焦磷酸測序快速檢測3種海洋性弧菌的方法學建立及創(chuàng)傷弧菌16S rRNA基因分型的研究

張麗娜，鄭妍，胡成進，周月霞，陳英劍

(1.濟南軍區(qū)總醫(yī)院實驗診斷科，濟南 250031；2.青島慧康醫(yī)院檢驗科，山東青島 266520)

·臨床檢驗技術(shù)研究·

焦磷酸測序快速檢測3種海洋性弧菌的方法學建立及創(chuàng)傷弧菌16S rRNA基因分型的研究

張麗娜1，鄭妍2，胡成進1，周月霞1，陳英劍1

(1.濟南軍區(qū)總醫(yī)院實驗診斷科，濟南 250031；2.青島慧康醫(yī)院檢驗科，山東青島 266520)

目的 建立一種海洋致病性弧菌的快速診斷方法，為海洋性弧菌感染的臨床檢測構(gòu)建新的技術(shù)平臺。方法 分別針對創(chuàng)傷弧菌vvhA，副溶血弧菌和溶藻弧菌的toxR基因設(shè)計擴增引物和測序引物，并PCR擴增特異性DNA片段，制備單鏈模板，進行焦磷酸測序，得到的堿基序列經(jīng)NCBI比對驗證；對創(chuàng)傷弧菌16S rRNA基因進行分型。結(jié)果 創(chuàng)傷弧菌的擴增引物和測序引物均表現(xiàn)出較好的特異性，4株創(chuàng)傷弧菌均擴增出167 bp大小的DNA片段，并且測序結(jié)果與NCBI比對達到100%匹配度，而其他菌株未見擴增條帶，測序結(jié)果為陰性；11株副溶血弧菌和溶藻弧菌均分別擴增出105 bp和134 bp大小的DNA片段，并且經(jīng)測序得到與預(yù)期相符的DNA堿基序列。4株創(chuàng)傷弧菌中1株屬于16S rRNA-A型，其余3株均屬于16S rRNA-B型。結(jié)論 本研究建立的PCR-焦磷酸測序方法是一種短核苷酸序列實時測定的新方法，具有高通量、精確、簡單易行的優(yōu)點，適用于海洋性致病菌及陸地感染細菌的快速精準鑒定。

海洋性弧菌；焦磷酸測序；快速診斷；聚合酶鏈式反應(yīng)

近年來海洋致病性弧菌已成為危害人類健康的重要病原菌之一，其感染進展迅速，可引起胃腸炎、菌血癥等，死亡率較高[1-2]?！?br>