Rh（D）陰性冰凍解凍去甘油紅細胞的質量分析及產科應用

朱仕清+危燕芬

【摘要】 目的 分析本站冰凍解凍去甘油紅細胞質量及臨床應用療效。方法 采用ACP125全自動血細胞處理儀對48袋（96 U）Rh（D）陰性冰凍紅細胞進行去甘油化和復蘇洗滌， 使用前檢測血紅蛋白含量、甘油殘留量及游離血紅蛋白含量等指標， 檢測32例產婦輸注前后血紅蛋白（Hb）、紅細胞比容（Hct）、總膽紅素（TB）、直接膽紅素（DB）和尿膽原（UBG）水平， 評估臨床療效。結果 48袋（96 U）冰凍解凍去甘油紅細胞各項質控指標均達到GB18469-2012《全血及成分血的質量要求》。32例產婦輸注后， 均達到滿意的療效， 無輸血不良反應的發生。輸注后Hb為（86±3.2）g/L、Hct為（35.0±1.8）%， 均高于輸注前的（72±2.5）g/L、（27.5±1.1）%， 比較差異具有統計學意義（P<0.05）；而輸注前后TB和DB比較差異無統計學意義（P>0.05）；輸注前后UBG均為陰性。結論 ACP125全自動血細胞處理儀制備冰凍解凍去甘油紅細胞質量合格， 可以用于Rh（D）陰性患者的臨床輸血。

【關鍵詞】 Rh（D）陰性冰凍解凍去甘油紅細胞；質量控制；應用療效

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.22.052

目前， 國際輸血協會確認的血型系統有33種， 其中， Rh血型是除了ABO血型系統外最重要的血型系統， 但我國Rh（D）陰性人群比例僅約為0.4%。故此， 血站該血液庫存很少。當有Rh（D）陰性患者急救大量用血時， 難以在短時間內招募Rh（D）陰性獻血者， 影響了患者的救治。但同時由于采集時機與臨床需求對應不上而造成血源的浪費。自1970年Meryman等將甘油保存紅細胞技術應用于人體輸血后， 冷凍血液在臨床輸血治療中開始得到推廣應用[1]， Rh（D）陰性患者用血問題逐步得到了解決。本站自2013年開展該項技術， 制備的Rh（D）陰性紅細胞大部分在醫院的產科中使用。現將2015年1月～2016年12月在花都區婦幼保健院產科中使用的48袋（96 U）Rh（D）陰性冰凍解凍去甘油紅細胞質量控制及應用療效報告如下。

1 材料與方法

1. 1 血液來源 選取符合GB18467-2011《獻血者健康檢查要求》[2]， 從日常采集并經血型血清學檢測確定為Rh（D）陰性的合格血液， 確認方法按《全國臨床檢驗操作規范》[3]進行操作。在（4±2）℃的血液專用保存箱中保存6 d內的全血（CPD-A保養液）或懸浮紅細胞（MAP紅細胞添加劑）。

1. 2 病例來源 通過查閱2015年1月～2016年12月在花都區婦幼保健院產科中收住院的32例輸注Rh（D）陰性冰凍解凍去甘油紅細胞產婦的病歷， 對有關輸血資料和數據進行統計分析。產婦平均年齡31歲， 其中輸注A型9例， B型8例， O型13例， AB型2例。全部治愈出院。

1. 3 設備及材料 ACP125全自動血細胞處理儀、KR-4I大容量冷凍離心機、無菌接管機（費森尤斯）、三洋-80℃超低溫血液保存箱、恒溫水浴箱、Kx-21全自動血細胞分析儀、CS-600A 全自動生化分析儀、全自動細菌培養儀、SE-260熱合機、225型加甘油耗材、235型去甘油耗材、PVC血液轉移袋（四川南格爾）、57.1%甘油、9%氯化鈉（NaCl）、0.9%NaCl。

1. 4 制備方法

1. 4. 1 冰凍紅細胞制備方法 全血或懸浮紅細胞經離心[溫度（4±2）℃， 離心力4036 g， 時間8 min]制備成濃縮紅細胞， 將濃縮紅細胞通過無菌接管機轉移到800 ml空袋中， 與 225型加甘油耗材連接。利用ACP125全自動血細胞處理儀自動甘油化。加甘油完畢在室溫靜置30 min后離心[溫度（22±2）℃， 離心力2516 g， 時間8 min]， 移除上清液后熱合， 將制備好的冰凍紅細胞裝入盒子置于-80℃超低溫血液保存箱中保存。

1. 4. 2 冰凍紅細胞復蘇洗滌方法 將冰凍紅細胞置于已預溫37～42℃的振蕩水浴箱中5 min內溶解完畢， 計算出紅細胞的凈重量。將235型去甘油耗材通過無菌接管機與冰凍紅細胞連接。開啟ACP125全自動血細胞處理儀， 安裝去甘油耗材后自動完成紅細胞的復蘇及洗滌程序。洗滌完畢后熱合成品袋及配血標本。在電子天平上稱重， 記錄復蘇后紅細胞的重量。

1. 4. 3 質控標本的留取方法 洗滌完成后， 從血細胞處理儀上取下成品袋， 輕輕搖勻。將血液順著管道回流至遠端分叉處， 熱合分離管道末端， 再將充滿血液的管道熱合成兩段， 遠端保留一段≥20 cm的管道作為質控標本。

1. 5 冰凍解凍去甘油紅細胞血液質量的檢測 用全自動血細胞分析儀檢測Hb含量、白細胞計數；鄰聯甲苯胺法檢測游離Hb；過碘酸鈉法檢測甘油殘留量；全自動細菌培養儀作細菌培養。

1. 6 觀察指標 Rh（D）陰性產婦產前Hb<70 g/L， 或產前雖達不到輸注的要求， 但合并有胎位不正、前置胎盤、胎盤早剝或先兆子癇等異常情況， 分娩前備血；分娩時或產后大量失血， 失血量超過自身血容量的20%～30%的急救用血。使用Kx-21全自動血細胞分析儀作Hb和Hct的測定；使用全自動生化分析儀作血清TB和DB的測定；使用尿液分析儀作UBG的測定。

1. 7 統計學方法 采用SPSS21.0統計學軟件對數據進行處理。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2. 1 48袋（96 U）冰凍解凍去甘油紅細胞各項質控指標均達到GB18469-2012《全血及成分血的質量要求》[4]。見表1。

2. 2 32例產婦輸注后均達到滿意的療效， 無輸血不良反應的發生。輸注前后Hb、Hct比較差異具有統計學意義（P<0.05）；而輸注前后TB和DB比較差異無統計學意義（P>0.05）；輸注前后UBG均為陰性。見表2。endprint

3 討論

隨著輸血技術的快速發展， 臨床對Rh（D）陰性血的需求量日益增加， 如何保障Rh（D）陰性等稀有血型血液的供應， 為臨床急救診療縮短時間是臨床急需解決的問題。特別是事故搶救和產婦大出血， 短時間內需求的血量較多[5]。如不及時輸血， 將嚴重威脅患者、產婦或胎兒的生命。開展冰凍紅細胞制備技術， 使Rh（D）陰性紅細胞超低溫甘油化冰凍保存， 可大幅度延長紅細胞在體外存活時間， 為儲備稀有血型應急血液提供了條件。

本文研究可知， 使用ACP125全自動血細胞處理儀制備冰凍解凍去甘油紅細胞， 其制品質量明顯高于國家標準《全血及成分血的質量要求》。稀有血型血液在采集后甘油化深低溫保存備用， 使用時冰凍血液從復蘇到洗滌結束， 僅需約1 h。主要是冰凍紅細胞洗滌的程序簡化， 也能使紅細胞體積縮小而縮短凍成和解凍時間。解凍后紅細胞的2， 3-二磷酸甘油酸（2， 3-DPG）水平與冰凍前區別不大， 紅細胞雖有輕微變形， 但不影響攜氧功能。同時， 同種異體冰凍紅細胞在制備時白細胞、血小板、抗凝劑、細胞外鉀離子、游離Hb等物質因多次洗滌幾乎被洗去， 減少了因輸注異體血引起的輸血免疫反應及白細胞相關病毒傳播的發生率， 也減少了輸血免疫抑制[6]， 即使大量輸注也不易產生酸中毒和高鉀血癥， 也可防止免疫球蛋白A（IgA）缺乏的患者因輸入含有IgA抗體的血液而發生過敏反應， 提高了輸血的安全性。

本文研究顯示， 32例產婦輸注Rh（D）陰性冰凍解凍去甘油紅細胞后， Hb及Hct能達到理論值：60 kg體重的成人每輸入1單位全血約可提高血紅蛋白5 g/L[7]， 而 TB、DB 及UBG與輸注前沒明顯變化， 證明冰凍解凍去甘油紅細胞復蘇洗滌后紅細胞質量保證， 輸注后未發生溶血等輸血不良反應。

目前， 紅細胞的冰凍保存是現代輸血中唯一能長期保存紅細胞的方法， 可以使紅細胞有效保存10年[8]。開展冰凍解凍去甘油紅細胞制備技術， 不僅避免寶貴血液資源的浪費， 更重要的是為稀有血型患者的輸血提供了方便， 為搶救贏得了時間， 也為臨床提供了更符合國家質量標準的血液產品， 更有效地保障了臨床用血的安全。

參考文獻

[1] 馬慶. 深低溫長期保存紅細胞的效果評價. 中國輸血雜志， 2012， 25（9）：837-840.

[2] 王宇驍， 王濤， 王宇航. 《獻血者健康檢查要求》（GB18467-2011）在日常工作中的心得體會. 中國輸血雜志， 2012， 25（s1）：31.

[3] 葉應嫵， 王毓三， 申子瑜， 等. 全國臨床檢驗操作規程. 第3版. 南京：東南大學出版社， 2006：249-250.

[4] 周靜宇. 全血及成分血質量要求和臨床輸血技術規范的差異. 臨床血液學雜志：輸血與檢驗， 2013（2）：265-266.

[5] 唐秋民， 莫秋紅， 申衛東， 等. 稀有血型血液冷凍血庫的建立及臨床意義. 廣西醫學， 2008， 30（9）：1400-1401.

[6] 沈武， 陸瑤， 徐雪瑾， 等. 溫度對冰凍紅細胞保存的影響. 臨床輸血與檢驗， 2005， 7（2）：105-106.

[7] 胡麗華， 王學鋒， 閻石， 等. 臨床輸血學檢驗技術（臨床輸血部分）. 北京：人民衛生出版社， 2015：113.

[8] 魏亞明， 劉景漢， 蘭炯采， 等. 基礎輸血學. 北京：人民衛生出版社， 2011：458-463.

[收稿日期：2017-03-27]endprint