H9N2亞型禽流感病毒單克隆抗體的制備及其表位鑒定

劉曉婧 凌紅麗 蔣貽海 張園園 趙明 楊光烈 于春梅 薄宗義

摘要[目的]制備H9N2亞型禽流感病毒單克隆抗體和鑒定表位。[方法]選取H9N2亞型禽流感病毒（AIV）WD-1株的純化抗原免疫BALB/c小鼠，對獲得2株抗H9N2亞型禽流感病毒的特異性單抗4C10和6E3表位進行鑒定。[結果]單抗4C10和6E3分別屬于IgG1和IgG2b亞型，ELISA檢測效價分別為1∶103和1∶105；HI效價分別為215和214；2株單抗均具有雞胚中和活性。利用噬菌體展示表位技術對2株單抗的抗原表位進行鑒定，結果顯示均為針對HA 蛋白的1個線性表位。[結論]該研究為禽流感病毒快速診斷方法的建立提供了依據。

關鍵詞禽流感病毒；H9N2亞型；單抗；抗原表位

中圖分類號S852.4文獻標識碼A文章編號0517-6611（2017）10-0129-03

Preparation of H9N2 Subtype Avian Influenza Virus Antibodies and Epitope Identification

LIU Xiaojing， LING Hongli*， JIANG Yihai et al

（Qingdao Vland Biological Products Co. Ltd，Qingdao，Shandong 266114）

Abstract[Objective] To prepare H9N2 subtype avian influenza virus antibodies and identify epitope.[Method] The epitopes of two monoclonal antibodies （McAbs） specific to H9 subtype avian influenza virus （AIV） were identified by cell fusion with the BALB/c mice immunized with purified H9N2 AIV WD1. [Result]The 4C10 and 6E3 were belonged to IgG 1 and IgG 2b，repectively. The ELISA titers were 1∶103 and 1∶105. The HI titers in their ascites were 215 and 214. Two monoclonal antibodies had chicken embryo neutralizing activity. The antigen epitopes of two monoclonal antibodies were all linera epitopes targeting HA protein. [Conclusion] The study laid the foundation for the establishment of rapid diagnostic method of avian influenza virus.

Key wordsAvian influenza virus；H9N2 subtype；Monoclonal antibody；Antigen epitopes

禽流感（Avian Influenza，AI）是由A型流感病毒引起的一種禽類傳染病，感染動物表現出從呼吸系統到全身敗血癥等多種癥狀[1-2]。流行病學調查發現，目前對養殖業危害比較大的是H5和H9亞型禽流感。H9亞型禽流感病毒本身引起的死亡率較低，但能與其他病原混合感染易感動物，引起較高的死亡率，此外也有H9亞型禽流感病毒感染人的報道[3]。目前主要采取疫苗免疫和嚴格的生物安全措施來控制該病。鑒于H9亞型禽流感病毒對養禽業的危害及其在公共衛生學上的意義，加強對此亞型病毒的檢測和疫病防控迫在眉睫[4]。該研究選取了 H9N2亞型禽流感病毒WD-1株，制備了針對HA蛋白且具有中和活性的特異性單克隆抗體（McAbs）。利用噬菌體展示表位技術對其抗原保護決定簇進行鑒定[5]，以期獲得具有免疫保護功能的抗原表位。……