兩種不同原理檢測方法測定血清降鈣素原的結果比對評估

鄧海云　肖鴿飛　李樺　廖燕潔　梁燕霞

【摘要】 目的 以VIDAS Brahms雙抗體免疫熒光法檢測降鈣素原（PCT）結果作為參照， 對Wondfo干式熒光免疫層析法測定PCT結果進行評估。方法 收集72例患者的血清標本， 以雙盲方式對上述標本分別采用VIDAS和Wondfo儀器進行PCT定量檢測， 再通過統計學分析評估兩種方法測定PCT的一致性。結果 兩種設備檢測的PCT結果高度相關（r=0.987， P<0.01）；回歸方程：Y=1.069X-0.021， F檢驗顯示回歸方程差異有統計學意義（P<0.05）；對回歸方程的兩個系數進行t檢驗顯示， 截距（b）則反之差異無統計學意義（P=0.768>0.05）， 而斜率（a）比較差異有統計學意義（P<0.05）。PCT在定值0.23 ng/ml和0.50 ng/ml時的系統誤差（SE%）分別為6.90%和2.70%。結論 兩種方法檢測PCT結果具有高度的相關性， 但二者存在一定的比例誤差， Wondfo干式熒光免疫層析法檢測PCT可以用于臨床病情及療效監控。

【關鍵詞】 降鈣素原；系統誤差；相關性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.23.015

Comparison and evaluation of the results of two different methods for the determination of serum procalcitonin DENG Hai-yun， XIAO Ge-fei， LI Ye， et al. Department of Clinical Laboratory， Zhuhai City Maternal and Child Health Care Hospital， Zhuhai 519001， China

【Abstract】 Objective To evaluate procalcitonin （PCT） results determined by Wondfo dry fluorescent immunochromatography， with PCT results determined by VIDAS Brahms double antibody immunofluorescence method as a reference. Methods Serum specimens were collected from 72 patients and their PCT was quantitatively detected by VIDAS and Wondfo devices in a double-blind manner. Statistical analysis was used to assess the consistency of the two methods for the determination of PCT. Results The PCT results of the two devices were highly correlated （r=0.987， P<0.01）； regression equation： Y=1.069X-0.021， F test showed that there was statistically significant difference in regression equation （P<0.05）. The t test of the two coefficients of the regression equation showed that there was no statistically significant difference in the intercept （b） （P=0.768>0.05）， while there was statistically significant difference in slope （a） （P=0.000<0.05）. The systematic errors （SE%） of PCT at 0.23 ng/ml and 0.50 ng/ml were respectively 6.90% and 2.70%. Conclusion The PCT results of the two devices are highly correlated， but there is a certain proportion of systematic errors. Wondfo dry fluorescent immunochromatography for determination of PCT can be used for clinical disease and efficacy monitoring.

【Key words】 Procalcitonin； Systematic errors； Correlation

降鈣素原（procalcitonin， PCT）是降鈣素（calcitonin， CT）的激素原， 為甲狀腺C細胞分泌所產生。正常生理狀況下， 血清PCT水平低到幾乎檢測不到（<0.1 ng/ml）。而在細菌感染尤其是在膿毒癥、休克等全身炎癥反應綜合征的情況時， 血清PCT水平會顯著升高。作為細菌性感染非特異的炎癥敏感指標， PCT在臨床上得到了廣泛應用[1， 2]。目前， 檢測PCT的國產設備及試劑大量涌現， 良莠不齊， 檢測結果的溯源性有待完善， 其正確度能否滿足臨床的要求成為人們關注的焦點。本文以VIDAS Brahms PCT檢測結果作為參照， 評價國產萬孚（Wondfo）PCT檢測方法的相關性及偏倚， 從而判斷Wondfo PCT檢測結果應用于臨床的適宜性。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取72例2015年6月～2016年6月就診于珠海市婦幼保健院的患者， 分別患新生兒肺炎、化膿性扁桃體炎、急性支氣管肺炎、感染性腹瀉、膿毒血癥等炎性疾病。收集患者的高、中、低值的新鮮血清標本72例。

1. 2 儀器與試劑 萬孚飛測全自動干式熒光免疫分析儀FS-301及其配套的特定干式試劑（批號21010907）；法國梅里埃VIDAS免疫熒光分析儀及其配套Brahms PCT試劑（批號1004914100）。

1. 3 測定方法 PCT檢測試驗開始前， 檢驗人員應該熟悉比對試驗方案， 接受廠家工程師培訓， 熟練操作儀器并能進行保養和故障排除。在內部質量控制（IQC）或外部質量控制（EQC）均在控的情況下， 嚴格按照標準操作程序（SOP）文件操作， 采用雙盲方式分別采用VIDAS Brahms雙抗體免疫熒光法和Wondfo干式熒光免疫層析法進行PCT定量檢測。主要方法為：采用干式熒光免疫層析的方法（A組）， 待測物與熒光標記抗體形成免疫復合物， 經過層析， 分別固定在檢測區和質控區。LED藍光激發熒光免疫復合物上的熒光物質發光， 光波被信號收集并轉化為電信號， 通過電信號的強弱計算出待測樣品中PCT的濃度。應用雙抗體夾心熒光免疫法（B組），

形成固相抗PCT抗體-PCT抗原-PCT熒光抗體結合物， 所測得的熒光與標本中PCT抗原的濃度呈正比。計算相關系數r≥0.975為線性相關良好；計算斜率， 截距， 建立直線回歸方程， 對兩種方法的系統誤差進行t檢驗， 判斷系統的可接受性[3]。根據臨床使用要求， 將給定的醫學決定水平濃度Xc（0.5 ng/ml[4]）代入回歸方程， 計算參考方法（Y）與對比方法（X）之間的SE%。SE=|Yc - Xc|， SE%=（SE/Xc）×100%。參照廠家試劑使用說明書， SE%小于T±20%作為臨床可接受標準。

1. 4 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。相關性分析采用Pearson相關性分析和直線回歸分析。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 測定結果中最高值為25.51 ng/ml， 最低值為<0.05 ng/ml。

A組和B組進行配對t檢驗， 差異無統計學意義（P=0.342>0.05）。

2. 2 離群點的檢查以（B組檢測值-A組檢測值）為Y軸， B組檢測值為X軸做偏倚圖。見圖1。 可能存在離群點， 以相對偏倚差均值的4倍（0.472）為可接受限， 故在B組檢測值為0.05 ng/ml， A組檢測值為0.14 ng/ml為離群點（相對偏倚差為0.474>0.472）， 從數據組中剔除此數值。

圖1 兩種方法結果差值與參比方法均值的偏倚圖

2. 3 相關性分析以B組檢測值為X軸， A組檢測值為Y軸做散點圖。見圖2。經Pearson相關性分析， A、B兩組數據呈顯著性正相關（r=0.987， P<0.01）；經回歸分析可得：Y=1.069X-0.021（F=2661.186， P<0.05）；對回歸方程的兩個系數進行t檢驗， t（b）=-0.296， t（a）=51.587， P（b）=0.768>0.05， P（a）=0.000<0.05。

圖2 兩種方法比較的散點圖

2. 4 臨床可接受性能評價取兩個點0.23 ng/ml（<0.5 ng/ml）、

0.5 ng/ml分別代入線性回歸方程， 最終計算出SE%=6.90%、2.70%， 均<20%。

3 討論

臨床上細菌感染性疾病極為常見， 而病原學診斷耗時長， 在微生物血培養結果出來前臨床上已盲目地使用抗菌藥物， 造成了抗菌藥物的濫用， 也加重了患者經濟負擔。盡快找到快捷、有效的實驗方法對細菌感染性疾病進行診斷及鑒別診斷， 并準確評價細菌感染性疾病的發生、發展， 有著非常重要的臨床應用價值[5]， 尤其對于婦幼特殊人群。

本文采用SPSS18.0統計軟件Pearson相關性檢驗顯示：VIDAS Brahms雙抗體免疫熒光法和Wondfo 干式熒光免疫層析法檢測PCT結果具有的高度相關性（r=0.987， P<0.01）， 說明試驗數據分布合理、隨機誤差可以接受。從散點圖和偏倚圖中剔除離群值后， 兩種方法檢測的PCT結果表現出較好的線性， 回歸方程為：Y=1.069X-0.021。但回歸系數的t檢驗表明：截距比較差異無統計學意義（P>0.05）， 而斜率比較差異有統計學意義（P<0.05）， 說明兩種方法間存在一定的比例誤差， 因此要設法找出誤差的變化規律， 用修正公式或修正曲線對測量結果進行修正， 以用于臨床病情及療效監控。

據調查， 目前國內三級甲等以上醫院的臨床實驗室已經普及了自動化儀器， 其中進口設備以及試劑所占比例超過 95%， 基本上處于壟斷地位， 國產全自動免疫系統處于發展期[6]。

目前臨床上PCT的試劑大多為進口儀器及其配套試劑盒， 試劑和耗材價格昂貴， 儀器維護成本高， 依賴性過強， 增加了患者的經濟和精神上的負擔。然而， 有報告指出， 檢測設備方法為免疫層析法， 免疫層析膠體金技術無法直接實現定量和半定量， 而是通過反應著色的比較間接定量有其不足[7]。

但無可厚非的是， 與VIDAS Brahms雙抗體免疫熒光法相比， 熒光免疫層析法檢測PCT無需昂貴的設備且操作簡單、快速和價廉 [8]。Wondfo PCT檢測系統屬于及時檢測（POCT）系統， 具有方便放置、標本用量少、檢測快捷等優點， 在一定程度上保證了急診患者的快速定量檢測， 提高了服務質量和降低了醫療費用[9]。因此， 在POCT免疫層析法測定PCT在投入檢測前必須按照EP15-A2進行精密度驗證試驗， 確定其通過精密度驗證后再根據EP9進行后續系統性的方法比對實驗， 并進行相關調整[10]， 以滿足臨床需求。

總之， 兩種方法檢測PCT結果具有高度的相關性， 但二者存在一定的比例誤差。Wondfo干式熒光免疫層析法檢測PCT可以用于臨床病情及療效監控。

參考文獻

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[收稿日期：2017-04-17]