TNFα基因-308A/G多態(tài)性與原發(fā)性腎病綜合征的相關(guān)性研究

項新 馮振偉 陸玲娜 何坤 施燕春

·論著·

TNFα基因-308A/G多態(tài)性與原發(fā)性腎病綜合征的相關(guān)性研究

項新 馮振偉 陸玲娜 何坤 施燕春

目的探討TNF-α基因-308A/G多態(tài)性與原發(fā)性腎病綜合征(primary nephrotic syndrome，PNS)臨床和病理的相關(guān)性。方法利用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析法來鑒定基因型，以檢測PNS患者和對照組TNF-α基因-308A/G多態(tài)性分布規(guī)律。收集一般臨床指標(biāo)和PNS患者的病理資料，檢測患者治療前血清TNF-α，進行病例對照研究與臨床病理資料分析。結(jié)果PNS患者和對照組均檢出A、G2種TNF-α-308A/G等位基因，3種組合基因型AA型、AG型、GG型。2種等位基因和3種基因型在2組分布頻率無顯著性差異(P>0.05)。PNS組患者的年齡、性別、血脂、白蛋白、尿素氮、血肌酐和C反應(yīng)蛋白水平中任何基因型的分布頻率無顯著性差異(P>0.05)，攜帶GG基因型的PNS患者的24h尿蛋白水平較AG和AA基因型明顯減少(P均<0.05)。攜帶AA基因型患者血清TNF-α水平較AG和GG基因型明顯升高(P均<0.05)。病理結(jié)果顯示：AA基因型在微小病變型腎病患者中有較高的出現(xiàn)頻率，與GG+AG基因型比較有顯著性差異(P<0.05)。GG基因型和G等位基因的PNS患者治療有效率明顯高于其他基因型(P均<0.05)。結(jié)論TNF-α-308A/G基因多態(tài)性能影響血清TNF-α水平，可能與微小病變型腎病的發(fā)病、較重的蛋白尿及激素療效相關(guān), 但與PNS的發(fā)病易感性不相關(guān)。

腫瘤壞死因子α；原發(fā)性腎病綜合征；基因多態(tài)性

資料與方法

一、研究對象與分組

選擇2014年1月至2016年12月期間在廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院腎內(nèi)科住院的PNS患者共75例，符合腎病綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)：24h尿蛋白>3.5 g/d，血清蛋白<30 g/L。排除標(biāo)準(zhǔn)：①所有繼發(fā)型腎病綜合征患者；②合并感染者，包括全身或局部的真菌、細菌、支原體等感染；③惡性腫瘤患者，包括各種血液病和實體瘤；④存在組織或器官損傷者，包括近期有創(chuàng)傷、燒傷、手術(shù)、心肌梗死等病史；⑤輸注白蛋白或血漿等影響血清蛋白濃度者；⑥患自身免疫性疾病者，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。PNS患者設(shè)為PNS組，所有病例均行腎穿刺活檢，且在入院前2周內(nèi)沒有應(yīng)用激素類藥物，其中女30例，男45例，年齡18～69歲，平均年齡(36.9±11.3)歲。75例PNS患者病理類型：微小病變型腎病9例，系膜增生性腎小球腎炎21例，局灶性節(jié)段性腎小球硬化15例，膜增生性腎小球腎炎12例，膜性腎病18例。對照組共40例，選自廣西醫(yī)科大學(xué)附屬民族醫(yī)院健康體檢者，女16例，男24例，年齡17～65歲，平均年齡(38.4±8.9)歲。2組年齡、性別比較無顯著性差異(P>0.05)，有可比性。本研究方案獲得了醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)，所有入選患者均簽署知情同意書。

二、方法

1.提取基因組DNA 抽取外周抗凝血5 ml，嚴(yán)格按照DAN提取試劑盒說明書提取。

2.TNF-α基因-308A/G基因型的鑒定 引物設(shè)計與合成：在NCBI的Gene數(shù)據(jù)庫中找到TNF-α基因序列并使用其在線引物設(shè)計功能設(shè)計引物，上游引物序列5‘-AAGCCCCTCCCAGTTCTAGT -3’,下游引物序列5‘- TGGTGGAGAAACCCATGAGC -3’。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)條件：94℃預(yù)變性5 min；再按下列程序循環(huán)35次，即94℃變性1 min，53℃退火1 min，72℃延伸1 min；末次循……