基于3′/5′端表達不平衡策略的熒光定量PCR法檢測非小細胞肺癌患者血漿游離循環(huán)RNA中ALK融合基因*

童永清，顧劍，鄭紅云，劉航，李鋒，李艷

(武漢大學人民醫(yī)院檢驗醫(yī)學中心，武漢 430060)

·液體活檢與臨床實驗研究·

基于3′/5′端表達不平衡策略的熒光定量PCR法檢測非小細胞肺癌患者血漿游離循環(huán)RNA中ALK融合基因*

童永清，顧劍，鄭紅云，劉航，李鋒，李艷

(武漢大學人民醫(yī)院檢驗醫(yī)學中心，武漢 430060)

目的 分析非小細胞肺癌(NSCLC)患者血漿游離循環(huán)RNA(cfRNA)中的ALK融合基因的表達水平，為指導臨床個體化用藥提供依據(jù)。方法 選取經(jīng)高通量測序驗證的已知ALK融合基因的NSCLC患者13例、ALK融合基因陰性的NSCLC患者16例和30例體檢健康者，采集各組血液樣本并分離血漿cfRNA，用熒光定量PCR檢測各組ALK基因3′端第20外顯子(E20)和5′端3外顯子(E3)的表達量，并計算ALK融合基因的表達水平。結果 已知ALK融合基因的NSCLC患者、ALK融合基因陰性的NSCLC患者和體檢健康者血漿cfRNA中ALK融合基因表達水平分別為278.3(45.3，987.4)，4.08(0.38，9.04)，3.77(0.34，8.37)，各組間差異有統(tǒng)計學意義(H=29.93,P<0.01)；組間兩兩比較結果表明，已知ALK融合基因的NSCLC患者血漿中ALK融合基因的表達水平高于ALK融合基因陰性的NSCLC患者或體檢健康者(U分別為0，0，P均<0.01)，而后兩組間差異無統(tǒng)計學意義(U=232,P=0.86)。結論 基于3′/5′端表達不平衡策略的熒光定量PCR法可以快速檢測NSCLC患者血漿cfRNA中ALK融合基因。

非小細胞肺癌；血漿游離循環(huán)RNA；融合基因；4-間變淋巴瘤激酶

非小細胞肺癌(NSCLC)患者存在多種ALK融合基因，如EML4-ALK、KIF5B-ALK、KLC1-ALK和BIRC6-ALK等[1]。新的ALK融合基因如BCL11A-ALK等也相繼被發(fā)現(xiàn)，為中晚期NSCLC患者使用克唑替尼或色瑞替尼等靶向治療藥物提供了有效的分子依據(jù)[2]。目前ALK融合基因的檢測標本多為手術切除的腫瘤組織、活檢組織或惡性胸水等，但晚期或經(jīng)放化療治療的NSCLC患者往往無法獲得上述組織標本，造成ALK融合基因的檢測困難。本研究擬建立基于3′/5′端表達不平衡策略的熒光定量PCR法檢測NSCLC患者血漿游離循環(huán)RNA(cfRNA)中ALK融合基因，可以避免因組織標本難以獲得而導致熒光原位雜交(FISH)或逆轉錄定量PCR(qRT-PCR)等等造成檢測失敗[3]，為NSCLC患者靶向治療提供實驗依據(jù)。……