惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達(dá)及意義

王黎，李紅，覃駿，楊華強(qiáng)

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院，湖北十堰442000)

惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達(dá)及意義

王黎，李紅，覃駿，楊華強(qiáng)

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院，湖北十堰442000)

目的檢測(cè)惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達(dá)情況，并分析其臨床意義。方法選擇58例惡性淋巴瘤患者和27例反應(yīng)增生性淋巴結(jié)炎患者，應(yīng)用免疫組化染色法檢測(cè)惡性淋巴瘤組織(觀察組)和反應(yīng)增生性淋巴結(jié)組織(對(duì)照組)中nm23、Survivin蛋白表達(dá)情況。結(jié)果觀察組nm23、Survivin呈過(guò)表達(dá)，對(duì)照組nm23、Survivin呈低表達(dá)(P均<0.01)。nm23過(guò)表達(dá)與B組癥狀、臨床分期高、惡性程度高、結(jié)外累計(jì)部位數(shù)多有關(guān)(P均<0.05)，Survivin過(guò)表達(dá)與臨床分期高、惡性程度高及乳酸脫氫酶增高有關(guān)(P均<0.05)。nm23與Survivin表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.323，P<0.05)。結(jié)論惡性淋巴瘤組織中nm23蛋白與Survivin蛋白均過(guò)表達(dá)，且nm23蛋白、Survivin蛋白過(guò)表達(dá)與惡性淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程密切相關(guān)。

惡性淋巴瘤；nm23蛋白；Survivin蛋白

惡性淋巴瘤由霍奇金淋巴瘤(HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)兩大類(lèi)組成[1]。nm23基因是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，在腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和植入過(guò)程中有十分重要的抑制作用[2]。在人體各組織細(xì)胞實(shí)體瘤中，nm23基因?qū)δ[瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的抑制作用均有研究報(bào)道[3]。Survivin基因是細(xì)胞凋亡的抑制基因之一[4]。Survivin基因表達(dá)蛋白存活素，在各種人類(lèi)惡性腫瘤中具有不同程度的表達(dá)。有研究報(bào)道存活素是腫瘤患者預(yù)后不良的重要指標(biāo)之一。本研究采用免疫組化法檢測(cè)惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達(dá)情況，分析二者在惡性淋巴瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2005年1月～2017年1月在我院行手術(shù)切除的惡性淋巴瘤患者58例，男38例、女20例，年齡(57.35±6.57)歲。均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)。HL 9例，NHL 49例；臨床分期按照AnnAr-bor標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ級(jí)20例，Ⅱ級(jí)13例，Ⅲ級(jí)16例，Ⅳ級(jí)9例。惡性度分級(jí)參照1993年“國(guó)際淋巴瘤預(yù)后指標(biāo)”。較低惡性程度淋巴瘤：Ⅰ級(jí)+Ⅱ級(jí)33例；較高惡性程度淋巴瘤：Ⅲ級(jí)+Ⅳ級(jí)25例。取手術(shù)切除的惡性淋巴瘤組織作為觀察組，另收集反應(yīng)增生性淋巴炎患者27例，取反應(yīng)增生性淋巴組織做為對(duì)照組。

1.2 nm23、Survivin蛋白檢測(cè)方法 采用免疫組化法。nm23抗體、Survivin抗體、免疫組化MaxvisionTM/HRP檢測(cè)試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。標(biāo)本遵照常例取材、固定、石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。石蠟切片脫蠟、水化，抗原EDTA熱修復(fù)，PBS沖洗，3.3%雙氧水孵育10 min，PBS沖洗。切片上滴加一抗，4 ℃過(guò)夜，PBS沖洗；滴加MaxvisionTM/HRP試劑，室溫孵育15 min，PBS沖洗。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸乙醇分化，PBS返藍(lán)，切片經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。以PBS替換一抗作為陰性空白對(duì)照，以邁新生物公司提供的陽(yáng)性對(duì)照切片作為陽(yáng)性對(duì)照。nm23陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)呈淡黃、棕黃或棕褐色顆粒，不著色或著色淺且不特異者為陰性。陽(yáng)性細(xì)胞比例<10%為低表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞比例≥10%為過(guò)表達(dá)。Survivin陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞核呈淡黃、棕黃或棕褐色顆粒，不著色或著色淺且不特異者為陰性。陽(yáng)性細(xì)胞比例<10%為低表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞比例≥10%為過(guò)表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)和Fisher確切概率法檢驗(yàn)。等級(jí)相關(guān)分析應(yīng)用非參數(shù)Spearman檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組nm23、Survivin蛋白表達(dá)比較 對(duì)照組中nm23蛋白低表達(dá)27例、過(guò)表達(dá)0例，觀察組中低表達(dá)34例、過(guò)表達(dá)24例，兩組nm23蛋白過(guò)表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.593，P<0.01)。對(duì)照組Survivin蛋白低表達(dá)21例、過(guò)表達(dá)6例，觀察組低表達(dá)23例、過(guò)表達(dá)35例，兩組Survivin蛋白過(guò)表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.724，P<0.01)。

2.2 惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 nm23蛋白過(guò)表達(dá)與患者性別、年齡、HL/NHL、免疫表型及乳酸脫氫酶(LDH)增高無(wú)明顯相關(guān)性(P均>0.05)，而與B組癥狀、臨床分期高、惡性程度高、結(jié)外累計(jì)部位數(shù)多有關(guān)(P均<0.05)。Survivin蛋白過(guò)表達(dá)與患者性別、年齡、結(jié)外累計(jì)部位數(shù)、B組癥狀、HL/NHL及免疫表型無(wú)明顯相關(guān)性(P均>0.05)，與臨床分期高、惡性程度高及LDH增高有關(guān)(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 惡性淋巴瘤組織中nm23、Survivin蛋白表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

2.3 惡性淋巴瘤組織中nm23蛋白與Survivin蛋白表達(dá)的相關(guān)性 58例惡性淋巴瘤中，nm23、Survivin蛋白均呈過(guò)表達(dá)19例，nm23過(guò)表達(dá)而Survivin呈低表達(dá)5例，nm23低表達(dá)而Survivin過(guò)表達(dá)16例，兩者均呈低表達(dá)18例。相關(guān)性分析顯示，nm23與Survivin蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(χ2=4.794，r=0.323，P<0.05)。

3 討論

惡性淋巴瘤是來(lái)源于淋巴造血系統(tǒng)細(xì)胞異常增殖、分化的惡性腫瘤。研究顯示，nm23基因在腫瘤細(xì)胞的增殖、分化及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中起著十分重要的作用,抑制nm23基因表達(dá)可逆轉(zhuǎn)分化耐受細(xì)胞對(duì)分化誘導(dǎo)劑的敏感性[5]。Survivin基因具有腫瘤特異性，其只表達(dá)于腫瘤和胚胎組織，與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[6]。這兩個(gè)基因均與惡性腫瘤的增殖分化和侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)，本研究就nm23、Survivin蛋白在惡性淋巴瘤的表達(dá)情況進(jìn)行分析，探討二者之間可能存在的關(guān)系。

nm23基因編碼蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中，擁有多種生物學(xué)功能，主要與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化和癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能緊密相關(guān)。在實(shí)體腫瘤組織(如乳腺癌、胃癌和黑素瘤等)中，nm23蛋白能有效抑制腫瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與植入[7～11]。有研究發(fā)現(xiàn)，在正常淋巴組織細(xì)胞的早期發(fā)育中，nm23蛋白表達(dá)明顯增加，可以有效抑制小鼠和人白血病細(xì)胞分化；當(dāng)nm23基因被沉默、抑制或者敲除后，可有效提高分化誘導(dǎo)劑對(duì)耐受細(xì)胞分化作用的敏感性[5]。nm23基因的表達(dá)在正常淋巴組織細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞增殖與分化中起著十分重要的作用[12]。造血細(xì)胞腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程與nm23基因的過(guò)表達(dá)密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，觀察組nm23蛋白過(guò)表達(dá)率高于對(duì)照組，nm23過(guò)表達(dá)與患者性別、年齡、HL/NHL、免疫表型及LDH增高無(wú)關(guān)，而與B組癥狀、Ann Arbor分期高、惡性程度高、結(jié)外累及部位數(shù)多有關(guān)。惡性淋巴瘤組織中nm23蛋白過(guò)表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，且其過(guò)表達(dá)率與淋巴瘤惡性程度呈正相關(guān)。提示惡性淋巴瘤組織中nm23基因表達(dá)增強(qiáng)，nm23基因表達(dá)蛋白增加。在惡性淋巴瘤細(xì)胞中，負(fù)責(zé)浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的多種原癌基因表達(dá)增強(qiáng)，然而，多種原癌基因的增強(qiáng)程度超過(guò)了腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23所能拮抗的最大強(qiáng)度或是拮抗的范圍，因此，腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23不能有效中止腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，從而導(dǎo)致了腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、播散。這些結(jié)果表明，nm23基因的過(guò)表達(dá)率可以在一定程度上反映出惡性淋巴瘤的惡性程度，對(duì)惡性淋巴瘤的診斷存在著一定的參考價(jià)值。已有研究[5，13]發(fā)現(xiàn)，nm23基因可以抑制造血系統(tǒng)腫瘤中腫瘤細(xì)胞的分化，nm23基因過(guò)表達(dá)水平與腫瘤惡性腫瘤呈正相關(guān)。Niistsu等[2]采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)惡性淋巴瘤患者nm23蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，隨著淋巴瘤惡性程度的升高，nm23蛋白表達(dá)明顯升高，而且與患者血清LDH水平、結(jié)外病變數(shù)量、臨床分期、有無(wú)伴隨臨床癥狀和年齡存在著顯著相關(guān)性。此外，Lee等[14]研究150例NHL患者時(shí)發(fā)現(xiàn)，nm23蛋白的過(guò)表達(dá)率隨腫瘤惡性程度的增加而增加。藍(lán)建平等[15]對(duì)107例淋巴瘤的研究也證實(shí)，惡性淋巴瘤組織中nm23蛋白表達(dá)水平高于正常淋巴結(jié)組織的對(duì)照組，nm23蛋白過(guò)表達(dá)水平與淋巴瘤惡性程度存在顯著相關(guān)性。

惡性腫瘤細(xì)胞存在一種典型、標(biāo)志的生物學(xué)行為是異常增強(qiáng)的細(xì)胞增殖、分裂能力。Survivin蛋白是參與細(xì)胞分裂、增殖的一種蛋白質(zhì)。已有研究[16]表明，Survivin蛋白的表達(dá)水平是推斷細(xì)胞惡性程度與增殖狀態(tài)的重要指標(biāo)之一。Survivin蛋白在惡性淋巴瘤中的陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核中。在反應(yīng)增生性淋巴結(jié)組織中Survivin蛋白呈低表達(dá)，而在惡性淋巴瘤中卻呈過(guò)表達(dá)。Survivin蛋白在反應(yīng)增生性淋巴結(jié)、惡性淋巴瘤組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Survivin的過(guò)表達(dá)與患者性別、年齡、結(jié)外累計(jì)部位數(shù)、B組癥狀、HL/NHL及免疫表型無(wú)相關(guān)性，與臨床分期高、惡性程度高及LDH增高有相關(guān)性。本研究表明，隨著惡性淋巴瘤惡化程度的增加，Survivin蛋白的表達(dá)水平逐漸升高，表明Survivin蛋白是評(píng)價(jià)惡性淋巴瘤細(xì)胞增殖、分裂的重要指標(biāo)，對(duì)惡性淋巴瘤的診斷有一定的參考價(jià)值。Survivin蛋白表達(dá)程度可為惡性淋巴瘤臨床分型、組織分級(jí)提供參考。相關(guān)性分析顯示，nm23與Survivin蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。

綜上所述，nm23蛋白與Survivin蛋白過(guò)表達(dá)與惡性淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程密切相關(guān)。二者在基因通路信號(hào)中是否存在協(xié)同作用及其機(jī)制尚不清楚，需要進(jìn)一步深入研究。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2017.42.031

R733

B

1002-266X(2017)42-0094-03

李紅(E-mail: 342517624@qq.com)

2017-06-02)