑒定[1]。由此可見，對微生物鑒定技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運用開展研究，有著十分重要的現(xiàn)實意義。

1 微生物鑒定技術(shù)

1.1 PCR技術(shù)

PCR是一項體外快速擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)。PCR技術(shù)自上世紀(jì)80年代被美國生物化學(xué)家穆里斯發(fā)明以來已經(jīng)在醫(yī)療衛(wèi)生、現(xiàn)代農(nóng)業(yè)、食品加工等諸多行業(yè)領(lǐng)域得到廣泛推廣。該項技術(shù)的運行原理在于在體外將引物及目標(biāo)DNA經(jīng)由變性、退火、延伸等流程達(dá)成對目標(biāo)DNA的快速、特異性擴(kuò)增[2]。Taq DNA聚合酶的誕生很大程度上推動了PCR技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步。在實際工作中，PCR技術(shù)往往被應(yīng)用于與核酸測序技術(shù)開展有效相融，以實現(xiàn)對微生物基因型的鑒定。16s rDNA可呈現(xiàn)微生物特有的進(jìn)化信息，在微生物中呈現(xiàn)出廣泛的序列多態(tài)性以及保守性，其基因序列己然轉(zhuǎn)變成微生物鑒定的一項有力依據(jù)。現(xiàn)階段，由PCR技術(shù)衍生的各式各樣相關(guān)技術(shù)，諸如不對稱PCR技術(shù)、引物標(biāo)記PCR技術(shù)、多重PCR技術(shù)等，己在微生物分型及檢測領(lǐng)域得到廣泛推廣。

1.2 基因芯片技術(shù)

基因芯片，亦可稱之為生物芯片、DNA芯片，其運行機(jī)制在于核酸經(jīng)由與己知序列的、在基片表面固定標(biāo)記過的核酸探針雜交，進(jìn)而開展核苷酸測序的方法。該項技術(shù)是1998年自然科學(xué)領(lǐng)域的重要進(jìn)展之一，現(xiàn)階段己在諸多行業(yè)領(lǐng)域得到廣泛推廣，諸如藥物篩選、微生物檢測、臨床診斷等。基因芯片具備較強(qiáng)的自動化、并行性以及微型化，可同時于一張芯片上開展不同微生物的快速檢測。基因芯片技術(shù)擁有良好的靈敏性、特異性，并且還可縮減化學(xué)試劑的使用量，屬于一項環(huán)境友好型的技術(shù)。作為一項快速、準(zhǔn)確、大規(guī)模的微生物鑒定技術(shù)，基因芯片技術(shù)尚未廣泛轉(zhuǎn)化成商品化產(chǎn)品應(yīng)用。基因芯片技術(shù)所需運用到的諸如寡核苷酸合成儀、掃描儀等設(shè)備成本昂貴，并且對基因芯片檢測結(jié)果評定現(xiàn)階段尚未有構(gòu)建起全面統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，樣品制備難度大也一定程度上制約了基因芯片技術(shù)的廣泛推廣。伴隨微生物鑒定技術(shù)的不斷發(fā)展成熟，微生物基因庫越來越豐富，基因芯片技術(shù)在藥品微生物鑒定領(lǐng)域勢必能夠得到越來越廣泛的推廣。

2 微生物鑒定技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運用

藥品生產(chǎn)中安全問題是一項十分重要的問題，其主要涉及到質(zhì)量、成分營養(yǎng)性及依賴性等方面的問題，本次研究側(cè)重于研究質(zhì)量安全。近年來，不論是在國際還是在國內(nèi)不斷發(fā)生有藥品安全問題，由此使得藥品安全越來越為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域及生產(chǎn)領(lǐng)域所廣泛關(guān)注。需要注意的是，藥品中微生物的鑒定可視作藥品質(zhì)量安全的一項重要權(quán)衡標(biāo)準(zhǔn)，也可將其作為鑒定的一項重要參考依據(jù)，所以要對藥品中各式各樣微生物開展高水平的鑒定，微生物相關(guān)鑒定技術(shù)在當(dāng)前藥品生產(chǎn)中的運用，包括有：

2.1 PCR技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運用

PCR技術(shù)依托體外多聚酶鏈反應(yīng)合成特異性DNA片段，然后經(jīng)由擴(kuò)增產(chǎn)物，使DNA迅猛增長，數(shù)量可驟升至原本的百倍，再對熒光條帶進(jìn)行檢測，進(jìn)而實現(xiàn)對微生物種類的確定。PCR技術(shù)既具備較高靈敏度、較強(qiáng)的特異性以及快速檢測等特征，自理論層面而言，在檢測細(xì)菌過程中，運用PCR技術(shù)可檢測出一個細(xì)菌的拷貝基因，進(jìn)一步在短暫時間內(nèi)增菌或不增菌，在細(xì)菌檢測中極大水平縮減時間投入，可定量鑒定出大腸桿菌、沙門桿菌、肉毒桿菌等，極大水平擴(kuò)大檢測范圍。同時，PCR技術(shù)還可鑒定出藥品中含有治療金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、李斯特桿菌等多種不同成分。舉例而言，相關(guān)研究人員在尚未開展富集化培養(yǎng)便引入免疫磁珠方法、熒光定量PCR技術(shù)開展有效相融，實現(xiàn)了對藥品的快速準(zhǔn)確檢測，鑒定出藥品中含有治療李斯特菌、大腸埃希氏菌等成分：還有相關(guān)研究人員運用熒光定量PCR技術(shù)對實驗菌株展開檢測，發(fā)現(xiàn)藥品中大部分菌株呈陰性，且含有少部分溶血弧菌呈陽性[3]。值得一提的是，PCR技術(shù)同樣存在一些缺點，好比因為增菌培養(yǎng)基或其他相關(guān)微生物DNA會對水生棲熱菌產(chǎn)生一定抑制作用，進(jìn)一步導(dǎo)致鑒定結(jié)果呈假陰性，對結(jié)果帶來不利影響。

2.2 基因芯片技術(shù)在藥品生產(chǎn)中運用

基因芯片技術(shù)是指利用微電子技術(shù)及微加工技術(shù)，將一大批基因寡核苷酸開展高密度、有序排列，并使其排列于硅片、纖維膜等載體上，進(jìn)一步形成雜交信號對目的基因予以檢測。運用基因芯片技術(shù)對樣品DNA依托PCR技術(shù)擴(kuò)增后制備的探針點樣于基因芯片表面，通過熒光標(biāo)記的寡核苷酸點及芯片表面探針開展雜交，再選取掃描儀對芯片上呈現(xiàn)的熒光予以檢測分析，進(jìn)一步鑒定出樣品DNA中含有相關(guān)特定微生物與否。基因芯片技術(shù)還可于寡核苷酸探針中加入一定探針，進(jìn)而使檢測范圍得到有效擴(kuò)大，并且經(jīng)由加入及調(diào)節(jié)探針，使基因芯片檢測準(zhǔn)確性得到顯著提升。自理論層面而言，運用基因芯片技術(shù)可于一次試驗中有限檢測出所有潛在的致病原，或于一張基因芯片中檢測出一種致病原的遺傳學(xué)指標(biāo)，極大水平提高基因芯片技術(shù)的檢測速度、便捷性及靈敏度，彌補(bǔ)傳統(tǒng)檢測中操作復(fù)雜、效率低及自動化水平低等不足。

3 藥品生產(chǎn)中的微生物污染控制策略

新形勢下，藥品生產(chǎn)行業(yè)要緊緊跟隨社會前進(jìn)腳步，加大改革創(chuàng)新力度，加強(qiáng)對國內(nèi)外成功發(fā)展經(jīng)驗的學(xué)習(xí)引入，切實開展好對藥品生產(chǎn)中的微生物污染控制工作。如何進(jìn)一步促進(jìn)藥品生產(chǎn)的安全有序開展可以將以下策略作為切入點：其一，開展好藥品生產(chǎn)原料控制。對買入的藥品生產(chǎn)原料開展嚴(yán)格驗收檢測，保證達(dá)標(biāo)的原料投入生產(chǎn)。進(jìn)廠的生產(chǎn)原料應(yīng)當(dāng)首先對包裝情況開展檢測，確保外包裝完好，各項標(biāo)簽記錄完整，依據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)開展染菌情況檢測。同時，還應(yīng)當(dāng)開閘好物料儲存保管工作，運用達(dá)標(biāo)的原材料，結(jié)合各種劑型實際要求，藥品生產(chǎn)前對原材料開展篩選、清洗、滅菌等處理。直接入藥的藥材在配料前鑒定微生物滿足標(biāo)準(zhǔn)與否，確保成品衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)達(dá)標(biāo)，對直接入藥含菌量高的中藥材依據(jù)其特性逐一開展滅菌處理。制劑包裝對確保制劑質(zhì)量至關(guān)重要，應(yīng)當(dāng)提高重視，要滿足藥品監(jiān)管部門相關(guān)規(guī)定，防止包裝材料在儲存、運輸?shù)拳h(huán)節(jié)遭受污染，倘若包裝材料污染細(xì)菌不滿足標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)當(dāng)開展滅菌處理方可投入使用。其二，確保生產(chǎn)用水質(zhì)量。生產(chǎn)用水應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)開展控制，例如控制好制粒過程中運用的粘合液，應(yīng)當(dāng)運用經(jīng)高溫煮沸殺菌處理的純水，應(yīng)當(dāng)運用流動水對藥材進(jìn)行洗滌，運用完畢的水不可再用于洗滌其他藥材。適時對生產(chǎn)用水質(zhì)量進(jìn)行檢測，加大對純化水防污染管理力度，保證儲藏、輸送純化水容器及管道材質(zhì)的穩(wěn)定性，應(yīng)當(dāng)運用可靠的不銹鋼材質(zhì)，縮減管線死角，定期對輸送管道、容器進(jìn)行消毒處理。最后，適時依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)對純化水、自來水開展質(zhì)量控制。其三，加大對環(huán)境與設(shè)備的有效管理。構(gòu)建科學(xué)健全的管理制度，確保潔凈區(qū)個環(huán)境指標(biāo)達(dá)標(biāo)，并按照規(guī)定進(jìn)行滅菌、使用、維護(hù)、保養(yǎng)等，并進(jìn)行詳細(xì)記錄。藥品生產(chǎn)設(shè)備應(yīng)當(dāng)結(jié)合生產(chǎn)工藝要求及生產(chǎn)規(guī)模而定，只要與產(chǎn)品直接接觸的設(shè)備，便應(yīng)當(dāng)確保設(shè)備內(nèi)表面光滑無死角。各個生產(chǎn)環(huán)節(jié)盡可能縮減微生物污染，應(yīng)適時清洗、消毒。藥品生產(chǎn)前應(yīng)當(dāng)檢測容器、設(shè)備、輸送藥液潔凈與否或者是否需要消毒，否則不可開展新產(chǎn)品生產(chǎn)。

4 結(jié)束語

總而言之，在藥品生產(chǎn)中，對原料、生產(chǎn)場所、生產(chǎn)過程的微生物控制是確保藥品質(zhì)量的重要前提，因而運用微生物鑒定技術(shù)高效、準(zhǔn)確地獲取檢測結(jié)果，對現(xiàn)階段藥品微生物檢測工作而言至關(guān)重要。新形勢下，藥品生產(chǎn)行業(yè)相關(guān)人員應(yīng)當(dāng)加大研究力度，提高對微生物鑒定技術(shù)內(nèi)涵特征的有效認(rèn)識，推進(jìn)對微生物鑒定技術(shù)的科學(xué)合理應(yīng)用，“開展好藥品生產(chǎn)原料控制”、“確保生產(chǎn)用水質(zhì)量”、“加大對環(huán)境與設(shè)備的有效管理”等，積極促進(jìn)藥品生產(chǎn)的安全有序開展。

參考文獻(xiàn)

[1]池王胄，宋庭，周芳芳，孫黎，微生物鑒定技術(shù)在無菌藥品生產(chǎn)企業(yè)中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2012，14 （01）：177-178， 180.

[2]鄭小玲，王知堅，李玨，王征南，洪利婭，多種測序技術(shù)在藥品檢測環(huán)境微生物鑒定分析中的應(yīng)用研究[J].藥物分析雜志，2016，27 （01）： 46-52.

[3] HERBEL S R， LAUZAT B， VONNICKISCH-ROSENEGK M. et al.Species-specific quantification ofprobiotic lactobacilli in yoghurtby quantitative real-time PCR[J].JApplMicrobiol，2013， 115 （06）： 1402-1410。