蛋白激酶C epsilon信號(hào)通路介導(dǎo)褪黑素抗H9C2細(xì)胞缺血再灌注損傷的機(jī)制研究

張 彬，翟蒙恩，李步瀠，劉振華，陳正希，余鵬飛，于立明，梁宏亮，段維勛，金振曉，俞世強(qiáng)

·基礎(chǔ)研究·

蛋白激酶C epsilon信號(hào)通路介導(dǎo)褪黑素抗H9C2細(xì)胞缺血再灌注損傷的機(jī)制研究

張 彬，翟蒙恩，李步瀠，劉振華，陳正希，余鵬飛，于立明，梁宏亮，段維勛，金振曉，俞世強(qiáng)

目的 探討褪黑素(Mel)在H9C2細(xì)胞缺血再灌注損傷過程中的保護(hù)作用及其機(jī)制，明確蛋白激酶C epsilon(PKCε)信號(hào)通路在此過程中的作用。方法 H9C2細(xì)胞經(jīng)Mel(100 μmol/L)預(yù)處理12 h后，接受模擬缺血再灌注(SIR)損傷(缺血45 min，再灌注4 h)，采用CCK-8法和TUNEL法分別檢測(cè)細(xì)胞活力和凋亡率，使用酶活性測(cè)定法檢測(cè)細(xì)胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的釋放量，使用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞膜PKCε、細(xì)胞質(zhì)PKCε、Bcl-2、Bax、Caspase-3和gp91phox蛋白的表達(dá)情況，并使用PKCε特異性阻斷劑εV1-2觀察PKCε信號(hào)通路在這一過程中發(fā)揮的作用。結(jié)果 經(jīng)SIR處理后，H9C2細(xì)胞活力顯著降低，凋亡率明顯增加，PKCε膜轉(zhuǎn)位減少，Bcl-2/Bax比例下調(diào)，Caspase-3與gp91phox蛋白表達(dá)量增加，細(xì)胞中MDA含量上升，SOD活力下降。Mel預(yù)處理可顯著提高SIR處理后H9C2細(xì)胞活力，降低細(xì)胞凋亡率，促進(jìn) PKCε膜轉(zhuǎn)位，上調(diào)細(xì)胞中SOD活性及降低MDA含量，并可降低Caspase-3與gp91phox蛋白表達(dá)量。而使用εV1-2阻斷PKCε信號(hào)通路可逆轉(zhuǎn)Mel的上述保護(hù)作用(均P<0.05)。 結(jié)論 Mel可通過激活PKCε保護(hù)性信號(hào)通路減輕SIR引起的H9C2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷與凋亡。

褪黑素；缺血再灌注損傷；蛋白激酶C epsilon；氧化應(yīng)激；凋亡

缺血性心臟病嚴(yán)重危害人類健康，其首要治療策略是及時(shí)恢復(fù)缺血心肌的血流灌注，然而血流再灌注易加重心肌組織結(jié)構(gòu)損傷及能量代謝障礙，誘發(fā)心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia/reperfusion injury, MI/RI)[1-2]。這種損傷可導(dǎo)致血流障礙、心功能異常、炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮細(xì)胞損傷、心肌細(xì)胞壞死和凋亡，是由多種觸發(fā)物、媒介物和效應(yīng)器共同參與的復(fù)雜生物反應(yīng)過程[3-4]。……