成熟油菜種子RNA提取方法的改良

摘要 [目的]從成熟油菜種子中抽提出高質量的RNA。[方法]該研究通過將天根植物總RNA提取試劑盒與康為世紀植物總RNA提取試劑盒相結合，使用β-巰基乙醇抑制酚類物質氧化，DNA酶去除DNA，并采用吸附柱有效去除多糖類物質等措施，對油菜種子RNA的提取方法進行有效改進。[結果]采用該方法能提取出質量高且完整性好的RNA，可一次滿足后續分子生物學研究的要求。[結論]該研究提出了一種高效快捷的成熟油菜種子RNA提取方法。

關鍵詞 油菜；成熟種子；RNA提取

中圖分類號 S565.4 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2017）13-0143-02

Improvement of RNA Extraction Method from Mature Rapeseeds

GU Si-kai1，2，CHEN Gui-min2，ZHAO Wen-jun2，JI Li-lian1，2* et al

（1.College of Food Science and Engineering， Yangzhou University， Yangzhou， Jiangsu 225127；

2.Jiangsu Collaborative Innovation Center of Ragional Modern Agriculture and Enverinment Protection， Jiangsu Key Laboratory for Eco-agricultural Biotechnology around Hongze Lake， School of Life Science， Huaiyin Normal University， Huaian， Jiangsu 223300）

Abstract [Objective]To extract high quality RNA from mature rapeseeds.[Method]To improve the RNA extraction method of mature rapeseeds by using two RNA extraction kits， which include RNA plant plus reagent from TIANGEN and CW2598M from KANGWEI， meanwhile， adding β-mercaptoethanol to inhibit the oxidation of phenolic compounds and removing DNA by DNase， using the adsorption column to remove polysaccharides etc. [Result]This method can get RNA with high quality， which can satisfy the requirements of subsequent molecular biology research.[Conclusion]The study provides an efficient method for extracting RNA from mature rapeseeds.

Key words Rape；Mature seeds；RNA extraction

RNA提取技術不僅是分子生物學的重要組成部分，而且是功能基因組學的基礎[1]，提取高純度、高完整度的植物組織RNA是進行基因克隆、RNA序列分析、狹線雜交以及構建cDNA文庫研究的前提[2-3]。因此，如何快速高效地獲得高質量的RNA成為科研人員關注的問題。

油菜是世界四大油料作物之一，成熟油菜種子中含有大量的脂肪、蛋白質、色素、單寧、多酚等物質，豐富的多酚類物質在RNA提取過程中易形成沉淀并發生褐化反應，同時抑制酶的活性等[4-5]。目前已經報道的RNA提取方法主要包括Trizol法[6]、皂土法[7]、Licl-尿素法[8]、改進SDS法[9]及CTAB法[10]等，這些方法都具有一定的局限性，特別對于次級代謝產物豐富、油脂及蛋白含量較高的材料，在總RNA提取過程中往往存在褐化、降解、低純度等現象[4，11-12]。針對目前油菜種子RNA提取存在的問題，該研究在前期工作的基礎上[2]通過多次試驗探索，提出了一種高效快捷的油菜種子RNA提取方法。……