Nm23-H1核內定位對人肺腺癌A549細胞增殖的影響

盛亞 熊艷麗 許明芳 況勛杰 王東 楊雪琴

腫瘤轉移抑制基因Nm23-H1是第一個被分離鑒定出的與腫瘤轉移相關的抑制基因。大量的基礎研究表明，Nm23-H1能夠逆轉包括肺癌在內的多種惡性腫瘤的轉移潛能。因此理論上其表達的高低與肺癌患者的預后應該成正相關。但越來越多的臨床研究發現，Nm23-H1在肺癌的高表達并不都提示好的預后[1]。甚至有研究[2]發現其在鱗癌的表達反而與預后負相關。張志敏等[3]通過免疫組化研究發現在30例手術切除肺癌標本中，24例標本Nm23-H1的表達都以胞漿表達為主，但有6例標本存在Nm23-H1的胞核表達，而這6例患者均較早的出現局部復發或遠處轉移。同樣在Kim等[4]的研究中也發現在頭頸部鱗癌中，20%的患者存在Nm23-H1的胞核表達，而核高表達的Nm23-H1與較差的預后（OR=7.48）以及疾病的早期復發（OR=3.02）相關，這提示Nm23-H1除具有抑制腫瘤轉移的抑癌基因特性外，可能還具有癌基因潛能，而這兩種特性可能與Nm23-H1在胞漿胞核不同的定位有關。現有的基礎研究均以過表達或抑制胞漿Nm23-H1為研究手段，研究結果并不能真實反映或重復臨床中Nm23-H1以胞核定位為主細胞的實際生物學效應。因此，本研究構建了核內定向表達載體pLentis-CMV-NME1-IRES2-PURO，轉染人肺腺癌A549細胞后觀察細胞增殖變化，以期探討胞核Nm23-H1對肺癌細胞增殖的影響。

1 材料和方法

1.1 主要材料與試劑 人肺腺癌A549細胞株由第三軍醫大學大坪醫院野戰外科研究所腫瘤中心保存并傳代培養；大腸桿菌E. coli DH5α、293FT細胞由本實驗室保存；DMEM培養基、小牛血清購自Gibco公司，胎牛血清購自Life Technologies公司；……