家蠶二分濃核病毒ns1基因序列的改造、表達和鑒定

徐 五, 周 倩, 胡朝陽, 李國輝, 姚 勤

(江蘇大學 生命科學研究院, 江蘇 鎮江 212013)

家蠶二分濃核病毒ns1基因序列的改造、表達和鑒定

徐 五, 周 倩, 胡朝陽, 李國輝, 姚 勤*

(江蘇大學 生命科學研究院, 江蘇 鎮江 212013)

探討翻譯起始區(TIR)部分密碼子發生同義突變后，對家蠶二分濃核病毒(BmBDV)ns1基因表達的影響，以及對BmBDV NS1蛋白毒性進行鑒定，設計特異性上游引物，對BmBDVns1基因中第3、4、9和10個密碼子進行同義突變，利用原核表達系統對野生型和改造后的ns1序列進行表達，通過SDS-PAGE電泳對這兩種序列的表達產量進行分析。利用ProteinIsoTMGST Resin從超聲破碎的菌液上清中純化融合有GST的NS1蛋白，進而對純化的靶蛋白在細胞水平和家蠶體內進行毒性分析。結果表明：TIR突變后的BmBDVns1 序列，其與野生型序列的表達產量之間沒有明顯差異；BmBDV NS1蛋白具有抑制細胞增殖和誘導家蠶致死的生化活性。

翻譯起始區；家蠶二分濃核病毒；NS1蛋白；表達；鑒定；毒性

家蠶二分濃核病毒(BmBDV)是一種單鏈DNA病毒，含有兩個線性的單鏈基因組片段VD1(6 543 nt)和VD2(6 022 nt)，分別被包裝入不同的核衣殼中[1-2]。該病毒特異性地感染家蠶中腸柱狀上皮細胞，并在家蠶群體間進行交叉感染，導致家蠶群體爆發濃核病癥，給蠶桑養殖戶帶來較大的經濟損失[3]。家蠶二分濃核病毒編碼一個以蛋白質為引物的B家族 DNA 聚合酶(pPolB)，與腺病毒、φ29 DNA聚合酶同源，同屬于以蛋白為引物的DNA聚合酶B家族，Peter and Max 曾推測BmBDV采用類似腺病毒的DNA復制方式[4-5]，但BmBDV感染和增殖的具體分子機制尚不清楚；另外，Li等[3]曾報道BmBDV編碼的非結構蛋白NS1具有解旋酶、ATPase酶及特定DNA序列結合的活性，與病毒DNA復制、基因轉錄以及與宿主間的相互作用等生化活動密切相關。……