聯(lián)合檢測(cè)RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的應(yīng)用研究

洪雄新　胡潤(rùn)濤　尤美霞　陳輝雄

【摘要】 目的：研究類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）、抗角蛋白抗體（AKA）、抗環(huán)瓜氨酸（CCP）抗體、和抗RA33抗體四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）診斷中的價(jià)值。方法：收集50例RA患者（RA組）和62例非RA的自身免疫病患者（自免組）血清，同時(shí)選擇60例健康體檢者（對(duì)照組）作為研究對(duì)象，給予所有納入人群檢查RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果：RA組RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體的陽(yáng)性率均明顯高于自免組和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。四項(xiàng)指標(biāo)診斷RA的敏感性高低依次為抗CCP抗體>RF>AKA>抗RA33；特異性高低依次為抗RA33>AKA>抗CCP抗體>RF；四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)進(jìn)行平行診斷試驗(yàn)中敏感性高達(dá)96.0%，在系列診斷試驗(yàn)中特異性高達(dá)100%。結(jié)論：RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體四項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可極大提高特異性和敏感性，有利于提高RA患者的早期診斷，臨床上值得推廣使用。

【關(guān)鍵詞】 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎； 類(lèi)風(fēng)濕因子； 抗角蛋白抗體； 抗環(huán)瓜氨酸肽抗體； 抗RA33抗體

Diagnostic Value of Combined Detection of AKA Antibody，Anti CCP Antibody，Anti RA33 Antibody and RF for Rheumatoid Arthritis/HONG Xiong-xin，HU Run-tao，YOU Mei-xia，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（24）：021-024

【Abstract】 Objective：To study the value of rheumatoid factor （RF），anti keratin antibodies（AKA），anti cyclic citrullinated peptide （CCP） antibodies，and anti RA33 antibodies in the detection of rheumatoid arthritis （RA）.Method：50 patients with RA（RA group），62 patients with other autoimmune diseases （autoimmune disease group）and 60 healthy subjects （control group）under going physical examination were selected as the research subjects.The RF，AKA，anti CCP antibody and anti RA33 antibody were given to the population，and the test results were analyzed.Result：In RA group，the positive rate of RF，AKA，anti CCP antibody and anti RA33 antibody were obviously higher than those of autoimmune disease group and control group，the differences were statistically significant（P<0.01）.The sensitivity of four indicators for diagnosing RA was anti CCP antibody>RF>AKA>anti RA33；the specificity was anti RA33>AKA>anti CCP antibody>RF.In the parallel diagnostic test， the sensitivity of the four indicators in joint detection was as high as 96.0%，in the series of diagnostic tests，the specificity was as high as 100%.Conclusion：The combined detection of RF，AKA，CCP antibody and anti RA33 can significantly improve the specificity and sensitivity，to improve the early diagnosis of RA patients and should be promoted in clinical use.

【Key words】 Rheumatoid arthritis； Rheumatoid factor； Anti keratin antibody； Anti cyclic citndlinated pepfide antibody； Anti RA33 antibody

First-authors address：Shenzhen Longgang District Peoples Hospital，Shenzhen 518172，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.24.006

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種以炎性滑膜炎為主的自身免疫性疾病，其臨床主要表現(xiàn)為對(duì)稱(chēng)性的關(guān)節(jié)滑膜炎癥，可致軟骨破壞甚至侵蝕而造成關(guān)節(jié)強(qiáng)直畸形，嚴(yán)重時(shí)還可導(dǎo)致患者失去勞動(dòng)力和生活自理能力，是世界上導(dǎo)致殘疾的主要疾病之一[1-3]。及早診斷和治療可有效減少RA致殘率，本研究通過(guò)對(duì)RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體的測(cè)定，為臨床上早期診斷提供更為有價(jià)值的診斷方案。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1月-2016年12月深圳龍崗區(qū)人民醫(yī)院住院RA患者50例（RA組）作為研究對(duì)象，其中女38例，男12例，年齡23～76歲，平均（31.3±4.2）歲，所有患者均符合RA臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，另選取其他自身免疫性疾病患者62例（自免組），其中男11例，女51例，年齡21～82歲，平均（30.5±5.3）歲。同時(shí)選取本院同期體檢健康者60例作為對(duì)照組，其中男15例，女45例，年齡18～80歲，平均（28.4±6.9）歲，排除相關(guān)疾病。三組患者的性別、年齡比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑 類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）檢測(cè)采用BeckmanAU5810及其配套試劑，抗角蛋白抗體（AKA）檢測(cè)試劑盒產(chǎn)自北京和杰創(chuàng)新生物技術(shù)有限公司；抗環(huán)瓜氨酸（CCP）抗體采用德國(guó)AESKU公司的抗CCP抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒；抗RA33抗體是采用德國(guó)胡曼生化診斷有限責(zé)任公司的抗RA33抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒檢測(cè)。酶標(biāo)儀為安圖PHOMO全自動(dòng)酶標(biāo)儀（精度變異系數(shù)≤2%）。

1.3 方法 所有受試者均于清晨抽取空腹靜脈血5 mL，待血液凝固后以3000 r/min的速度，離心10 min，分離血清后-20 ℃保存待檢。所有操作均嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。RF檢測(cè)是采用免疫散射比濁法進(jìn)行定量分析。AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定（ELISA）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組的RF、AKA、抗CCP抗體、抗RA33抗體的陽(yáng)性表達(dá)情況比較 三組的RF、AKA、抗CCP抗體、抗RA33抗體的陽(yáng)性表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；四項(xiàng)指標(biāo)兩兩組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）

2.2 單獨(dú)檢測(cè)四項(xiàng)指標(biāo)對(duì)診斷RA的效能評(píng)價(jià) 在四項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)中，敏感性由高到低為抗CCP抗體>RF>AKA>抗RA33，分別為78.0%（39/50）、72.0%（36/50）、60.0%（30/50）、42.0%（21/50），特異性由高到低為抗RA33>AKA>抗CCP抗體>RF，分別為96.8%（60/62）、91.9%（57/62）、90.3%（56/62）、58.1%（36/62）；陰性預(yù)測(cè)值由高到低為抗CCP抗體>RF>AKA>抗RA33，分別為91.2%（114/125）、86.8%（92/106）、85.3%（116/136）、80.5%（120/149）；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值由高到低為抗RA33>AKA>抗CCP抗體>RF，分別為91.3%（21/23）、83.3%（30/36）、83.0%（39/47）、54.5%（36/66）；Youden指數(shù)（為敏感性+特異性-1）抗CCP抗體>AKA>抗RA33>RF，分別為0.68、0.52、0.39、0.30，見(jiàn)表2。

2.3 四項(xiàng)指標(biāo)平行試驗(yàn)相關(guān)性能診斷 四項(xiàng)指標(biāo)平行試驗(yàn)診斷結(jié)果顯示，敏感性由高到低為RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA，分別為96.0%（48/50）、88.0%（44/50）、82.0%（41/50）；特異性由高到低為RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體，分別為71.0%（44/62）、58.1%（36/62）、43.5%（27/62）；Youden指數(shù)由高到低為RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體，分別為0.53、0.46、0.40。

2.4 四項(xiàng)指標(biāo)系列試驗(yàn)相關(guān)性能診斷 四項(xiàng)指標(biāo)系列試驗(yàn)診斷結(jié)果顯示，敏感性由高到低為RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體，分別為76.0%（38/50）、56.0%（28/50）、40.0%（20/50）；特異性由高到低為RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA，分別為100%（62/62）、93.5%（58/62）、87.1%（54/62）；Youden指數(shù)由高到低為RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗體>RF+AKA+抗CCP抗體+抗RA33抗體，分別為0.63、0.50、0.40。見(jiàn)表4。

3 討論

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種以關(guān)節(jié)軟骨侵蝕為主的全身性自身免疫性疾病，隨著病情進(jìn)行性發(fā)展，會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形、功能喪失等情況出現(xiàn)，早期發(fā)現(xiàn)并診斷，對(duì)指導(dǎo)治療、改善病情和預(yù)后具有重要的臨床意義[4-6]。本研究通過(guò)檢測(cè)RA患者、非RA疾病患者與健康者血清中的RF、AKA、抗CCP抗體和抗RA33抗體四種指標(biāo)，對(duì)其在RA中的診斷價(jià)值進(jìn)行分析。

RF是抗人或動(dòng)物免疫球蛋白IgG的Fc段的抗體，RA患者體內(nèi)有產(chǎn)生RF的B細(xì)胞克隆，其在EB病毒或變性免疫球蛋白G（IgG）的直接作用下即可大量合成。RF是臨床診斷RA的主要血清學(xué)指標(biāo)，具有較高的敏感性，但其診斷特異性不高，在其他自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征等疾病，以及正常老年患者中均有較高的陽(yáng)性率[7-9]，給臨床診斷帶來(lái)一定的局限性。本研究中，RF對(duì)RA的敏感性為72.0%，特異性為58.1%，結(jié)果表明有必要通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)其他指標(biāo)來(lái)提高RA的診斷，以減少漏診和誤診。

AKA是在RA患者血清中發(fā)現(xiàn)的一種能與鼠食管中上段角質(zhì)層反應(yīng)的抗體，AKA對(duì)RA的診斷特異性較高，在疾病早期即可檢出[10-11]。有研究表明，該抗體水平變化還與疾病的活動(dòng)性與病情程度有一定的相關(guān)性[12]。在本研究中AKA的敏感度為60.0%，特異性為91.9%，與文獻(xiàn)[13-14]報(bào)道相符。從表2可見(jiàn)，RA組患者AKA顯著高于自免組和對(duì)照組，表明AKA對(duì)于診斷RA具有較高的價(jià)值。抗CCP抗體是含瓜氨酸氨基酸殘基的蛋白，為環(huán)狀聚絲蛋白的多肽片段，主要為IgG類(lèi)抗體，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，抗CCP抗體對(duì)RA診斷有很高的特異度及敏感度，是其較好的早期診斷標(biāo)志物[15]。有研究發(fā)現(xiàn)RA患者骨質(zhì)的破壞程度與抗CCP抗體的含量有關(guān)，抗CCP抗體產(chǎn)生越多，與RA密切相關(guān)的表位也越多，關(guān)節(jié)損害也越嚴(yán)重，抗CCP抗體陽(yáng)性的患者骨質(zhì)的侵蝕程度較抗體陰性者更為嚴(yán)重[16]。因此，通過(guò)檢測(cè)抗CCP抗體，可以給臨床治療和預(yù)后帶來(lái)極大的幫助。本研究中，抗CCP抗體的敏感性為78.0%，特異性為90.3%，可見(jiàn)抗CCP抗體的特異性高于RF，可見(jiàn)抗CCP抗體是RA診斷中的一個(gè)較理想的指標(biāo)。RA33是異質(zhì)性核糖核蛋白的核心蛋白A2，與分子量33KD的核酸蛋白發(fā)生反應(yīng)，因而定名為抗RA33抗體。抗RA33抗體在自身免疫病的患者也能檢出，這個(gè)有可能是因?yàn)楹秃嗅槍?duì)小核糖核蛋白體（snRNP）中的A2發(fā)生了交叉反應(yīng)。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)，抗RA33抗體的含量與RA病情的嚴(yán)重程度無(wú)關(guān)[17-18]，說(shuō)明抗體RA33有較高的穩(wěn)定性，對(duì)RA有較大的診斷意義。本研究中，抗RA33抗體的敏感性為42.0%，特異性為96.8%，其特異性在四項(xiàng)指標(biāo)中最高，但其敏感性最低，表明抗RA33抗體單項(xiàng)檢測(cè)用于診斷RA會(huì)有較多漏檢。endprint

在RA診斷的實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)中，單獨(dú)檢測(cè)以上各指標(biāo)在RA診斷中不能同時(shí)保證有較滿意的敏感性和特異性，也可能出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性，易給臨床診斷帶來(lái)誤診和漏診。為了提高診斷效率，可通過(guò)平行試驗(yàn)和系列試驗(yàn)來(lái)實(shí)現(xiàn)。平行試驗(yàn)也就是通常說(shuō)的并聯(lián)試驗(yàn)，是多個(gè)試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行，只要有一個(gè)陽(yáng)性就可判為平行試驗(yàn)陽(yáng)性，認(rèn)為疾病的證據(jù)存在，這樣可以提高敏感性，減少漏診。在本研究中，聯(lián)合檢測(cè)RF和AKA兩項(xiàng)，敏感性為80.2%，Youden指數(shù)0.53，聯(lián)合檢測(cè)RF、AKA和抗CCP抗體三項(xiàng)，敏感性上升到88.0%，通過(guò)四項(xiàng)指標(biāo)并聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)，敏感性可達(dá)96.0%。系列試驗(yàn)即通常說(shuō)的串聯(lián)試驗(yàn)，是多個(gè)試驗(yàn)相繼進(jìn)行，前一個(gè)試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性就接著做下一個(gè)試驗(yàn)，一旦出現(xiàn)陰性結(jié)果就可判為系列試驗(yàn)陰性，作為無(wú)病處理，終止試驗(yàn)，這樣可以提高特異度，減少誤診。在本研究中，聯(lián)合檢測(cè)RF和AKA兩項(xiàng)，特異性為87.1%，Youden指數(shù)為0.63，聯(lián)合檢測(cè)RF、AKA和抗CCP抗體三項(xiàng)，特異性上升到93.5%，通過(guò)四項(xiàng)指標(biāo)串聯(lián)聯(lián)合檢測(cè)，特異度高達(dá)100%。由此說(shuō)明，聯(lián)合檢測(cè)這四項(xiàng)指標(biāo)能有效減少漏診率和誤診率。

綜上所述，RF、AKA、抗CCP抗體、抗RA33抗體四種指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷RA具有較高的可靠性，臨床應(yīng)用價(jià)值較高，值得臨床推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2017-07-03） （本文編輯：張爽）endprint