黃芩提取工藝的優(yōu)化

閆久江

摘 要：本實驗以黃芩苷為指標(biāo)對黃芩提取工藝進行優(yōu)化。含量測定方法：色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）；檢測波長為278nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：35℃。黃芩苷對照品在50～400μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。黃芩苷平均回收率分別為99.5%。最佳提取工藝為加入10倍量水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)提取2次。測定方法簡便、準(zhǔn)確，可用于黃芩提取膏的含量測定；本工藝穩(wěn)定、可行、收率高。

關(guān)鍵詞：黃芩；提取；工藝

黃芩為唇形科植物黃芩（Scutellaria baicalensis Georgi），具有清熱燥濕，涼血安胎，解毒等功效。《藥性論》記載：“能治熱毒，骨蒸，寒熱往來，腸胃不利，破壅氣，治五淋，令人宣暢，去關(guān)節(jié)煩悶，解熱渴，治熱腹中疞痛，心腹堅脹。”黃芩主要用于上呼吸道感染、肺炎、痢疾、咳血、肺熱咳嗽、濕熱黃膽、胎動不安、高血壓等癥的治療。黃芩具有抗氧化、抗菌、降壓、抗真菌、抗腫瘤、降血脂、抗血小板聚集、抗癌、保肝、利膽、抗炎、解熱等作用[1-5]。黃芩含有黃芩苷、漢黃芩甙、黃芩黃酮（skullcapflavone）、二氫木蝴蝶素A（dihydrooroxylin A），白楊素（chrysin）、黃芩素、漢黃芩素等成分。黃芩苷為黃芩主要有效成分之一。本實驗以黃芩苷為指標(biāo)對黃芩提取工藝進行研究。

1 儀器與試藥

UV1600紫外可見分光光度計（西安華辰樂天實驗室設(shè)備有限公司）； EX1600四元低壓梯度液相色譜儀（南京皓而普分析設(shè)備有限公司）； FA1204CFAC型全自動內(nèi)校電子分析天平（北京同德創(chuàng)業(yè)科技有限公司）；美國必能信超聲波清洗機（北京星越天成科技有限公司）；HH-601超級恒溫水浴鍋（常州市華怡儀器制造有限公司）；實驗室用高純水制備器（北京科譽興業(yè)科技發(fā)展有限公司）。黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）。乙腈（南京大唐化工有限公司）；甲醇（北京亞太龍興化工有限公司）；乙醇（北京亞太龍興化工有限公司）；磷酸（廣州市西隴化工有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 單因素考察

2.1.1 提取次數(shù)

取黃芩原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，置蒸制容器內(nèi)隔水加熱，蒸制半小時，取出，趁熱切薄片，干燥。取炮制后黃芩片，精密稱定，至于圓底燒瓶內(nèi)，分別提取四次，第一次加10倍水，煎煮提取60分鐘，過濾，合并濾液，減壓濃縮；第二次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)提取兩次，過濾，合并濾液，減壓濃縮；第三次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)提取三次，過濾，合并濾液，減壓濃縮。第四次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)提取四次，過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中黃芩苷含量并計算黃芩苷收率。

2.1.2 加水倍數(shù)

取黃芩原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，置蒸制容器內(nèi)隔水加熱，蒸制半小時，取出，趁熱切薄片，干燥。取炮制后黃芩片，精密稱定，至于圓底燒瓶內(nèi)，分別提取四次，第一次加14倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)四次，第二次加12倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)四次，第三次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)四次，第四次加8倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)四次，分別過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中黃芩苷含量并計算黃芩苷收率。

2.1.3 提取時間

取黃芩原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，置蒸制容器內(nèi)隔水加熱，蒸制半小時，取出，趁熱切薄片，干燥。取炮制后黃芩片，精密稱定，至于圓底燒瓶內(nèi)，分別提取三次，第一次加10倍水，煎煮提取30分鐘，連續(xù)四次，第二次加10倍水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)四次，第三次加10倍水，煎煮提取90分鐘，連續(xù)四次，分別過濾，合并濾液，減壓濃縮。采用高效液相測定濃縮膏中黃芩苷含量并計算黃芩苷收率。

2.2 正交試驗設(shè)計

實驗結(jié)果表明，提取次數(shù)、加水倍數(shù)和提取時間對黃芩苷收率影響較大。選擇提取次數(shù)、加水倍數(shù)和提取時間作為考察因素，采用正交試驗法對影響提取效率的其它工藝條件進行優(yōu)選。采用3個考察水平，用L9（34）正交表進行試驗，因素水平表見表1。

3 含量測定

3.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻及考查的結(jié)果 ，確定色譜條件如下。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相為甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）；檢測波長為278nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：35℃。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算應(yīng)不得低于2000。

3.2 供試品溶液的制備

取提取膏適量，精密量取，至于25毫升容量瓶內(nèi)，用70%乙醇超聲溶解，放置室溫，用70%乙醇定容，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

3.3 對照品溶液的制備

分別精密稱取黃芩苷對照品5mg，置100mL容量瓶中，用70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

將濃度為50μg/ml，100μg/ml，150μg/ml，200μg/ml，250μg/ml，300μg/ml，350μg/ml，400μg/ml的對照品溶液分別吸取20μL注入HPLC，以進樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試驗表明，黃芩苷對照品在50～400μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5 回收率試驗

取已知含量的同一批供試品各6份，分別精密添加一定量的黃芩苷對照品，測定含量，計算回收率。平均回收率為99.5%，RSD為0.73%。

4 實驗結(jié)果

按照L9（34）正交設(shè)計表條件進行試驗，得到最佳提取工藝為加入10倍量水，煎煮提取60分鐘，連續(xù)提取2次。本工藝穩(wěn)定、可行、收率高。

參考文獻

[1]唐雪陽，許舒婭，盧廣英，趙麗敏，張璐，李煥娟，李鋼，孫雅姝，溫靜，彭平，孫道涵，馮朵，楊元，石任兵.黃芩的黃酮類化學(xué)成分及其藥理作用研究進展[A].中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥化學(xué)分會第九屆學(xué)術(shù)年會論文集（第一冊）[C].2014.

[2]侯華新，黎丹戎，秦箐，張瑋，邱莉，吳華慧，SorenBroggerChristensen.黃芩黃酮A對人肝癌細胞7402的抑制能力及體外增效作用[J].中國臨床藥學(xué)雜志，2000（03）.

[3]王喆明，吳再旺，王璇，蔡少青，錢瑞琴.不同產(chǎn)地、生長方式黃芩的藥效比較研究[A].第六屆全國中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)理論研究學(xué)術(shù)研討會暨第二屆湖南省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會肝病專業(yè)學(xué)術(shù)年會論文集[C].2010.

[4]張金玲，陳蘭秀.試論中藥黃芩的藥理及臨床應(yīng)用[A].2004年全國中藥研究暨中藥房管理學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C].2004.

[5]劉玉萍，Purusotam Basnet，小松かつ子，曹暉.黃芩清除自由基活性與黃芩苷含量的相關(guān)性研究[J].中國中藥雜志，2002（08）.