MiR-218通過抑制Robo1的表達(dá)影響肺癌細(xì)胞遷移侵襲

陳平 趙云龍 李英杰

肺癌是死亡率最高的癌癥之一，肺癌分為非小細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞肺癌，其中80%屬于非小細(xì)胞肺癌[1]。肺腺癌屬于非小細(xì)胞肺癌，其侵襲和轉(zhuǎn)移是一個多步驟、多基因參與的復(fù)雜過程，在這一過程中有大量的基因發(fā)生改變。盡管早期診斷技術(shù)有了很大的發(fā)展，放化療技術(shù)不斷的進(jìn)步，但肺癌的5年生存率仍然很低[2]。MicroRNA（miRNA）是一類非編碼小RNA，長度大約為22個核苷酸左右，越來越多的研究證明miRNA與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展存在著密切的相關(guān)性[3]。近年研究發(fā)現(xiàn)miR-218能在多種腫瘤中表達(dá)，包括肺癌、膀胱癌、鼻咽癌等，且發(fā)揮著癌基因或者抑癌基因的作用[4-6]，但其作用機(jī)制尚未清楚。因此，本實驗研究miR-218的功能，尋找它的靶點，探究其在肺癌中的作用機(jī)制，以期為肺癌的治療提供新的靶點和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年6月-2016年6月解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院手術(shù)切除的15例肺腺癌組織及其相應(yīng)的癌旁組織標(biāo)本，年齡為32歲-77歲，中位年齡為53歲。按腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移（tumor-node-metastasis, TNM）分期，I期4例，II期5例，III期6例。所有患者手術(shù)前均未接受放療、化療及內(nèi)分泌治療。所有患者均己簽署知情同意書，手術(shù)切除部分組織用于浸泡福爾馬林中用于組織切片鑒定，其余組織馬上放入液氮中存儲待用。

1.2 試劑 肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、NCI-H1299、Calu-3、NCI-H2228、NCI-H1975、HCC4006、NCI-H23、NCI-H1435均購于ATCC，DMEM培養(yǎng)液購自Gibic公司，miR-218的抑制物（Anti-miR-218）和對照組（Negative control）；Robo-siRNA及對照組干擾片段均由上海吉瑪有限公司合成。轉(zhuǎn)染試劑Lipfectmine 2000購于Invitrogen公司，兔源性的一抗Robo1、E-cadherin、N-cadherin、鼠源性的一抗GAPDH抗體購自Santa Cruz公司，二抗均購自北京中杉金橋公司；……