西地碘粉的急性毒性研究

李桂明 林樹乾 楊世發(fā) 傅劍 趙增成 黃中利 馮敏燕 逯月 商晶 李穎 宋敏訓(xùn)

摘要[目的]研究西地碘粉對小鼠的經(jīng)口急性毒性。[方法]選用清潔級ICR小鼠60只，采用寇氏法進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)，觀察小鼠西地碘粉急性中毒癥狀，并測定西地碘粉經(jīng)口給藥對小鼠的LD50。[結(jié)果]小鼠經(jīng)口給藥后的急性中毒癥狀主要包括：給藥后15 min，高劑量組小鼠出現(xiàn)精神沉郁，被毛粗亂無光，并逐漸轉(zhuǎn)入抑制，反應(yīng)遲鈍、不食、麻痹。0.5～1.0 h后有小鼠出現(xiàn)呼吸困難，伴隨脖頸伸直、食欲廢絕；3 h后開始出現(xiàn)死亡，小鼠死亡前出現(xiàn)驚厥、抽搐、震顫等神經(jīng)癥狀。急性死亡發(fā)生于給藥后3～24 h。中毒死亡后剖檢發(fā)現(xiàn)中毒癥狀主要表現(xiàn)為對肝臟的損傷，其次是肺和心臟。根據(jù)各劑量組死亡率，計(jì)算出西地碘粉對小鼠的急性經(jīng)口LD50為4 972.75 mg/kg.，其LD50 95%可信限為4 382.77～5 642.16 mg/kg。[結(jié)論]西地碘粉對小鼠的經(jīng)口LD50介于501～5 000 mg/kg，屬于低毒性藥物。

關(guān)鍵詞西地碘粉；小鼠；LD50

中圖分類號S851.36文獻(xiàn)標(biāo)識碼

A文章編號0517-6611（2017）10-0104-02

Study on the Acute Toxicity of Cydiodine Powder

LI Guiming1，2，LIN Shuqian1，YANG Shifa1，SONG Minxun1* et al （1.Poultry Institute， Shandong Academy of Agricultural Sciences， Jinan， Shandong 250023； 2.Shandong HaoTai Technology Pharmaceutical Co.， Ltd.， Jinan， Shandong 250023）

Abstract[Objective] To study the oral acute toxicity of cydiodine powder on mice.[Method] 60 cleanlevel ICR mice were selected to make acute toxicity test by using Korbor method.The acute toxicity symptoms of cydiodine powder on mice were observed， and its LD50 on mice by oral administration was determined.[Result]The acute toxicity symptoms of cydiodine powder on mice were as follows： after drug administration 15 min， mice in highdose group had depressed spirit， disordered clothing hair， slow response， paralysis and loss of appetite； After drug administration 0.5-1.0 h， mice had difficult breathing， accompanied by straight neck and loss of appetite； After drug administration 3 h， mice began to die and eclampsia， convulsion， tremor and other neural symptoms appeared before the death of mice.And the acute death occurred after drug administration 3-24 h.It was observed through autopsy that the main manifestation of poisoning symptoms was the damage to liver， followed by the damage to lung and heart.According to the death rate in each dose group， the acute oral LD50 of cydiodine powder on mice was 4 972.75 mg/kg， 95% confidence limit of LD50 was 4 382.77-5 642.16 mg/kg.[Conclusion]The oral LD50 of cydiodine powder on mice was between 501-5 000 mg/kg， belonging to low-toxicity drug.

Key wordsCydiodine powder；Mice；LD50

在眾多的消毒劑中，碘制劑因其消毒效果好、毒副作用低、刺激性小、無殘留[1-2]以及無生態(tài)毒性等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用。其中，聚維酮碘和季銨鹽碘目前已在臨床上廣泛使用[3]。但是，有機(jī)絡(luò)合碘制品有效碘釋放率較低、環(huán)境消毒成本高，制約了其在獸醫(yī)臨床上的推廣應(yīng)用[4]。西地碘粉是山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院與山東昊泰科技藥業(yè)有限公司于2010年研發(fā)的具有超分子結(jié)構(gòu)的消毒劑，具有有效碘含量高、質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。筆者選用60只清潔級ICR小鼠，采用寇氏法進(jìn)行了西地碘粉的急性毒性研究。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

清潔級健康ICR小鼠60只，體重18～22 g，雌雄各半，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號為SCXK（蘇）2012-0004，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號為SYXK（蘇）2012-0029。小鼠飼喂經(jīng)60Co照射的飼料，自由采食和飲水，飲用水為符合城市飲用水標(biāo)準(zhǔn)的自來水。試驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房環(huán)境中適應(yīng)飼養(yǎng)3 d，經(jīng)口給藥前停飼12 h，不限制飲水。

小鼠飼糧的主要營養(yǎng)水平如下：水分≤10%，粗蛋白≥18%，粗脂肪≥4%，粗纖維≥5%，粗灰分≤8%，鈣1.0%～1.8%，磷0.6%～1.2%。

1.1.2受試藥物及溶液配制。

受試藥物為西地碘粉，批號為20150701，由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所提供。臨用前用超純水配制成所需濃度的溶液。

1.1.3受試藥物的給藥方法。

給藥途徑為經(jīng)口給藥，小鼠給予受試藥物用量為0.02 mL/g。給藥前禁飼12 h，不限制飲水，給藥后3 h飼喂。

1.2試驗(yàn)方法 采用寇氏（Korbor）法[5]進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)。

1.2.1預(yù)試驗(yàn)。每組4只小鼠（雌雄各半）進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，測定4/4致死劑量（b）和0/4致死劑量（a）。通過預(yù)試驗(yàn)測得受試藥物對小鼠的0/4致死劑量為3 000 mg/kg，4/4致死劑量為9 000 mg/kg。

1.2.2正式試驗(yàn)。

1.2.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的稱重、標(biāo)記、編號和分組。

清潔級健康ICR小鼠60只，采用完全隨機(jī)法分為6組，每組10只，雌雄各半，雄、雌動(dòng)物分開進(jìn)行正式試驗(yàn)，分別對雄、雌小鼠進(jìn)行編號、標(biāo)記及稱重。

1.2.2.2受試藥物溶液的配制。

按“1：K系列稀釋法”等容量配制各劑量組所需的受試藥物溶液，根據(jù)設(shè)計(jì)的試驗(yàn)劑量，按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予受試藥物的體積要求，首先確定最大劑量組所需配制的受試藥物溶液濃度C1（150 mg/mL）以及各劑量組所需受試藥物溶液的體積m（6 mL）。

受試藥物母液應(yīng)配制的濃度C為150 mg/mL，配制的體積M（mL）按下列公式進(jìn)行計(jì)算：

M=m1-K=6/（1-1/1.25） =30.42（mL）

式中，K為各組劑量的比值，K=1/r。

根據(jù)母液濃度及體積，計(jì)算需稱取的受試藥物量為4 562.54 mg。

稱取受試藥物562.54 mg，置于燒杯內(nèi)，加入選定的溶劑溶解，轉(zhuǎn)入容量瓶內(nèi)，充分混勻并定容，即獲得濃度C=C1的受試物母液。從受試物母液中取出供最大劑量組給藥用的溶液體積m，向原溶液中加入同體積的溶劑，混勻后溶液濃度為C1×K，正好是次高劑量組所要求的劑量濃度C2；從中取出供第2組給藥用的溶液體積m，再加入相同體積的溶劑，混勻后溶液濃度為C2×K，正好是第3組所要求的劑量濃度C3，依此類推，配制出各劑量組所需濃度及體積的受試藥物溶液。

1～6組受試藥物的經(jīng)口給藥劑量依次為3 000.00、3 737.19、4 655.54、5 799.55、7 224.67和9 000.00 mg/kg。

1.2.2.3給藥方法。根據(jù)各組小鼠體重，計(jì)算應(yīng)給予受試藥物的體積。按照“1.1.3”方法經(jīng)口給予受試藥物。

1.2.2.4癥狀觀察。給藥結(jié)束后，每天2次觀察小鼠的一般狀況，包括體重、精神狀態(tài)、毛色、自主活動(dòng)、呼吸、飲食欲、糞便、口鼻分泌物、中毒癥狀和死亡情況。對觀察期間死亡小鼠進(jìn)行大體解剖學(xué)檢查，并記錄全部大體病理變化，連續(xù)觀察14 d。試驗(yàn)結(jié)束后將存活小鼠處死，觀察剖檢癥狀。

1.2.3數(shù)據(jù)計(jì)算。采用寇氏法按照以下公式計(jì)算LD50及其95%可信限：

LD50=log-1[Xm-i（p-0.05）]

當(dāng)不含0%和100%死亡率時(shí)，按照以下公式計(jì)算LD50：

LD50=log-1[Xm-i（p-3-Pm-Pn4）]

Sx50=ipqn

LD50 的95%可信限=log-1（logLD50±1.96×Sx50）

式中，i為組距，即相鄰2組劑量對數(shù)劑量之差；Xm為最大劑量對數(shù)；P為各劑量組死亡率（死亡率均用小數(shù)表示）；

Pm為最高死亡率；q為各組劑量存活率，q=1-p；Pn為最低死亡率；∑p為各劑量組死亡率之和；

n為各組動(dòng)物數(shù)；Sx50為logLD50的標(biāo)準(zhǔn)誤。

2結(jié)果與分析

2.1中毒癥狀

小鼠經(jīng)口給藥后30 min，高劑量組小鼠出現(xiàn)精神沉郁，被毛粗亂無光，并逐漸轉(zhuǎn)入抑制，反應(yīng)遲鈍、不食、麻痹，紫紺。1.5 h后有小鼠出現(xiàn)呼吸困難伴隨脖頸伸直、食欲廢絕，3 h后開始出現(xiàn)死亡，小鼠死亡前出現(xiàn)驚厥、抽搐、震顫等神經(jīng)癥狀。急性死亡發(fā)生于給藥后3～24 h。中毒死亡后進(jìn)行剖檢，中毒癥狀主要表現(xiàn)為對肝臟的損傷，其次是肺和心臟。肝臟的主要變化包括表面有出血點(diǎn)、淤血、水腫和呈黃褐色等，肺的主要病理變化為表面淤血水腫等，心臟的主要病變?yōu)樾募☆伾兊?/p>

2.2急性經(jīng)口LD50

急性毒性試驗(yàn)是指1 d內(nèi)對動(dòng)物單次或多次給藥，連續(xù)觀察給藥后動(dòng)物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及死亡情況的試驗(yàn)方法。經(jīng)口（注射）一次性或24 h內(nèi)多次給予受試藥物后，在短時(shí)間內(nèi)觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，引起半數(shù)致死的劑量稱為半數(shù)致死劑量，通常用LD50表示。通過試驗(yàn)測得受試藥物對小鼠的急性經(jīng)口LD50為4 972.75 mg/kg，其LD50 95%可信限為4 382.77～5 642.16 mg/kg。由此可見，受試藥物對小鼠的經(jīng)口LD50介于501～5 000 mg/kg，屬于低毒。

柳占彪等[8]對碘伏的毒性進(jìn)行了研究，結(jié)果小鼠的LD50大于5 000 mg/kg，屬于實(shí)際無毒。蓄積系數(shù)均大于5，為弱蓄積作用。慢性毒性試驗(yàn)的最大無作用劑量為1 000 mg/kg。根據(jù)動(dòng)物的急毒試驗(yàn)和慢性積蓄性毒理試驗(yàn)結(jié)果，可以看出活性碘的安全性以及潛在的開發(fā)價(jià)值，尤其在慢性積蓄毒理試驗(yàn)過程中無機(jī)碘和活性碘同樣未表現(xiàn)出對肝、腎、睪丸等的直接毒性結(jié)果[9]。碘的使用濃度為50 mg/L，按畜禽最小體重（雛雞） 50 g計(jì)算，需灌服5 L才能達(dá)到LD50；按成年人50 kg體重計(jì)算，需口服24.86 kg才能達(dá)到LD50，由此可見其在臨床用量中安全無毒。

3結(jié)論

小鼠經(jīng)口給藥后的急性中毒癥狀主要包括：給藥后15 min，高劑量組小鼠出現(xiàn)精神沉郁，被毛粗亂無光，并逐漸轉(zhuǎn)入抑制，反應(yīng)遲鈍、不食、麻痹。0.5～1.0 h后有小鼠出現(xiàn)呼吸困難伴隨脖頸伸直、食欲廢絕，3h后開始出現(xiàn)死亡，小鼠