PMA結合ddPCR檢測食品中金黃色葡萄球菌的研究

趙麗青， 王 靜， 秦 燕 ， 賈俊濤， 姜英輝， 唐 靜， 張 健

(1.山東出入境檢驗檢疫局，山東 青島 266002；2.威海出入境檢驗檢疫局，山東 威海 264200)

PMA結合ddPCR檢測食品中金黃色葡萄球菌的研究

趙麗青1， 王 靜2*， 秦 燕2， 賈俊濤1， 姜英輝1， 唐 靜1， 張 健1

(1.山東出入境檢驗檢疫局，山東 青島 266002；2.威海出入境檢驗檢疫局，山東 威海 264200)

研究了將疊氮溴化丙錠(PMA)與微滴式數字PCR(ddPCR)技術相結合，用于金黃色葡萄球菌活菌的檢測。結果表明，強烈光照15 min，可以使PMA與死菌DNA共價交聯，同時鈍化游離的PMA；可以有效抑制金黃色葡萄球菌死菌DNA PCR擴增的PMA終濃度為2.0 μg/mL；不抑制活菌DNA擴增的PMA最高濃度是5.0 μg/mL。在不同死、活菌比例下，PMA-ddPCR可以定量檢測活菌，避免了死菌DNA的干擾，本方法的檢出限為10 copy/20 μL。利用PMA-ddPCR檢測人工污染雞肉樣品，最低可檢出102cfu/mL的金黃色葡萄球菌。表明PMA-ddPCR方法的靈敏度高。

疊氮溴化丙錠；微滴式數字PCR；金黃色葡萄球菌

金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,SA)廣泛分布于自然界，是一種重要的人畜共患病病原菌。傳播途徑較多，對人類的安全構成威脅。食品中的SA在一定條件下可以產生腸毒素，從而導致食物中毒。至今，已有多起牛奶及奶制品污染SA的事件報道[1]。因此，對SA進行檢測十分重要，而檢測的關鍵是食品中活菌是否存在和如何準確定量的問題。為檢測食品中的SA，國內外常見的微生物定量方法有平板計數法、磷酸酶活性定量法、MPN-PCR法等，這些方法耗時、費力，不能滿足快速檢測的需要。因此，開發定量檢測活菌的方法非常必要。本研究將基于核酸共價交聯技術從分子水平尋找細菌活的狀態的標志物，建立活菌的檢測方法。……