SOX4對非小細胞肺癌細胞A549的順鉑耐藥作用的影響

李維 劉旭 張國倩 張琳琳

肺癌是近年來全球范圍內發病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率近年來也明顯上升[1,2]。肺癌中約85%為非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）[3]，其發病率在肺癌中居首位[4]，患者5年內生存率不足15%[5]。以順鉑（DDP）為主的聯合化療是目前治療晚期NSCLC的標準方案，但目前部分患者對順鉑耐受是導致化療失敗的主要原因[6]。因此，對順鉑耐藥的分子機制的研究對NSCLC的防治和提高療效具有深遠意義。SOX4是轉錄調控分子家族SOX重要成員，研究表明，SOX4在多種腫瘤的發生發展過程中發揮著重要的作用,機制之一可能是其通過調控β-catenin的表達對Wnt信號通路進行調控[7]，而β-catenin在NSCLC細胞對順鉑的耐受中起著重要作用[8]。因此，本研究旨在研究SOX4對小細胞肺癌細胞A549的順鉑耐藥作用及其分子機制。

1 材料與方法

1.1 材料 1640培養基、小牛血清購于美國HyClone公司。順鉑（DDP）為齊魯制藥廠生產。SOX4的siRNA購自QIAGEN公司。SOX4、β-catenin和Survivin抗體購自Abcam公司。免疫印跡化學發光系統購自Syngene公司。MTT購自Sigma公司。Trizol、SYBR和Lipo2000購自美國Invitrogen公司。RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit購自加拿大Fermentas公司。肺癌細胞株A549由本實驗室保存。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養 肺癌細胞A549培養于含10%FBS的1640培養基中，培養液含青霉素/鏈霉素100 U/mL，將細胞置于37oC、5%CO2培養箱中培養。

1.2.2 體外誘導法建立順鉑耐藥的肺癌細胞株A549/DDP對數生長期A549細胞在含有0.1 μM順鉑的1640培養基培養4周后，將細胞消化傳代用正常培養基培養，待細胞貼壁后，將順鉑濃度提高至0.2 μM，培養4周；再依次將藥物濃度提高到0.4 μM、0.6 μM、0.8 μM、1 μM……2 μM培養。在2 μM濃度下維持培養，初步得到A549/DDP細胞。

1.2.3 A549細胞與耐藥A549/DDP細胞細胞